双氯芬酸钠注射液对仔猪腹腔注射内毒素(LPS)的临床解热药效试验

尹洪习 ， 孙传熙 ， 刘哲林 ， 吕淑荣 ， 万仁忠

(1.山东农业大学动物科技学院，山东泰安271018; 2. 烟台绿叶动物保健品有限公司, 山东烟台264003)

双氯芬酸钠注射液对仔猪腹腔注射内毒素(LPS)的临床解热药效试验

尹洪习1,2， 孙传熙1， 刘哲林2， 吕淑荣2， 万仁忠1

(1.山东农业大学动物科技学院，山东泰安271018; 2. 烟台绿叶动物保健品有限公司, 山东烟台264003)

双氯芬酸钠注射液在人药领域应用广泛，在临床上有很好的解热、镇痛效果。本试验目的是验证双氯芬酸钠注射液在靶动物猪上的解热效果。结果表明：(1)双氯芬酸钠注射液低剂量组在治疗猪发热方面具有一定的临床效果，但其效果稍差于对乙酰氨基酚组；(2)双氯芬酸钠注射液中、高剂量组的临床解热综合效果优于对乙酰氨基酚组；(3)从临床使用及经济角度考虑，选用中剂量作为解热的推荐剂量，即双氯芬酸钠临床肌肉注射给药剂量为0.05 mL/kg体重。

双氯芬酸钠注射液;腹腔;内毒素;解热;仔猪

兽医临床实践证明，体温反常是猪生理机能被扰乱的重要症状之一，引起体温升高的因素很多[1]，临床上分为感染性与非感染性发热，以感染性发热最为常见，在猪的许多疾病中，尤其是患某些传染疾病时，体温升高比其他症状出现得早，合理有效地控制发热症状，是治疗某些疾病的重要手段之一。

双氯芬酸钠注射液在人药领域应用广泛，在临床上有很好的解热、镇痛效果，二十世纪八十年代起就有应用，目前国内有20多家人用药厂商有正规批准文号。本试验目的是验证双氯芬酸钠注射液在靶动物猪上的解热效果。

经查阅相关文献资料[2-3]，以及前期预试验，我们采用对2月龄仔猪腹腔注射内毒素(LPS)1μg/kg体重后的发热模型为研究对象，测定机体内致热中枢介质PGE2等指标的变化，测定发热猪体温及观察临床症状变化，评价双氯芬酸钠注射液对内毒素诱导猪发热的临床解热药效。

1 试验材料

1.1 试验药品 双氯芬酸钠注射液，规格：100 mL: 5 g，批号：121012，由烟台绿叶动物保健品有限公司提供；对乙酰氨基酚注射液，规格：10 mL, 1 g，批号：130114，江西金康佳生化药业有限公司。

1.2 试验试剂 精制大肠杆菌内毒素(LPS)，批号:L2880，美国Sigma公司；猪前列腺素E2(PGE2)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒，批号：201309，上海邦奕生物科技有限公司；依诺肝素钠，批号:130506，烟台东诚生化股份有限公司。

1.3 试验仪器 WAT-101兽用体温计；酶标仪，美国Molecular Devices(MD)公司，型号：SpectraMaxplus384等。

1.4 试验动物 60头健康长白猪，雌雄各半，2月龄，体重16～18 kg，按常规喂养，自由饮水。

2 试验方法

2.1 剂量设计 双氯芬酸钠注射液临床药效试验中剂量拟定为0.05 mL/kg体重，对照药物对乙酰氨基酚注射液剂量拟定为0.05 mL/kg体重。

2.2 试验设计 60头2月龄仔猪，雌雄各半，称重、按日龄和体重相近的原则随机分为6组，以耳号标记，每组10头，试验分组及处理情况见表1。

表1 试验仔猪分组及处理

注：发热模型的建立：用灭菌生理盐水将精制大肠杆菌内毒素稀释成10 μg/mL，仔猪腹腔注射内毒素1 μg/kg体重，攻毒后4 h，攻毒组的平均体温高于阴性对照组0.5 ℃，即为造模成功[2-3]

