眼睑基底细胞癌中窖蛋白- 1和血管生成的关系

刘玲玲 余 萍 云亚歌 王 青

(青海大学附属医院眼科，青海 西宁 810001)

眼睑基底细胞癌中窖蛋白- 1和血管生成的关系

刘玲玲 余 萍 云亚歌 王 青

(青海大学附属医院眼科，青海 西宁 810001)

目的 检测眼睑基底细胞癌中窖蛋白(Caveolin)- 1、血管内皮生长因子(VEGF)和白细胞分化抗原(CD)31的表达，关注Caveolin- 1与血管生成的关系。方法 58例确诊为眼睑基底细胞癌并行手术的患者作为观察组，常规留取术后的石蜡包埋组织，选择皮肤基底细胞乳头状瘤术后石蜡包埋组织17例作为对照组，应用免疫组化二步法检测两组中Caveolin- 1、VEGF和CD31的表达。结果 Caveolin- 1、VEGF的阳性率、CD31标记的微血管密度(MVD)在两组中的表达差异有统计学意义(P<0.01)。观察组中Caveolin- 1、 VEGF阳性率和MVD值与肿瘤最大径密切相关，Caveolin- 1与Ki67指数密切相关，Caveolin- 1、 VEGF阳性率和MVD值均与性别、年龄无相关性。线性相关分析显示观察组中Caveolin- 1和VEGF、Caveolin- 1和MVD呈负相关。结论 眼睑基底细胞癌中Caveolin- 1低表达是促进肿瘤形成的重要因素，Caveolin- 1与肿瘤间质的血管生成有明显相关性。

眼睑；基底细胞癌；窖蛋白(Caveolin)- 1；血管内皮生长因子(VEGF)；血管密度

基底细胞癌在老年人多见，易好发于曝光部位，其生物学行为较为特殊，主要表现为生长缓慢及较低的转移率。眼睑是最常见的好发部位，病变形成和进展中可以出现侵袭性生长，进而破坏局部组织和器官〔1，2〕。本病也是富于血管的肿瘤，肿瘤生长过程中伴有明显的血管生成〔3〕。窖蛋白(Caveolin)- 1是胞膜窖在细胞膜表面特异性内陷微区的标记性蛋白，对肿瘤形成和血管生成可能有重要作用〔4〕。血管内皮生长因子(VEGF)是被大家公认的血管生成促进因子，可以调节肿瘤间质血管内皮细胞的新生和血管的形成，其高表达时可以为肿瘤提供必要的营养和氧〔5〕。本文针对眼睑基底细胞癌患者术后组织中Caveolin- 1、VEGF和白细胞分化抗原(CD)31蛋白的表达进行研究，分析其临床意义及相关性。

1 资料与方法

1.1 临床资料 2014年1月至2016年7月青海大学附属医院诊断为眼睑基底细胞癌并行手术治疗的患者作为观察组，共58例，其中男31例，女27例，年龄46～88岁，平均68.6岁。术后均经病理学进行诊断，符合世界卫生组织(WHO)中的标准。患者或家属签署知情同意书。皮肤基底细胞乳头状瘤术后石蜡包埋组织17例作为对照组，其中男9例，女8例，年龄48～79岁，平均62.3岁，两组一般资料无明显差异。

1.2 Caveolin- 1、VEGF和CD31的检测方法 两组术后组织均常规送病理科，取材、常规脱水，包埋，切取4 μm切片于胶片上进行Caveolin- 1、VEGF和CD31蛋白表达的检测，均应用免疫组化二步法，二氨基联苯胺(DAB)显色，严格按说明书上要求的步骤操作，做好质量控制，减少人为误差。

1.3 Caveolin- 1、VEGF和CD31的判定 结果均应用Olympus光学显微镜观察，由病理医师判读。Caveolin- 1的阳性部位是细胞膜和(或)细胞质，VEGF的阳性部位是细胞质，均以染成棕黄色定为阳性细胞，选择上皮细胞中染色较为明显的区域进行计数，共选择5个高倍视野(400倍)，取平均值，以<10%定为阴性，以≥10%定为阳性。CD31以细胞质和细胞膜染成棕黄色为阳性细胞，以连续的细胞簇、细胞丛或分支状连续的内皮细胞判定为微血管，共选择5个肿瘤间质的区域进行微血管密度(MVD)的计数(400倍)，取平均值。

1.4 统计学方法 采用SPSS13.0统计软件进行χ2检验、线性相关分析。

2 结 果

2.1 两组Caveolin- 1、 VEGF阳性率和MVD值比较 两组Caveolin- 1、 VEGF阳性率和MVD值差异显著(P<0.01)。见表1。

表1 两组Caveolin- 1、 VEGF阳性率和MVD值比较〔n(%)〕

2.2 观察组中Caveolin- 1、 VEGF阳性率和MVD值在不同临床特征中的比较 观察组中Caveolin- 1、 VEGF阳性率和MVD值与肿瘤最大径密切相关，Caveolin- 1与Ki67指数密切相关，Caveolin- 1、 VEGF阳性率和MVD值均与性别、年龄无明显相关性。见表2。

