复方薰衣草油膏的急性毒性及长期毒性研究Δ

张 群，孙 艳，孙玉华

(1.伊犁哈萨克自治州友谊医院药剂科，新疆 伊宁 835000； 2.新疆维吾尔自治区药物研究所药理室，新疆 乌鲁木齐 830001)

复方薰衣草油膏的急性毒性及长期毒性研究Δ

张 群1*，孙 艳1，孙玉华2

(1.伊犁哈萨克自治州友谊医院药剂科，新疆 伊宁 835000； 2.新疆维吾尔自治区药物研究所药理室，新疆 乌鲁木齐 830001)

目的：考查复方薰衣草油膏的急性毒性和长期毒性，为其临床应用的安全性提供实验依据。方法：(1)急性毒性实验。将50只豚鼠随机分为空白对照组，复方薰衣草油膏高、中、低剂量组和基质对照组，每组10只，除空白对照组外，其余组豚鼠做皮肤破损处理，然后分别一次性给予复方薰衣草油膏1.500、0.750、0.375 g/kg和基质4.000 g/kg，连续观察14 d。(2)长期毒性实验。将80只Wistar大鼠随机分为基质对照组和复方薰衣草油膏高、中、低剂量组，每组20只(雌雄各半)，分别给予基质6.0 g/kg和复方薰衣草油膏1.8、0.9、0.3 g/kg，皮肤涂抹给药、1日1次，连续给药92 d。结果：急性毒性实验结果显示，5组豚鼠体质量变化的差异无统计学意义(P>0.05)；观察期间，各组豚鼠饮食、活动正常，无异常分泌物，药物涂抹部位皮肤未见红斑、水肿、色素沉着、出血点，无死亡情况。长期毒性实验结果显示，4组大鼠的一般状况、行为活动、进食量、体质量变化、外周血象、尿常规指标、血液生化指标、脏器系数以及病理组织学等比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。结论：复方薰衣草油膏未见明显皮肤毒性作用，不同剂量连续重复给药92 d后未见不良反应，对大鼠的最大外用安全剂量为1.8 g/kg。

复方薰衣草油膏； 急性毒性； 长期毒性

薰衣草是新疆维吾尔医传统用药，维吾尔医中称“乌斯提乎杜思”[1]，在花期以全草作为药用，具有抗炎、杀菌、止痛、生肌和消除疤痕的功效[2-3]。本研究中的复方薰衣草油膏为中药复方制剂(为在研制剂，准备申报，暂无批准文号)，由薰衣草精油、黄芩、薄荷油等成分组成，诸药合理配伍，起到清热解毒、止痛、生肌作用，适用于烧烫伤、褥疮、溃疡等，对豚鼠烫伤皮肤创面有促愈合作用[4-5]。本研究从动物急性毒性实验及长期毒性实验等方面对复方薰衣草油膏进行安全性评价。

1 材料

1.1 动物

豚鼠(白色或背部皮肤白色)50只，体质量220～250 g，雌雄各半，由新疆医科大学动物实验中心提供[动物许可证：SCXK(新)2003-0001]；Wistar大鼠80只，6～8周龄，雌雄各半，体质量100～120 g，由新疆维吾尔自治区疾病预防控制中心地方病研究所试验动物中心提供[动物许可证号：SCXK(新)2003-0001]。实验开始前，动物先饲养、观察7 d，动物室光照充足，通风和空调设备良好，室温18～25 ℃。相对湿度40%～50%，实验室按常规定期消毒。

1.2 仪器

BS480型全自动血生化仪、BC-2800vet型兽用血球分析仪(深圳迈瑞仪器有限公司)；C2000-2型高性能血凝仪(北京普利生仪器有限公司)；HC9558型全自动电解质分析仪(深圳市航创医疗设备有限公司)；SABA-18型全自动血生化仪(意大利医学分析仪器集团)；Sigma 3K30型低温高速离心机(德国Sigma公司)；TDL80-2B型低速台式离心机(上海安亭科学仪器厂)；电子天平：AL204型[梅特勒-托利多(上海)有限公司]、LEICA RM2016型(湖北孝感市亚光医用电子技术研究所)、BN-VII型(湖北孝感市亚光医用电子技术研究所)、TS-12D型(湖北孝感市亚光医用电子技术研究所)、TY-6B型(湖北孝感市亚光医用电子技术研究所)。

