不同药剂对松材线虫及阿苏里伞滑刃线虫的室内毒力测定

夏彦飞,周家菊,王琼伟,张圆圆,李志坤

(河南科技大学 林学院,河南 洛阳 471023)

不同药剂对松材线虫及阿苏里伞滑刃线虫的室内毒力测定

夏彦飞,周家菊,王琼伟,张圆圆,李志坤

(河南科技大学 林学院,河南 洛阳 471023)

采用浸渍法在室内测定了在不同质量浓度和时间处理下4种化学药剂对松材线虫、阿苏里伞滑刃线虫的毒力。结果表明：阿维·苏云菌对这两种线虫的毒力最强,其最高浓度(50.00 g/L)处理松材线虫和阿苏里伞滑刃线虫48 h后,线虫的死亡率分别达85.67%、95.00%,半致死浓度(LC50)分别是20.80、12.88 g/L；克百威·敌和丁硫·毒死蜱对两种线虫也具有一定的毒力。

杀线虫剂;植物寄生线虫;毒力测定;死亡率;LC50值

线虫又称蠕虫,属动物界线虫动物门,其中对农林业生产造成巨大损失的线虫被称为植物寄生线虫或植物线虫。自1982年松材线虫病在南京首次被报道后,其陆续蔓延到我国江苏、浙江、安徽、福建等15个省(直辖市、自治区)[1-2]。截至2006年,松材线虫在浙江省为害的林业面积超过了23000 hm2,造成大约5000万株树木被砍伐,不仅给国民经济造成了巨大的损失,而且对自然景观、生态环境以及我国松林资源库构成了严重的威胁[3]。植物寄生线虫的防治方法有生物防治、化学防治、农业防治、作物抗性等,但在现阶段,对植物线虫的防治仍然采用化学防治为主、其它方法为辅的策略。本研究选用目前洛阳市场上销售的4种杀线虫剂,在室内离体条件下,利用药剂浸渍法对松材线虫、阿苏里伞滑刃线虫分别进行了毒力测定,以期为林业植物线虫病害的防治提供参考。

1 材料与方法

1.1 供试药剂

阿维·苏云菌可湿性粉剂(阿维菌素含量为0.1%;苏云金杆菌含量为100亿活芽孢/g)，由威海韩孚生化药业有限公司生产;阿维纳米·线虫丹颗粒剂(马拉硫磷含量为3%;阿维菌素含量为2%)，由山东百士威农药有限公司生产;克百威·敌颗粒剂(克百威含量为1.5%;敌百虫含量为1.5%)，由汝州市试剂厂生产;丁硫·毒死蜱颗粒剂(丁硫克百威含量为1%;毒死蜱含量为4%)，由绍兴天诺农化有限公司生产。上述4种药剂均购于洛阳市关林农药市场。在本研究中，处理线虫所用药剂的质量浓度如下:阿维·苏云菌10.00、12.50、16.67、25.00、50.00 g/L;其余3种药剂12.50、16.67、25.00、50.00、100.00 g/L。

1.2 线虫的收集

供试线虫为松材线虫(Bursaphelenchusxylophilus)、阿苏里伞滑刃线虫(B.arthuri),均保存在本实验室中。分别将松材线虫、阿苏里伞滑刃线虫接种在长满灰葡萄孢(Botrytiscinerea)菌丝体的马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)上,在25 ℃恒温培养箱中培养8～10 d,至菌丝体完全消失后,放入4 ℃冰箱待用。采用贝曼漏斗分离法收集这两种线虫,对收集的线虫分别用3% H2O2进行表面消毒5 min，然后用ddH2O清洗至少3次,此时线虫为实验所用线虫。

1.3 不同药剂对线虫毒力的测定

采用Giannakou等的浸渍法[4](略加改进)测定药剂对线虫的毒力。具体步骤如下:吸取2 mL待测药液,放入直径6 cm的凹面皿中,然后在每皿中挑入50条经表面消毒的线虫,置于25 ℃恒温培养箱中分别处理12、24、36、48 h；最后于解剖镜下利用针刺触碰法判断线虫的死活情况,用下式计算死亡率(%)：死亡率=死亡线虫数/处理线虫数×100%。每一质量浓度的药剂处理重复3次,以ddH2O处理为对照。

