不同果龄罗汉果中甜苷含量分布研究

刘 雯，王志宏，杨裴庆，崔丽杰，李珊珊，李桂银，周治德

(桂林电子科技大学 生命与环境科学学院， 广西 桂林 541004)

不同果龄罗汉果中甜苷含量分布研究

刘 雯，王志宏，杨裴庆，崔丽杰，李珊珊，李桂银，周治德*

(桂林电子科技大学 生命与环境科学学院， 广西 桂林 541004)

目的： 研究不同果龄罗汉果中甜苷IV、甜苷V的检测方法及含量分布。方法： 以不同果龄罗汉果鲜果为原材料，采用超声波辅助提取，D101大孔树脂吸附纯化，得到罗汉果中甜苷提取液；采用HPLC法对罗汉果甜苷提取液进行含量测定，得到不同果龄罗汉果的甜苷IV、甜苷V含量数值。结果： 采用HPLC法检测罗汉果甜苷提取液，甜苷IV、甜苷V吸收峰能明显分开，并且具有可读性；罗汉果甜苷IV的含量从30天到50天呈递增趋势，在50天之后含量骤减，70天以后苷IV的含量极低。罗汉果甜苷 V 含量在30 天到70天不断增加，而在70天之后，苷V的含量趋于稳定。结论：HPLC法能同时检测出罗汉果苷IV、苷V含量，得到了不同果龄罗汉果中甜苷IV、甜苷V含量分布规律。

果龄；罗汉果苷 IV；罗汉果苷V；含量

罗汉果(Siraitia grosvenorii)的果味甘性凉，有止咳化啖、清热润肺、润肠通便的功效，生活中常用于降肺火止咳，缓解咽喉失音，缓解肠燥便秘等症，是清凉饮料的佳品。以广西桂林产的罗汉果最出名，享誉着“东方神果”、“神仙果”的称号。李俊等人[1]的研究发现，罗汉果有2个多糖，经检测分析分为SGPS1和SGPS2。罗汉果中黄酮具有抑菌作用、抗氧化和平滑血管等功效有来源于黄酮类物质[2]。陈全斌等人[3]利用RP-HPLC法，证实罗汉果有黄酮苷元山奈酚成分，发现含有黄酮苷元槲皮素[4]。葫芦烷三萜类化合物具有该类骨架的化合物大多具有广泛的生物活性,诸如抗肿瘤、消炎抗菌等[5]。研究表明这类化合物是罗汉果的主要有效成分，它们在罗汉果干果中的总含量为3.75%-3.85%。其中mogroside V是主要甜味成分。日本人竹本常松等从干燥果实中分离得到如赛门苷Ⅰ( sianenosideⅠ)、罗汉果苷ⅡE(mogrosideⅡE) 、罗汉果苷Ⅲ (mogrosideⅢ) 、罗汉果苷 ⅢE(mogrosideⅢE)、罗汉果苷Ⅳ(mogrosideⅣ)、罗汉果苷Ⅴ(mogrosideⅤ) 等葫芦烷三萜苷类化合物[6]。罗汉果具有糖尿病防治作用、防龋齿作用、抗炎症的作用[7-10]，其有效成分被用来做成消炎止痛药并投入市场。有祛痰作用、增加免疫细胞的数量、保肝降酶作用[11-12]；近期有报道称罗汉果苷Ⅳ有预防治疗丙肝作用。

本研究以不同果龄的罗汉果为原料，采用超声波辅助水提，D101大孔树脂吸附，以罗汉果的苷IV、苷V含量为指标，采用HPLC法为检测方法，探索不同果龄罗汉果中甜苷含量分布规律，为罗汉果种植技术服务。

1 材料与方法

1.1 主要仪器

Water HPLC 515高效液相色谱仪 美国沃特斯公司；40*500mm层析柱 上海禾汽玻璃仪器有限公司；D101大孔树脂 沧州宝恩斯吸附材料科技有限公司；SB-5200D超声波清洗机 宁波新芝生物科技股份有限公司；DLS-1高速组织捣碎机 上海标本模型厂。