2.3 观察组中Caveolin- 1、 VEGF阳性率和MVD值相关性 观察组中Caveolin- 1和VEGF(r=-0.46，P=0.043)、Caveolin- 1和MVD(r=-0.44，P=0.046)呈负相关。

表2 观察组中Caveolin- 1、 VEGF阳性率和MVD值在不同临床特征中的比较〔n(%)〕

3 讨 论

Caveolin- 1基因定位于染色体7q31.1上，也是FRA7G脆性位点，这个位点常在机体恶性病变时缺失，因此该区域被认为是肿瘤抑制基因的遗传标志〔6，7〕。Caveolin- 1也被认为是一个候选抑癌基因，其表达的蛋白为21～24 kD的膜整合蛋白，其胞膜窖这一细胞膜表面富含胆固醇和鞘脂的特异性内陷区域，在膜内易形成二聚体，也可以与Caveolin- 2形成异寡聚体〔8〕。Caveolin- 1对血管新生有双向调控作用〔9〕。研究认为VEGF及其下游作用分子一氧化氮(NO)是血管生成的强效促进物质，而内皮型NO合酶及VEGF受体存在于内皮细胞的小凹陷中，这个区域具有活化Caveolin- 1的作用，如果Caveolin- 1表达过高和过低，NO合酶和NO的产生均受到明显的影响〔10〕。也有学者对Caveolin- 1的结构进行观察发现，Caveolin- 1对肿瘤形成有负调控作用，其机制是通过支架作用域CSD区实现的，此区域较容易与信号转导分子相互作用，并形成其生物学功能〔11〕。肿瘤在生长过程中能分泌多种促血管生成因子，其中VEGF的分泌是促进肿瘤血管形成的重要物质，VEGF在作用过程中通过与位于血管内皮细胞或某些肿瘤细胞表面高亲和力的受体特异性结合而发挥作用〔12，13〕。其分泌的机制主要是自分泌〔14〕。CD31被认为是血管新生的重要标志物，尤其是肿瘤间质的血管生成，其效果明显优于CD34和Fli- 1等血管内皮细胞的标志物〔15〕。

本实验提示Caveolin- 1低表达、VEGF高表达时可以促进肿瘤的生成，因此在眼睑基底细胞癌中Caveolin- 1发挥的是抑癌基因的作用，VEGF发挥的是癌基因的作用。提示Caveolin- 1和VEGF异常表达是促进肿瘤生长的促进蛋白因子，此时肿瘤生长加快，肿瘤体积增大。提示Caveolin- 1低表达时可以促进肿瘤细胞的增殖，因此Caveolin- 1高表达时可以在一定程度上抑制肿瘤细胞的增殖过程，当其失活后肿瘤失控性增生明显，细胞异型性增大，细胞生长活跃。本实验结果未发现VEGF与Ki67标记的增殖指数的关系，但有学者发现VEGF与细胞增殖有关〔3〕，这种差异可能与基底细胞癌的低增殖特征有关，也可能与本组病例较少有关，后续研究可以扩大样本关注VEGF对基底细胞癌增殖的相关问题。本实验未发现Caveolin- 1、 VEGF阳性率和MVD值与性别、年龄的相关性，因此一般临床特征的差异不是影响蛋白表达的特异性因素。本文相关分析说明基底细胞癌中Caveolin- 1是抑制肿瘤血管生成的因子。正常上皮和良性肿瘤中Caveolin- 1高表达，不仅对肿瘤生成具有一定的抑制作用，也对间质的血管生成有较好的控制作用，此时肿瘤增生、转移的开关未被激活，细胞呈现正常的状态，其表达丢失后引发肿瘤生长的相关蛋白的级联反应，促进肿瘤生长〔16〕。但是关于Caveolin- 1在肿瘤中表达下调或丢失后启动的对肿瘤生长的促进作用，可能还涉及细胞凋亡、周期调控及应激反应等生物学机制〔17〕。

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2 云亚歌.老年眼睑基底细胞癌患者癌组织中空泡膜蛋白1、磷酸酶及张力蛋白同源蛋白和抗转移蛋白23的表达及意义〔J〕.中国老年学杂志，2014；34(14)：3865- 7.

3 樊秀婷.弗林蛋白酶、转移抑制基因23和血管内皮生长因子在老年眼睑基底细胞癌中的表达及意义〔J〕.中国老年学杂志，2014；34(10)：2665- 7.

4 Routray S.Caveolin- 1 in oral squamous cell carcinoma microenvironment：an overview〔J〕.Tumour Biol，2014；35(10)：9487- 95.

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〔2017- 05- 22修回〕

(编辑 苑云杰)

王 青(1958- )，女，硕士生导师，主任医师，主要从事眼科研究。

刘玲玲(1980- )，女，主管护师，主要从事眼科临床疾病研究。

R75

A

1005- 9202(2017)15- 3843- 03；

10.3969/j.issn.1005- 9202.2017.15.091