国产凝胶渗透色谱测定茶叶中7种农药残留

云 环 高 峰 吕东阳 刘来福* 赵靖敏 陈向斌 齐 娜 金晓静 皮 娜

(1.北京出入境检验检疫局检验检疫技术中心, 北京 100026；2.上海屹尧仪器科技发展有限公司，上海 201108)

国产凝胶渗透色谱测定茶叶中7种农药残留

云 环 高 峰1吕东阳1刘来福1*赵靖敏1陈向斌2齐 娜2金晓静2皮 娜2

(1.北京出入境检验检疫局检验检疫技术中心, 北京 100026；2.上海屹尧仪器科技发展有限公司，上海 201108)

建立了加速溶剂萃取-凝胶渗透色谱-气相色谱质谱法测定茶叶中7种农药残留的分析方法。样品用乙腈-二氯甲烷(V/V，1/1)作为溶剂，加速溶剂提取，提取液经过凝胶渗透色谱(Gel Permeation Chromatography，GPC)除去大分子杂质后，供GC/MS分析；添加浓度为0.5 μg时，回收率为79.2%～100.8%，相对标准偏差为3.15%～13.34%，方法具有自动化程度高、萃取效率高、净化效果好、精密度好，分析快速等优点，适用于茶叶中农药残留的日常检测工作。

加速溶剂萃取 凝胶渗透色谱 GC/MS 农药 茶叶

1 概述

茶叶以其抗癌、抗氧化、消除人体自由基等独特的保健功效，深受世人喜爱，已成为仅次于碳酸饮料和饮用水的世界第三大饮料。另一方面，随着人民生活水平的目益提高，人们对茶叶中农药残留等质量安全问题给予了高度关注。

加速溶剂萃取(ASE)是近几年出现的新的萃取技术。具有溶剂用量少，萃取时间短，萃取效率高的突出优点，是美国EPA的标准方法之一。然而，又由于茶叶含有大量的色素、生物碱及酚类化合物等脂溶性物质，在萃取后，会带来各种干扰，降低后续分析仪器的灵敏度，使用寿命，从而影响最终分析结果，因此，必须样品萃取后，必须进一步进行净化处理。

凝胶渗透色谱(GPC)是利用多孔的凝胶聚合物将化合物按分子空间结构差异(分子量大小)进行选择性分离，不能进入凝胶孔隙的分子会很快随流动相洗脱，而能够进入凝胶孔隙的分子，则需要更长时间的冲洗时间才能够流出固定相，从而实现对不同组分的分离。利用加速溶剂萃取提取茶叶样品，提取液经过凝胶渗透色谱净化，利用GC/MS进行定性定量分析，建立了茶叶中11种农药残留的分析方法。

2 材料与方法

2.1 样品

实验用茶叶样品经粉碎机粉碎后，混匀，密封，常温下保存，备用。

2.2 仪器与试剂

仪器型号：上海屹尧仪器科技发展有限公司FLEXI 全自动凝胶渗透色谱仪(配有400mm×25mm(内径)，内装BIO-Beads S-X3填料的净化柱)，用于样品中大分子杂质的净化；气相色谱-质谱仪，配有电子轰击离子源(EI)；分析天平，感量为0.0001g；离心机，最大转速为10000 r/min。

水为GB/T 6682规定的一级水；环己烷：色谱纯；乙酸乙酯：色谱纯；乙腈：色谱纯；二氯甲烷：色谱纯；正己烷：色谱纯；乙酸乙酯+环己烷(1+1，体积比)；乙腈+二氯甲烷(1+1，体积比)；毒死蜱、杀螟硫磷、三氯杀螨醇、水胺硫磷、三唑磷、氯氰菊酯、溴氰菊酯单个标准储备液100 mg/L；微孔过滤膜(尼龙)。