1.2 材料与试剂

罗汉果鲜果，桂林永福县基地，青毛果；罗汉果甜苷Ⅳ标准品≥98%，罗汉果甜苷Ⅴ标准品≥98%，成都百盈生物科技有限公司；乙腈色谱纯美国TEDIA进口试剂；盐酸、氢氧化钠、氢氧化钙、甲醇都为AR 西陇化工股份有限公司。

1.3 方法

1.3.1 罗汉果甜苷提取步骤

罗汉果鲜果→捣碎→粗提取→过滤除渣→大孔吸附树脂分离→减压浓缩→干燥制粉

1.3.2 提取要点

取新鲜罗汉果2个，捣碎，以固液比1:2加入60%乙醇后置于超声波仪器中，超声30min后取出，冷却过滤，取滤液；相同法提取3次，合并3次滤液。往滤液中加入15%鲜果重量浓度为10%的 Ca(OH)2悬浊液，絮凝；用离心机以2500r/min的离心15min，抽滤得到罗汉果提取液。将提取液用旋转蒸发仪减压浓缩至浸膏，烘干。取一定的粉末，用甲醇定容至10mL，用HPLC测定罗汉果甜苷的含量，计算罗汉果甜苷的提取率。

1.3.3 D101大孔树脂吸附

上柱，将罗汉果提取液调pH值在9以下，上样速度为2BV/h，柱体积为200mL；用蒸馏水进行清洗直到流出液为澄清透明状；用65%乙醇进行洗脱，收集洗脱液500mL，旋转蒸发浓缩。

1.3.4 罗汉果甜苷的含量测定，采用高效液相色谱法

1.3.4.1 标准品液制备

精密称取罗汉果苷Ⅳ对照品3.0mg和苷Ⅴ对照品8.2mg，用甲醇定容到10mL，超声波处理 20min，用微孔滤膜对溶液进行过滤。取上清液用高效液相色谱测定。为防止罗汉果不同甜苷之间的干扰，取适量对照品配好的标准液混合进样，观察其图谱。

1.3.4.2 样品液制备

分别取不同果龄的罗汉果即30、35、 50、55、60、65、70、75、85、90 天罗汉果鲜果各2个，捣碎置于烧杯中，提取制得甜苷品。称重，用高效液相色谱仪测定其苷Ⅳ和苷Ⅴ的含量。

1.3.4.3 色谱柱条件[13]

C18反相(4.6 mm×150 mm)、乙腈-水溶液 21:79、检测波长设为203nm、流速1mL/min 、柱温 25℃、进样量10ul、跑柱30min

2 结果与分析

2.1 确定罗汉果甜苷的最佳检测波长,为203nm

先对罗汉果甜苷IV和甜苷V的标准品进行HPLC检测，确定相应的出峰时间，从而推算样品的甜苷含量。确定流动相比例为乙腈:水=21:79，此时罗汉果的苷IV峰与苷V峰能明显拉开，并且与其他杂质峰不至于混在一起。由罗汉果苷V标准品图谱可以看出峰保留时间大概是7.8min，峰面积为2465292。由罗汉果苷IV标准品图谱可以看出峰保留时间大概是17min, 峰面积为1031910。 苷V的S标=2465292，M标=8.2mg，W标=98.56%； 苷IV的S标=1031910，M标=3.0mg，W标=98.79%。图1为罗汉果甙IV+甙V的3D图谱，图2为罗汉果苷Ⅳ和苷 V 标准品混合进样 HPLC 图谱。根据3D图谱可以看出，甜苷的峰在检测波长为203nm出现最高，因此确定甜苷的最佳检测波长为203nm。

