桑芪首乌片对自发性高血压大鼠的降压作用和肾素-血管紧张素系统的影响*

陈 斌程馨缘魏丹霞△陈 鹏顾力华杨 晖

（1.昆明市中医医院，云南 昆明 650500；2.昆明医科大学药学院暨云南省天然药物药理重点实验室，云南 昆明 650500；3.昆明医科大学生物医学工程研究中心，云南 昆明 650500）

桑芪首乌片对自发性高血压大鼠的降压作用和肾素-血管紧张素系统的影响*

陈 斌1程馨缘1魏丹霞1△陈 鹏2顾力华1杨 晖3

（1.昆明市中医医院，云南 昆明 650500；2.昆明医科大学药学院暨云南省天然药物药理重点实验室，云南 昆明 650500；3.昆明医科大学生物医学工程研究中心，云南 昆明 650500）

目的 观察桑芪首乌片对高血压大鼠的降压作用并探讨其机制。方法 SHR大鼠60只，随机分为低、中、高3个剂量实验组，卡托普利组、复方丹参组和空白对照组，每组10只。同时10只SD大鼠为正常对照组。采用无创尾动脉血压测量系统监测受试后24 h、7 d、14 d、21 d、35 d和给药结束1周测量血压，同时测定给药后7 d、14 d、35 d及停药后7 d血浆BK、AngⅠ、AngⅡ水平变化情况。结果 各给药组收缩压与正常对照组与空白对照组差异均有统计学意义（P<0.05），但各组之间比较差异无统计学差异（P>0.05）。给药后，各观察组血浆AngⅠ、AngⅡ水平明显低于空白对照组（P<0.05）。给药后，各观察组BK水平明显高于空白对照组（P<0.05）。结论 本研究表明，桑芪首乌片可明显降低SHR大鼠血浆AngⅠ、AngⅡ水平，上调SHR大鼠血浆BK水平，提示桑芪首乌片作用有可能通过抑制肾素转化AngⅠ，拮抗机体ACE的活性，减少AngⅡ的生成而发挥作用，对RAS的作用具有多途径、多环节、多靶点的综合影响。

桑芪首乌片 高血压 肾素血管紧张素系统 动物实验

高血压是多种心、脑血管疾病的重要病因和危险因素，其发展易导致重要脏器如心、脑、肾的器质病变和功能损害。因发病机理至今尚未详尽，故寻求有效的防治手段仍是高血压研究的核心。中药复方制剂降压具有平稳降压、改善症状、保护靶器官、减少危险事件、提高生活质量、预防并发症、联用西药减量减毒增效等多种有效综合、协同增效的作用［1-2］。肾素-血管紧张素系统（RAS）在高血压病的发生发展中密切相关，是高血压研究的重要环节。云南省名誉名中医陆家龙主任医师长期从事心脑血管疾病的中医临床工作，其潜心研究的经验方“桑芪首乌汤”具有滋补肝肾、平抑肝阳、活血通络的作用［3-4］。本实验在临床行之有效的经验方基础上经整理优化形成固定剂型——桑芪首乌片 （专利号201610148818.7），观察其降压作用和对RAS的影响，以进一步探讨桑芪首乌片降压机制和拓展防治高血压病新药物。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 动物及分组 健康12周龄亲代自发性高血压大鼠（SHR）60只，体质量（174.2±12.52）g。由北京维通利华实验动物技术有限公司提供 （合格证号：0048303）；健康12周龄SD大鼠10只，体质量（305.8±15.7）g，由昆明医科大学实验动物学部提供（合格证号：0021916）。

1.2 药物与试剂 桑芪首乌片由桑寄生、黄芪、制首乌、钩藤、天麻、三七等组成，中药原材料购于云南白药集团股份有限公司（批号：2013002134），经昆明市中医医院制剂科加工成浸膏，每克相当于生药材5.8 g；卡托普利，中美上海施贵宝制药有限公司生产 （批号12050482）；复方丹参片，广州白云山和记黄埔中药有限公司生产（批号D3A021）。大鼠AngⅠELISA试剂盒，上海研盟生物科技有限公司（批号YMR31183）；大鼠BK ELISA试剂盒，上海研盟生物科技有限公司（批号AME21074）；大鼠AngⅡELISA试剂盒，上海研盟生物科技有限公司，批号EK-R30950。