2.3 检测指标样品采集、处理和测定方法 攻毒前7 d，记录各试验仔猪每天的临床症状，攻毒前3 d，每天早、中、晚测定仔猪体温，取平均值作为仔猪的基础体温，除阴性对照组外，各组均1次性腹腔注射内毒素1 μg/kg体重攻毒，建立试验猪发热模型[4-6]，4 h后各组体温均高于阴性对照组0.5 ℃，即造模成功，各组均按剂量肌肉注射给药，采集攻毒后0、2.5、4.0、4.5、5.0、6.0、12.0、24.0 h时间点的血样1 mL，采用肝素钠抗凝剂抗凝，4 500 r/min离心10 min，取上清液，-20 ℃保存备用，采用猪前列腺素PGE2 ELISA试剂盒检测血浆中的PGE2浓度，并同步测定仔猪体温，观察临床症状以此来评价受试药物的临床解热药效。

2.4 临床观察指标 观察并记录各组试验仔猪给药后的精神状态，活动情况，以及呕吐、腹泻情况，按照表2评分标准综合打分；记录每组的采食情况，统计各组间的差异。

2.5 数据处理 数据用Excel软件进行处理后，采用SPSS17.0统计分析软件对数据进行One-Way ANOVA分析及LSD法多重比较。

3 结果与分析

3.1 各组动物血浆PGE2的变化 本试验各组仔猪攻毒后血浆中PGE2的含量见表3，PGE2含量柱形图见图1。

表2 临床症状综合评分标准

图1 各组仔猪攻毒后血浆中PGE2含量柱形图

组别时间点/h025445561224阴性对照组510±245082±275067±215102±19a5095±23a5126±27a5105±22a509±17a阳性对照组5123±316895±278678±237825±17b770±21b7422±35b5506±27b510±21a对乙酰氨基酚对照组5076±226904±138617±255306±21c4701±14c4316±22c485±25c495±15a双氯芬酸钠低剂量组5083±216835±188595±245895±23d543±27d490±18d501±23d510±19a双氯芬酸钠中剂量组5103±146897±228701±195235±23c461±25c428±14c480±23c495±22a双氯芬酸钠高剂量组5126±176837±238657±185206±27c4596±15c4268±23c475±17c498±15a

注：每一个时间点内，标着不同字母的两组数据差异显著，标着相同字母的两组数据差异不显著,下表同

从表3及图1可以看出：(1)阴性对照组仔猪血浆中PGE2的含量变化基本维持稳定，在腹腔攻毒后12 h内与其余各组均存在显著性差异(P<0.05)；阳性对照组仔猪血浆中PGE2的含量在攻毒后显著增高；(2)各给药组仔猪血浆中PGE2的含量与阳性对照组经统计学分析均存在显著性差异(P<0.05)；(3)腹腔攻毒4 h后，双氯芬酸钠低剂量组血浆中PGE2的含量比对乙酰氨基酚对照组高，二者存在显著性差异(P<0.05)；(4)腹腔攻毒4 h后，双氯芬酸钠中、高剂量组血浆中PGE2的含量与对乙酰氨基酚对照组无显著性差异(P>0.05)；(5)各给药组血浆中PGE2的含量在24 h时趋于稳定，与阴性对照组无显著性差异(P>0.05)。

结果表明，仔猪给药后对PGE2均具有抑制作用，中、高剂量双氯芬酸钠对PGE2的抑制效果与对乙酰氨基酚相当。

3.2 各组仔猪直肠温度的变化 本试验各组仔猪攻毒后直肠温度变化见表4，直肠温度变化趋势见图2。

图2 各组试验仔猪攻毒后直肠温度变化趋势图

表4 各组试验仔猪攻毒后直肠温度变化 ℃

从表4及图2可以看出：(1)阴性对照组体温较为平稳，其余各组体温均有不同程度的波动，攻毒后阳性对照组体温波动最大；(2)腹腔注射内毒素后12 h内，各给药组与阳性对照组体温经统计学分析有显著性差异(P<0.05)；(3)双氯芬酸钠低剂量组体温下降较对乙酰氨基酚对照组慢，在攻毒4.5 h前者的平均体温显著高于后者(P<0.05)，攻毒5 h后则无显著性差异；(4)双氯芬酸钠中、高剂量组体温下降较对乙酰氨基酚对照组快，在攻毒 5～6 h，二者存在显著性差异(P<0.05)，在攻毒5 h(即给药后1 h)体温就已经回复到正常基础体温；