2.3 方法建立

称取5 g磨碎均匀的茶叶样品，移入加速溶剂萃取的34 mL萃取池中，用乙腈+二氯甲烷(1+1)作提取溶剂，在10.34 MPa压力、100℃条件下，加热5 min，静态萃取5 min，循环1次。然后用池体积60%的乙腈+二氯甲烷(1+1)冲洗萃取池，氮气吹扫100 s。萃取完毕，将萃取液转移到100 mL梨形瓶，40℃水浴中减压浓缩至近干，然后用适量乙酸乙酯+环己烷(1+1)溶解残渣后转移至10 mL容量瓶，用乙酸乙酯+环己烷(1+1)定容至10 mL，溶液高速离心后过0.45 μm滤膜，待凝胶色谱净化。

凝胶渗透色谱净化条件，见表1、表2。

表1 全自动凝胶净化方法进样程序表(流速：5mL/min)

收集液于40℃水浴旋转蒸发至约5mL，将浓缩液转移至15mL离心管中，氮吹浓缩至近干，加入1mL的正己烷溶解残渣，混匀，供气相色谱-质谱测定。

气相色谱-质谱条件，如下：

色谱柱：DB-5MS 30m×0.25mm×0.25μm。柱温(程序升温)：70℃保持3min，15℃/min升到180℃，保持2min，10℃/min升到280℃，保持10min。进样口温度：250 ℃。进样口压力：77 kPa。流速：1.0 mL/min。分流比：不分流。进样量：1.0 μL。

2.4 线性关系

5 mg/L混合标准溶液配制，如下：

分别从浓度为100 mg/L的毒死蜱、杀螟硫磷、三氯杀螨醇、水胺硫磷、三唑磷、氯氰菊酯、溴氰菊酯标准储备液中，各移取0.5 mL于10mL容量瓶中，正己烷定容至刻度，配制成浓度为5mg/L的10种农药混合标准溶液，避光，0～4℃保存。

基质混合标准工作溶液配制，如下：

用空白样品基质溶液配制成浓度分别为0.03、0.05、0.1、0.2、0.3mg/L的混合标准工作溶液，用于标准工作曲线的绘制。具体结果见表3。

表3 7种农药线性方程

2.5 加标回收率

在茶叶样品中加入0.5μg的混合标准溶液，重复进样7次，采用基质标准曲线定量，检测数据及RSD见表4。

表4 7种农药测定结果

3 结论

本实验使用国产凝胶净化系统对茶叶中7中农药残留进行了提取，使用建立了使用凝胶色谱-气相色谱-质谱法检测茶叶中农药残留的方法。该方法具有自动化程度高，萃取效率高、净化效果好、精密度好，分析快速等优点，适用于茶叶中农药残留的日常检测工作。

[1] 王耀，张汉霞，邹潍力，刘少彬，谢翠美.ASE萃取/GPC-SPE净化/GC-MS测定茶叶中的有机磷残留.食品研究与开发，2011，32(3)：128-132.

[2] GBT 23376-2009. 茶叶中农药多残留测定 气相色谱/质谱法.

Determination of seven pesticide residues in tea by domestic gel permeation chromatograph.

Yun Huan1,Gao Feng1,Lǖ Dongyang1, Liu Laifu1*,ZhaoJingmin1,ChenXiangbin2,QiNa2,JinXiaojing2,PiNa2

(1.BeijingEntry-ExitInspectionandQuarantineBureau,Beijing100026,China;2.PreeKemScientificInstrumentsCo.,Ltd.,Shanghai201108,China)

A method for determination of 7 kinds of pesticide residues in tea using accelerated solvent extraction-gel permeation chromatography-GC/MS was established in this paper. Acetonitrile-dichloromethane (V/V,1/1) was employed as solvent in accelerated solvent extraction. Extract was purified by gel permeation chromatograph(GPC) to remove macromolecular impurities and then followed by GC/MS analysis. The results showed that recoveries were between 79.2%-100.8% with 0.5 μg standard addition，and RSD values were between 3.15%-13.34%. This fast，accurate and highly automated method with good extraction rate and purification result is very applicable in daily tea analysis.

accelerated solvent extraction; gel permeation chromatograph, GC/MS; pesticide residues; tea

国产分析仪器验证与综合评价市场化推广研究与实践(Z161100003016006)

10.3969/j.issn.1001-232x.2017.04.029

2017-06-19

云环,1983年出生,高级工程师,毕业于清华大学,就职于北京出入境检验检疫局技术中心,从事食品安全检测工作。