1.3 分组与给药 经适应性饲养1周后，SHR大鼠随机分为桑芪首乌片高、中、低剂量组，卡托普利组，复方丹参片组和空白对照组，各10只；同时10只SD大鼠为正常对照组。连续给药5周。

1.4 血压测定 主要实验仪器有大鼠尾动脉血压测定仪，BL-420F生物机能实验系统。采用无创尾动脉血压测量系统，先以40℃温水给大鼠尾巴预热，保持温度使尾动脉扩张，实验方法和步骤按大鼠尾动脉血压测定仪的操作说明进行，以每次连续测6个数据，取其平均值作为血压测定值。于实验前，连续给药14 d、35 d和停药7 d测量血压。

1.5 血浆血管紧张素Ⅰ、缓激肽、血管紧张素Ⅱ测定酶联免疫吸附（ELISA）法测定血浆中AngⅠ、BK、AngⅡ。实验严格按照试剂盒所提供的说明书中步骤进行操作。于受试品后7 d、14 d、35 d鼠尾静脉采血，分离血浆后保存待用；停药7 d后处死，在下腔静脉采血。

1.6 统计学处理 应用SPSS13.0统计软件。计量资料以（±s）表示。各组间比较采用单因素方差分析。如果方差齐采用LSD法。若方差不齐采用Tamhane′s T2统计方法。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 桑芪首乌片对SHR大鼠血压的影响 见表1。实验前，各组SHR大鼠收缩压均高于SD正常对照组（P<0.05）；在整个给药期间，各组SHR大鼠收缩压与SD正常对照组比较，均明显升高（P<0.05）；给药14 d、35 d和停药后1周，桑芪首乌片低、中、高剂量组，卡托普利组，复方丹参片组均较SHR空白对照组降低（P< 0.05）；但各组之间比较差异无统计学差异（P>0.05）。

表1 各组不同时期SHR大鼠收缩压值比较（mmHg，±s）

表1 各组不同时期SHR大鼠收缩压值比较（mmHg，±s）

与空白对照组比较，*P＜0.05；与正常对照组比较，△P＜0.05。下同。

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2.2 桑芪首乌片对血管紧张素Ⅰ的影响 见表2。给药第7日，与SD大鼠比较，SHR各模型组血浆AngⅠ均显著升高（P<0.05），但SHR大鼠各模型组之间差异无统计学意义（P>0.05）；给药第14、35日，与空白对照组比较，卡托普利组、复方丹参片组、桑芪首乌片中、高剂量组均能明显降低血浆AngⅠ水平（P<0.05）；停药7 d后，桑芪首乌片中、高剂量组仍可降低血浆AngⅠ水平（P<0.05）。

表2 各组不同时期SHR大鼠血浆血管紧张素Ⅰ水平比较（pg/mL，±s）

表2 各组不同时期SHR大鼠血浆血管紧张素Ⅰ水平比较（pg/mL，±s）

组别 n空白对照组 10卡托普利组 10复方丹参片组 10给药7 d 给药14 d 给药35 d 停药7 d 24.97±1.61 25.53±1.97 25.07±2.36 27.31±2.69 24.81±2.75 24.30±2.23*23.48±2.06*26.09±2.34 24.85±2.28 24.41±1.87*23.81±2.59*26.11±2.92桑芪首乌片低剂量组 10 25.10±2.36 24.91±2.37 24.66±2.92 25.99±2.74桑芪首乌片中剂量组 10 24.69±3.02 24.06±2.12*23.86±2.56*25.44±1.88*桑芪首乌片高剂量组 10 24.32±1.45 23.67±2.10*23.27±1.97*25.14±2.17*正常对照组 10 20.22±1.76*19.94±1.86*20.41±2.06*20.08±1.15*

2.3 桑芪首乌片对缓激肽的影响 见表3。给药第7日，与SD正常对照组比较，SHR模型各组血浆BK水平均降低（P<0.05），但SHR空白对照组比较，桑芪首乌片高剂量组血浆BK水平升高 （P<0.05）；给药第14、35日，与空白对照组比较，卡托普利组、复方丹参片组、桑芪首乌片低、中、高剂量组均显示出较高的血浆BK水平（P<0.05）；停药7 d后，各组血浆BK水平差异无统计学意义（P>0.05）。