由此可见，双氯芬酸钠中、高剂量组解热效果优于对乙酰氨基酚组，具有起效快，解热持续时间长的特点。

3.3 临床观察结果 本试验仔猪临床综合症状见表5。

表5 各组试验仔猪攻毒后临床症状综合评分 ±SD, n=10)

从表5可以看出： (1)除阴性对照组外，其余各组在腹腔注射内毒素后均出现精神低迷、嗜睡、呕吐、腹泻等临床症状，耳朵均发红，产生明显发热症状，给药后均有好转，阳性对照组则持续发热；(2)各给药组与阳性对照组综合评分经统计学分析存在显著性差异(P<0.05)；(3)双氯芬酸钠低剂量组评分高于对乙酰氨基酚对照组，存在显著性差异(P<0.05)；(4)双氯芬酸钠中、高剂量组评分低于对乙酰氨基酚对照组，存在显著性差异(P<0.05)，从临床表现来看，双氯芬酸钠注射液中、高剂量组要优于对乙酰氨基酚对照组。

4 结论

由猪血浆中PGE2浓度的变化显示，双氯芬酸钠对靶动物猪PGE2浓度的影响与对乙酰氨基酚无显著性差异，查阅相关国内外文献[7]，非甾体抗炎药对猪内毒素(LPS)致热血浆中PGE2浓度的影响灵敏度不高，但温度变化与前期进行的家兔致热药效试验一致，双氯芬酸钠解热效果优于对乙酰氨基酚，结合体温及临床观测结果，我们得出以下结论：

(1) 双氯芬酸钠注射液低剂量组在治疗猪发热方面具有一定的临床效果，但其效果稍差于对乙酰氨基酚组；(2) 双氯芬酸钠注射液中、高剂量组的临床解热综合效果优于对乙酰氨基酚组，并且双氯芬酸钠注射液中、高剂量组的临床药效无显著性差异；(3) 从临床使用及经济角度考虑，选用中剂量作为解热的推荐剂量，即双氯芬酸钠临床肌肉注射给药剂量为0.05 mL/kg体重。

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Diclofenac Sodium Injection on Piglet Intraperitoneal Injection of Endotoxin (LPS) Clinical Efficacy of Antipyretic Test

YIN Hong-xi1,2, SUN Chuan-xi1, LIU Zhe-lin1, LV Shu-rong1, WAN Ren-zhong1

(1.College of Animal Science and Veterinary Medicine, Shandong Agricultural University, Taian 271018, China; 2.Yantai LUYE Animal Health Products Co., Ltd.,Yantai 264003, China)

Diclofenac Sodium Injection is widely used in medicine, and has good antipyretic analgesic effect in clinic. The purpose of this study was to verify the effect of antipyretic in the target animal pigs on Diclofenac Sodium Injection. The results showed that: 1. Diclofenac Sodium Injection low dose group had a clinical effect in the treatment of swine fever, but the effect was slightly worse than the acetaminophen group; 2. Diclofenac Sodium Injection in the high dose group of comprehensive clinical effect of antipyretic was better than that of the acetaminophen group; 3. Considering the clinical use and from the economic point of view, the selection of the recommended dose as antipyretic, namely diclofenac sodium clinical dosage for intramuscular injection was 0.05 ml/kg body weight.

diclofenac sodium injection; intraperitoneal; endotoxin; antipyretic; piglets

WAN Ren-zhong

2017-03-15

烟台市科技发展计划(2014NC150)

尹洪习(1972-)，男，硕士，工程师，从事新兽药研发工作，E-mail: yinhongxi@luye.cn

孙传熙(1992-)，男，硕士生，研究方向为兽医药理毒理学，E-mail: yinhongxi@luye.cn

万仁忠，E-mail:wrzh63@163.com

S859.79

A

0529-6005(2017)07-0097-04

注：孙传熙与尹洪习对本文具有同等贡献