1.3 药品与试剂

复方薰衣草油膏(5%、10%、30%等3个不同浓度)，为棕黄色软膏，批号：20150524。葡萄糖(GLU)试剂盒(批号：141515018、141815018)、尿素(UREA)试剂盒(批号：141315015)、总胆固醇(TC)试剂盒(批号：141615015)、三酰甘油(TG)试剂盒(批号：141715013)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)试剂盒(批号：140215011)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)试剂盒(批号：140115010)、碱性磷酸酶(ALP)试剂盒(批号：140315012)、肌酸激酶(CK)试剂盒(批号：142515011)、肌酐(Cre)试剂盒(批号：141015015)、血清总蛋白(TP)试剂盒(批号：140815013)、血清白蛋白(ALB)试剂盒(批号：140915014)，均由深圳迈瑞生物医疗电子股份公司生产；总胆红素(TBIL)试剂盒(批号：120791、120811)由中生北控生物科技有限公司提供；血液学试剂由江西特康科技有限公司生产；血浆凝血酶原时间(PT)试剂盒(批号：105272)由上海太阳生物技术有限公司生产。

2 方法

参考相关资料[6-9]，进行动物急性毒性及长期毒性实验。

2.1 急性毒性实验

将50只豚鼠随机分为空白对照组，复方薰衣草油膏高、中、低剂量组和基质对照组，每组10只，采用不同浓度临床剂量的2倍作为实验剂量。除空白对照组外，其余组豚鼠做皮肤破损处理(于给药前24 h用8%硫化钠将背部脊柱两侧去毛，去毛面积约为体表面积的10%；破损皮肤的制作采用粗砂纸摩擦，以渗血为度)，然后分别一次性给予复方薰衣草油膏1.500、0.750、0.375 g/kg和基质4.000 g/kg。连续观察14 d，包括动物体质量变化、饮食、外观、行为、分泌物[10]等，如有死亡应作大体解剖。

2.2 长期毒性实验

将80只大鼠随机分为基质对照组和复方薰衣草油膏高、中、低剂量组，每组20只(雌雄各半)，依次给予基质6.0 g/kg和复方薰衣草油膏1.8、0.9、0.3 g/kg(相当于70 kg成人每日每公斤体质量临床用量的4 690、14 070、28 140倍)。给药时将复方薰衣草油膏及基质均匀涂布于100 g大鼠已剃毛3 cm×3 cm的背皮上，连续给药90 d。观察大鼠的一般情况，每周测定1次体质量。在连续给药90 d后，每组取10只大鼠，麻醉后腹主动脉取血，测定血常规、凝血功能指标、血液生化学指标；然后颈椎脱臼处死并解剖大鼠，进行主要脏器的肉眼观察、脏器系数计算及组织病理学检查。于停药第30日，将剩余大鼠按上述要求进行同样处理。

2.3 统计学方法

3 结果

3.1 急性毒性实验结果

各组豚鼠体质量变化的差异无统计学意义(P>0.05)；观察期间，各组豚鼠饮食、活动正常，无异常分泌物，药物涂抹部位皮肤未见红斑和水肿情况，也未观察到有色素沉着、出血点，无死亡情况。参考类似研究[12-13]，可认为复方薰衣草油膏无明显皮肤毒性。

3.2 长期毒性实验结果

3.2.1 一般情况：给药期间，各组大鼠除给药部位外均未出现肉眼可见的异常，且在给药至停药第30日的观察期间内未出现死亡。除基质对照组外，其余组大鼠在给药第1日后出现不同程度的打喷嚏、不安反应，并于给药第5日后消失。给药后，基质对照组3只和复方薰衣草油膏低剂量组6只、中剂量组3只、高剂量组2只大鼠出现不同程度的皮肤破损、结痂，其中9只在给药期间内症状自行消失，4只在给药结束症状未消失，1只停药第30日观察期结束时症状依然存在。