1.4 数据处理

用SPSS(SPSS Inc., Illinois, USA)统计软件对所得实验数据进行分析。计算不同药剂的毒力回归方程y=ax+b(y代表线虫的死亡率,x代表药剂质量浓度的常用对数)、药剂的致死中浓度LC50值(Lethal Concentration 50 value)及相关系数R。

2 结果与分析

2.1 4种药剂对松材线虫的毒力

从表1可以看出：4种药剂处理松材线虫后,呈现出不同的毒力效果,获得最好效果的是阿维·苏云菌,其次是克百威·敌和丁硫·毒死蜱,最差的是阿维纳米·线虫丹；线虫的死亡率随着处理时间的延长和药剂质量浓度的增加而增加,阿维·苏云菌5个浓度梯度从低到高处理线虫48 h后,线虫的死亡率分别为23.67%、28.00%、42.33%、55.67%、85.67%;克百威·敌和丁硫·毒死蜱最高质量浓度处理松材线虫48 h后,线虫的死亡率分别为23.33%、15.67%；而阿维纳米·线虫丹在最高浓度最长时间处理下,都没有呈现出毒杀松材线虫的作用。

如表2所示,阿维·苏云菌对松材线虫的LC50值随着处理时间的延长而越来越小,依次为59.29、40.55、25.94、20.80 g/L。

表1 4种药剂对松材线虫的杀线率

注：表中数据为3次独立实验的平均值±标准误。

2.2 4种药剂对阿苏里伞滑刃线虫的毒力

4种药剂处理阿苏里伞滑刃线虫后,防效最好的依然是阿维·苏云菌,其5个浓度梯度从低到高处理线虫48 h后,线虫的死亡率分别为37.00%、47.33%、65.67%、75.67%、95.00%;克百威·敌、阿维纳米·线虫丹、丁硫·毒死蜱这3种药剂只在设置的最高质量浓度(100.00 g/L)下才表现出一定的毒性,处理48 h后线虫的死亡率分别为11.33%、12.00%、14.67%(表3)。此外，阿苏里伞滑刃线虫的死亡率也随着处理时间的延长和药剂质量浓度的增加而增加。

由表4可见,阿维·苏云菌对阿苏里伞滑刃线虫的LC50值同样随着处理时间的延长而下降,从高到低依次为22.39、18.84、14.96、12.88 g/L。

表2 阿维·苏云菌在不同时间对松材线虫的毒力

表3 4种药剂对阿苏里伞滑刃线虫的杀线率

注：表中数据为3次独立实验的平均值±标准误。

表4 阿维·苏云菌在不同时间对阿苏里伞滑刃线虫的毒力

3 结论与讨论

本研究结果表明：在4种供试化学药剂中,阿维·苏云菌对松材线虫和阿苏里伞滑刃线虫都表现出了较强的毒性,50.00 g/L质量浓度处理48 h后，这两种线虫的死亡率分别达85.67%、95.00%,其LC50值分别为20.80、12.88 g/L;克百威·敌和丁硫·毒死蜱对两种线虫也具有一定的毒力,但用其最高浓度(100.00 g/L)处理48 h后,线虫的死亡率都没有超过25%,其中对松材线虫的死亡率分别是23.33%、15.67%,对阿苏里伞滑刃线虫的死亡率分别为11.33%、14.67%。阿维纳米·线虫丹仅对阿苏里伞滑刃线虫有毒性,但是其最高浓度处理48 h后,线虫的死亡率仅仅为12.00%。虽然松材线虫和阿苏里伞滑刃线虫都隶属于伞滑刃线虫属,但是对同一药剂的敏感性不一致,说明在近似种之间的抗药性存在一定的差异。