图1 罗汉果甙IV+甙V的3D图谱

图2 罗汉果苷Ⅳ和苷 V 标准品混合进样 HPLC 图谱

2.2 罗汉果的提取实验结果

(1)以50天果龄的罗汉果为原料进行提取，D101大孔树脂吸附，结果如下：超声波平均提取率为2.20%，甜苷V平均提取率为0.22%，甜苷IV平均提取率为0.0307。将罗汉果提取液过D101大孔树脂吸附，检测前后罗汉果苷V以及苷IV的含量，结果见表1。

表1 罗汉果甜甙经过D101树脂的含量

由表1数据可知，通过优化后的工艺，树脂 D101 对罗汉果甜苷有较好的分离效果，通过提取能得到甜苷 V 含量为 20%左右的罗汉果甜苷粉，苷IV的含量很低，但是也起到了一定的提纯作用。

(2) 将30、35、 50、55、60、65、70、75、85、90 天罗汉果鲜果提取物用HPLC进行检测，部分图谱如下。

图3 30 天果龄罗汉果甜苷粉 HPLC 图谱

图4 50 天果龄罗汉果甜苷粉 HPLC 图谱

图5 70天果龄罗汉果甜苷粉 HPLC 图谱

图6 90天果龄罗汉果甜苷粉 HPLC 图谱

整理图谱对应的数据得到表2。

表2 不同果龄罗汉果皂苷含量表

表2结果表明，罗汉果甜苷 V含量从30 天到70天不断增加，而在70天之后，苷V的含量趋于稳定；甜苷IV的含量从30天到50天呈递增趋势，在50天之后苷IV含量骤减，70天以后苷IV的含量很低。

4 结论

(1)通过HPLC的检测方法,采用C18反相(4. 6 mm×150 mm)、乙腈-水溶液 21:79、波长为203nm，流速1mL/min 、柱温 25℃、进样量10?L、跑柱30min，将罗汉果提取液中甜苷IV、甜苷V吸收峰能明显分开，实现同步检测罗汉果甜苷IV、甜苷V。

(2)罗汉果甜苷,V 随着罗汉果果龄的增加而出现增加的趋势，并且在70天后含量趋于稳定；罗汉果甜苷IV的含量在30天到50天的坐果中出现显著提升，在50天之后含量骤减；说明罗汉果苷IV的形成是在50天果龄之前，在50天之后可能转变成其他甜苷。

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(本文文献格式：刘 雯，王志宏，杨裴庆，等.不同果龄罗汉果中甜苷含量分布研究[J].山东化工，2017，46(12)：12-15，17.)

The Research to Different Fruit Age ofMogrosides in Distribution and Separation

LiuWen,WangZhihong,YangPeiqing,CuiLijie,LiShanshan，LiGuiyin，ZhouZhide*

(School of Life and Environmental Sciences of Guilin University of Electronic Technology , Guilin 541004,China)

Objective Study of the test method and content distribution of Mogroside IV and Mogroside V from different fruit age of Momordica grosvenori. Methohd By means of ultrasonic assisted extraction and the D101 macroporous adsorption resin extract mogroside from different fruit age of Momordica grosvenori. Mogrosides is determined by HPLC method including the content of Mogroside IV and Mogroside V. Results Mogrosides is tested by HPLC method. It's easy to apart from the figure between Mogroside IV and Mogroside V. The content of Mogroside IV is increasing from the age of 30 days to 50 days ,decreasing after 50 days ,and hitting the minimum after 70 days. The content of Mogroside V is increasing from the age of 30 days to 70 days and maintaining after the age of 70 days. Conclusion The method of HPLC can test the content of Mogroside IV and Mogroside V at the same time and figure out regularities of distribution between Mogroside IV and Mogroside V from different fruit age of Momordica grosvenori.

fruit age; mogroside IV ; mogroside V; content

2017-04-22

广西科技厅项目(桂科重1598005-3，2016GXNSFAA380011)，大学生创新项目(C66JWA24SM16)

刘 雯(1995-)，女，研究方向：植物提取；通信作者：周治德(1971—)，高工，研究方向：植物提取与知识产权。

O657.7

A

1008-021X(2017)12-0012-04