3.2.2 对体质量及进食量的影响：(1)给药期间，各时段各组大鼠体质量均值均有所增长；复方薰衣草油膏低剂量组中，第4、5、11、13周雌性大鼠的体质量均值明显低于相应时段基质对照组(P<0.05)；复方薰衣草油膏中剂量组中，第4、5、14、15周雌性大鼠，第8—13周雄性大鼠的体质量均值明显低于相应时段基质对照组(P<0.05)；复方薰衣草油膏高剂量组中，第4、15周雌性大鼠体质量均值明显低于相应时段基质对照组(P<0.05)，差异均有统计学意义，见图1。(2)给药期间，与基质对照组比较，复方薰衣草油膏各剂量组雌性大鼠的进食量总体在18～35 g浮动、雄性大鼠在20～38 g浮动；复方薰衣草油膏低剂量组中，第1、4、5、9周雌性大鼠进食量明显低于相应时段基质对照组(P<0.05)，第17周雌性大鼠、第10周雄性大鼠的进食量均明显高于相应时段基质对照组(P<0.05、P<0.01)；复方薰衣草油膏中剂量组中，第5、9周雌性大鼠的进食量明显低于相应时段基质对照组(P<0.05)，第10、11周雌性大鼠，第11、12周雄性大鼠的进食量均明显高于相应时段基质对照组(P<0.05、P<0.01)；复方薰衣草油膏高剂量组中，第10、11、14周雌性大鼠，第2、5、6、10—12周雄性大鼠的进食量均明显高于相应时段基质对照组(P<0.05、P<0.01)。

A.雄鼠；B.雌鼠A.male rats；B.female rats图1 各组大鼠平均体质量增长情况Fig 1 Growth of average body mass of rats for CLO

3.2.3 对血常规的影响：给药第92日，与基质对照组比较，复方薰衣草油膏低剂量组雄性大鼠血小板计数(PLT)明显升高，差异有统计学意义(P<0.05)。但无量效关，且仍在正常值范围内，故考虑与给药无关。

3.2.4 对血清生化学的影响：给药第92日，与基质对照组比较，复方薰衣草油膏中剂量组雄性大鼠UREA明显降低，差异有统计学意义(P<0.05)；停药第30 d，与基质对照组比较，复方薰衣草油膏小剂量组雄性GLU明显降低，差异有统计学意义(P<0.05)。但以上指标的变化均无量效关系，且均在正常值范围，故考虑与给药无关。

3.2.5 对大鼠脏器质量和系数的影响：给药第92日，复方薰衣草油膏各组雌性大鼠肾脏、子宫质量明显低于基质对照组(P<0.05)；复方薰衣草油膏低剂量组雌性大鼠胸腺脏器系数明显高于基质对照组(P<0.05)，差异均有统计学意义。停药第30 d，复方薰衣草油膏中剂量组雌性大鼠肾脏脏器系数明显高于基质对照组(P<0.05)；各组大鼠脏器质量的差异无统计学意义(P>0.05)。但以上指标的变化均无量效关系，且均在正常值范围，故考虑与给药无关。

3.2.6 大体解剖观察：给药第92日及停药第30 d，处死各组大鼠，进行大体解剖观察，均未见肉眼可见的明显异常。

3.2.7 病理学检查：本研究中，给药期间，基质对照组2只雄性大鼠出现皮肤的炎症反应，复方薰衣草油膏高剂量组大鼠的各脏器组织未发现与给药相关的毒性病理改变；停药4周后，基质对照组与复方薰衣草油膏高剂量组大鼠均未见蓄积及迟发性毒性病理改变。