许多专家学者对林业植物线虫病害进行了大量研究,如林茂松等研究表明2%阿维菌素乳油能有效地防止松材线虫的侵染,药剂的持续期为2年[5];安玉兴等研究发现16%虫线清能杀死板材和方木中的松材线虫[6];李桥等发明的以甲维盐、阿维菌素、啶虫脒为主要成分的注干药剂对松材线虫的防治效果可达80%以上[7];来燕学等筛选出以甲维盐和阿维菌素为主要成分的树干注射剂，其能有效地预防松材线虫病的发生和蔓延[8-9];嘧啶氧磷和天维菌素也都对松材线虫表现出了较强的毒性[10-11]。在本研究中,阿维·苏云菌药剂对松材线虫和阿苏里伞滑刃线虫都呈现出了较高的毒性,但是其LC50值略高,可能的原因是本实验中使用的药剂都是商品化的试剂,同一品名的药剂由于农药生产厂家不同,其有效成分含量有可能不一样;另外,大部分关于毒力测定的研究使用的药剂都是原药,纯度较高,也没有填料的影响,所以其LC50值比本实验中计算出的LC50低。其它3种药剂对线虫毒性较弱或者没有毒性,估计是药剂本身的作用机理造成的。在实际生产中,所用的药剂都是商品化的药剂,因此,本研究结果可为林业植物寄生线虫的针对性防治提供参考。有关药剂的林间防效和使用技术有待于进一步研究。

[1] 程瑚瑞,林茂松,黎伟强,等.南京黑松上发生的萎蔫线虫病[J].中国森林病害,1983(4):1-5.

[2] 国家林业局.国家林业局公告(2016年第8号)(2016年松材线虫病疫区公告)[EB/OL].(2016-04-08) [2017-03-24]. http://www.forestry.gov.cn/main/3600/content-863113.html.

[3] Zhao B G, Futai K, Sutherland J R, et al. Pine wilt disease [M]. Japan: Springer, 2007: 18-26.

[4] Giannakou I O, Karpouzas D G, Anastasiades I, et al. Factors affecting the efficacy of non-fumigant nematicides for controlling root-knot nematodes [J]. Pest Manag Sci, 2005, 61(10): 961-972.

[5] 林茂松,周明国.2%阿维菌素乳油对松材线虫的生物活性测定[J].农药学学报,2001,3(3):40-44.

[6] 安玉兴,徐汉虹,黄继光,等.16%虫线清乳油对松木中松材线虫的灭杀活性[J].农药,2009,48(8):614-616.

[7] 李桥,张绍勇,仇辉康,等.6种药剂林间注干施药防控松材线虫效果分析[J].浙江农林大学学报,2016,33(4):718-723.

[8] 来燕学,池树友,王亚红,等.杀灭松材线虫的高效药物筛选与毒性测定[J].浙江农林大学学报,2011,28(3):479-485.

[9] 来燕学,何月秋,池树友,等.高效松材线虫病预防注射药剂配制与林间药效研究[J].江西农业大学学报,2016,38(5):871-878.

[10] 洪森,王新荣,徐汉虹.嘧啶氧磷对松材线虫的有效杀线活性[J].广东林业科技,2014,30(1):26-30.

[11] 杨波,张绍勇,陈振,等.新化合物天维菌素的杀虫杀螨活性[J].农药学学报,2016,18(1):124-129.

[12] 周慧,李培征,陈施明,等.6种杀虫剂对康瘿蚊幼虫室内毒力测定及田间药效试验[J].南方农业学报,2015,46(2):260-264.

(责任编辑:黄荣华)

Test for Indoor Toxicity of Different Nematicides againstBursaphelenchusxylophilusandBursaphelenchusarthuri

XIA Yan-fei, ZHOU Jia-ju, WANG Qiong-wei, ZHANG Yuan-yuan, LI Zhi-kun

(Forestry College, Henan University of Science and Technology, Luoyang 471023, China)

The indoor toxicities of different mass concentrations of 4 chemical nematicides againstBursaphelenchusxylophilusandBursaphelenchusarthuriwere tested by using dipping method. The results showed that: Abamectin·Bacillusthuringiensishad the strongest toxicity to these two nematode species, the mortality ofB.xylophilusandB.arthurireached 85.67% and 95.00% respectively 48 h after being treated with the highest concentration (50.00 g/L) of this nematicide, and their medial lethal concentration was 20.80 and 12.88 g/L separately; Carbofuran·Trichlorfon and Carbosulfan·Chlorpyrifos also had a certain toxicity to these two nematode species.

Nematicide; Plant parasitic nematode; Toxicity test; Mortality; Medial lethal concentration

2017-05-07

国家自然科学基金项目(31201558);河南科技大学博士启动基金项目(09001590)。

夏彦飞(1980─),男,安徽人,博士,主要从事植物线虫病害防治工作。

S481.9

A

1001-8581(2017)09-0080-04