表3 各组不同时期SHR大鼠血浆缓活激肽水平比较（pg/mL，±s）

表3 各组不同时期SHR大鼠血浆缓活激肽水平比较（pg/mL，±s）

组别 n空白对照组 10卡托普利组 10复方丹参片组 10给药7 d 给药14 d 给药35 d 停药7 d 65.22±5.38 65.43±7.57 64.37±5.92 59.52±5.63 66.11±5.96 69.38±6.44*70.56±7.63*61.15±5.53 65.91±4.61 69.51±6.38*70.85±7.03*61.18±4.04桑芪首乌片低剂量组 10 64.91±4.42 67.45±5.73*67.94±6.41*60.63±5.99桑芪首乌片中剂量组 10 66.83±6.49 71.10±3.93*71.79±7.21*59.53±5.61桑芪首乌片高剂量组 10 67.39±7.54*72.18±6.59*72.98±5.91*59.53±5.12正常对照组 10 87.57±6.60*87.79±6.75*88.04±6.99*90.60±8.30

2.4 桑芪首乌片对大鼠血浆血管紧张素Ⅱ的影响见表4。给药第7日，与SD正常对照组比较，SHR模型各组血浆AngⅡ明显升高（P<0.05），而SHR大鼠各模型组之间差异无统计学意义 （P>0.05）；给药第14日、35日，与空白空白组比较，卡托普利组、复方丹参片组、桑芪首乌片中、高剂量组血浆AngⅡ水平明显降低（P<0.05）；停药7 d后，桑芪首乌片中、高剂量组血浆AngⅡ水平仍较低（P<0.05）。

表4 各组不同时期SHR大鼠血浆血管紧张素Ⅱ水平比较（pg/mL，±s）

表4 各组不同时期SHR大鼠血浆血管紧张素Ⅱ水平比较（pg/mL，±s）

组别 n空白对照组 10卡托普利组 10复方丹参片组 10给药7 d 给药14 d 给药35 d 停药7 d 1328.64±107.78 1346.56±109.60 1316.97±118.24 1289.20±108.24 1301.86±129.11 1282.70±105.17*1211.17±83.33*1264.82±129.84 1295.18±116.15 1266.05±100.22*1180.31±84.85*1257.72±98.64桑芪首乌片低剂量组 10 1310.33±108.36 1304.10±107.92 1266.52±108.76 1248.29±105.98桑芪首乌片中剂量组 10 1299.57±120.26 1280.53±84.09*1206.96±101.84*1224.24±113.93*桑芪首乌片高剂量组 10 1287.93±120.38 1245.18±112.53*1124.69±107.28*1206.26±100.34*正常对照组 10 733.04±70.11*742.19±62.03*734.39±74.59*782.03±68.57*

3 讨 论

RAS系统过度激活是导致高血压病的一个非常重要的途径，故抑制RAS系统过度激活是防治高血压病的一种重要手段。肾素作用于血管紧张素原使血管紧张素原转变成AngⅠ。AngⅠ在血管紧张素转化酶（ACE）的作用下形成AngⅡ，AngⅡ具有很高的生物活性，包括收缩血管、升高血压、促进心肌肥大、成纤维细胞和血管平滑肌细胞增殖等作用，最终造成心血管组织细胞的损伤，导致动脉粥样硬化、高血压和心力衰竭等多种心血管疾病的发生发展［5-6］。缓激肽是激肽释放酶-激肽系统（KKS）中的一种重要的活性物质，通过体内存在两种酶降解缓激肽：激肽酶Ⅰ和激肽酶Ⅱ降解为失活片段，ACE即是激肽酶Ⅱ［7］。缓激肽具有舒张血管、调节血压、参与心肌保护等多种生物效应，在心血管系统中发挥着重要的保护作用，在高血压治疗中，可能具有重要的临床价值［8］。