4 讨论

长期毒性实验中，除基质对照组外，复方薰衣草油膏各组大鼠在给药后第1日出现不同程度的打喷嚏、不安反应，并于给药后第5日消失，可能是该药有较浓重的薰衣草香气，大鼠刚开始无法适应所致。给药期间，基质对照组及复方薰衣草油膏各组共14只大鼠出现不同程度的皮肤破损、结痂，其中9只在给药期间症状自行消失，4只在给药结束后症状未消失，1只停药第30日症状依然存在。虽然大鼠在给药及恢复期均有皮肤破损症状，但在一段时间内大部分大鼠均可自行恢复，且停药后亦有1只大鼠皮肤破损、结痂，推测该症状与给药无关。

给药期及停药恢复期，部分大鼠PLT升高、UREA降低、GLU降低，肾脏、子宫质量降低，肾脏脏器系数、胸腺脏器系数升高，但以上指标的变化均无量效关系，且均在正常值范围，故考虑与给药无关。

给药期及停药恢复期，复方薰衣草油膏各组大鼠的体质量均值自第4周开始低于基质对照组；部分时段的体质量与基质对照组的差异有统计学意义，但未呈现出与剂量的相关性；部分时段的体质量均值低于基质对照组。可能的原因是：芳香气味被吸入后，能抑制大脑中的下丘脑，减少饥饿信息的释放，其中薰衣草能让人减少对油腻食物的欲望，薄荷能提神醒脑、控制食欲。未见其他血液学、血生化[14]、脏器质量及脏器系数、病理学检查方面的异常。

综上所述，在本实验条件下，Wistar大鼠皮肤反复给予不同剂量复方薰衣草油膏90 d，未见明显毒性反应；复方薰衣草油膏1.8 g/kg剂量组中，2只大鼠出现皮肤破损(可自行恢复)，该组大鼠平均体质量轻微下降，但不显著，推测非药物毒性作用所致，因此，认为1.8 g/kg为外用安全剂量。另外，急性毒性实验也验证了复方薰衣草油膏属无明显皮肤毒性的外用药物。

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Study on Acute and Long-term Toxicity of Compound Lavender OintmentΔ

ZHANG Qun1,SUN Yan1,SUN Yuhua2

(1.Dept.of Pharmacy,Ili Kazak Autonomous Prefecture Friendship Hospital,Xinjiang Yining 835000,China; 2.Pharmacology Room,the Xinjiang Uygur Autonomous Region Institute of Materia Medica,Xinjiang Wulumuqi 830001,China)

OBJECTIVE: To investigate the acute and long-term toxicity of the compound lavender ointment(CLO),so as to provide experimental evidence for its application safety in clinic. METHODS: (1) Acute toxicity. 50 guinea pigs were randomly divided into blank control group,CLO high,medium and low dose group and matrix control group,with 10 cases in each group. Except for blank group,other groups were treated with broken skin treatment,and were respectively given CLO of 1.500,0.750 and 0.375 g/kg and matrix of 4.000 g/kg,and observation was continued for 14 d after dosing. (2) Long-term toxicity. 80 Wistarm rats were randomly divided into matrix control group and CLO high,medium and low dose group,with 20 cases in each(half male and half female),respectively treated with matrix of 6.0 g/kg and CLO of 1.8,0.9 and 0.3 g/kg,with administration on skin,qd,and observation was continued for 92 d after dosing. RESULTS: According to acute toxicity,there was no statistical significance in changes of body mass in 5 groups of guinea pig(P>0.05). During observation,the rats were eating or moving normally,there were no abnormal secretions,no erythema and edema at the administration site,no pigmentation and bleeding,as well as no death. In terms of long-term toxicity test,there were no statistically significant difference among 4 groups in general condition,behavior,food-intake,body weight,peripheral hemogram,routine urine parameters,blood biochemistry,organ index as well as pathologic histology(P>0.05). CONCLUSIONS: The CLO has no obvious toxicity to skin,and no untoward effects for percutaneous drug delivery for 92 d. The maximum safe dose in rats is 1.8 g/kg.

Compound lavender ointment; Acute toxicity; Long term toxicity

新疆自治区科技支撑计划项目(No.201433102)

R99

A

1672-2124(2017)08-1028-03

DOI 10.14009/j.issn.1672-2124.2017.08.008

2017-04-18)

*主任药师。研究方向：医院药学。E-mail：924167490@qq.com