云南省荣誉名中医陆家龙主任医师认为中医药治疗高血压病的思路应遵循两个原则：一是方药能够切合中医学辨证论治的思路，二是方剂的现代药理能够作用于高血压病的病理机制。其潜心研究的经验方“桑芪首乌汤”主要由桑寄生、黄芪、制首乌、钩藤、天麻、三七等中药组成。立法滋补肝肾、平肝息风、活血通络［9-10］。其中桑寄生主要成分为广寄生苷（即蒿蓄苷）、槲皮素等。新鲜叶的提取物对麻醉兔、犬静脉注射有明显降低血压的作用［11］。黄芪降压有效成分是γ0氨基丁酸及黄芪甲苷［12］，其机制可能与扩张血管、抑制RAS、激肽释放与Ca2+内流有关，且在降压的过程可以改善SHR的压力反射敏感性［13］。何首乌为蓼科植物何首乌的干燥块根，二苯乙烯苷（TSG）是何首乌的主要成分之一，在心血管疾病治疗显示中良好的前景［14-15］。TSG本身不具有降压效应，但能抑制大鼠血清和主动脉中NOx（nitrate/nitrite）含量的减少，保持一氧化氮生物活性的功能，同时阻止血管内膜重构，提高乙酰胆碱诱导的血管内皮依赖性舒张［16］。钩藤、天麻有清热平肝，潜阳息风之功。实验表明，天麻与钩藤联用，可以阻断RASS，拮抗交感神经系统活性，能有效降低血压，改善临床症状和生存质量，显著降低心脑血管终点事件，且两者有效成分降压作用可协同增效［17-19］。三七提取物具有一定的降压作用，主要可能是直接扩张血管，其次可能是抑制血管运动中枢所致［20-21］，但目前尚需深入研究。桑芪首乌片以制首乌配伍桑寄生通补肝肾，阴阳平调，其特点是根基得固而无动风伤阴之虑。黄芪与三七共奏益气活血通络之功，天麻、钩藤相伍为用，平抑肝阳。在该处方经过了30余年的临床观察，具有改善症状快、疗效持续平稳、安全、价低等优点，受到广大患者的认可。

本研究表明，桑芪首乌片可明显降低SHR大鼠血浆AngⅠ、AngⅡ水平，上调SHR大鼠血浆BK水平，推测桑芪首乌片作用有可能通过抑制肾素转化AngⅠ，拮抗机体ACE的活性，减少AngⅡ的生成而发挥作用，提示桑芪首乌片对RAS的作用可能与多途径、多环节、多靶点的综合影响有关。其对RAS的具体作用机制和靶点尚需进一步探索。

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Effects of Sangqi Shouwu Decoction on Blood Pressure and Renin Angiotensin System in Spontaneously Hypertensive Rats

CHEN Bin，CHENG Xinyuan，WEI Danxia，et al. Kunming Hospital of TCM，Yunnan，Kunming 650500，China.

Objective：To study the antihypertensive effect of Sangqi Shouwu Decoction on hypertensive rats and its mechanism.Methods：60 SHR rats were randomly divided into low，medium and high three dose groups，captopril group and Fufang Dashen group and blank control group，10 in each group.At the same time，10 SD rats were in the normal control group.Noninvasive caudal artery BPMS was used to monitor blood pressure，as well as the change of BK，AngⅠand AngⅡ，in 24 h and on 7 d，14 d，21 d and 35 d after treatment.Results：After treatment，the systolic blood pressure of each adminstration groups was statistically significant compared with the normal contral group and the blank control group（P<0.05），but there was no statistically significant difference between the remaining groups（P>0.05）.After administration，the levels of Ang I and AngⅡin other groups were obviously lower than those in the blank control group（P<0.05），and the difference was statistically significant. After administration，the levels of BK in other groups were obviously higher than that of the SHR control group（P<0.05），and the difference was statistically significant.Conclusion：This study shows that Sangqi Shouwu Decoction can significantly reduce the levels of AngⅠand AngⅡin plasma of SHR rats and up-regulate the plasma BK level in SHR rats，suggesting that the effect of Sangqi Shouwu Decoction may inhibit the expression of AngⅠ，ACE activity，reduce the formation of AngⅡand play a role in the RAS has been a multi-channel，multilink，multi-target integrated effects.

Sangqi Shouwu Decoction；Hypertension；Renin angiotensin system；Animal experiment

R285.5

A

1004-745X（2017）08-1326-04

10.3969/j.issn.1004-745X.2017.08.004

2017-05-31）

云南省社会发展科技计划—中药现代化科技产业（云南）基地建设项目［云南民族药名方（桑芪首乌方）成药性评价，2012CG031］；云南省应用基础研究计划（青年项目）（2012FD098）

△通信作者（电子邮箱：1216508769＠qq.com）