Ki67在瘢痕癌中的表达及其临床意义

甘 雨，彭代智，段小冬，张宜澜，刘 洋，黄亚兰

• 论 著 •

Ki67在瘢痕癌中的表达及其临床意义

甘 雨，彭代智，段小冬，张宜澜，刘 洋，黄亚兰

甘 雨

目的 探讨Ki67在瘢痕癌组织中的表达及与患者临床特征的关系。方法 应用免疫组化SP法检测Ki67在27例患者瘢痕癌组织中的表达，并结合瘢痕癌患者的临床特征进行分析。结果 27例患者瘢痕癌组织的Ki67检出率为100%。根据Ki67阳性细胞百分率将患者分为3组，≤10%组10例，11%～40%组10例，≥41%组7例。进一步分析发现各组的Ki67阳性细胞百分率与瘢痕溃疡持续时间长短、浸润深度和手术后复发相关，Ki67阳性细胞百分率越高，溃疡持续时间越短（P＜0.05）、浸润越深（P＜ 0.01）、手术后越易复发（P＜0.05）；而与瘢痕病程、溃疡面积无关（P＞0.05）。结论 Ki67的表达在瘢痕癌浸润深度和术后复发的临床评估中具有重要的指导意义。

瘢痕癌；Ki67；皮肤溃疡；肿瘤浸润；术后复发

[J Pract Dermatol, 2017, 10(3):129-131]

瘢痕癌是指皮肤组织病理性瘢痕被覆上皮细胞发生恶性变的癌。瘢痕癌常见于深度烧伤后的陈旧性瘢痕以及其他一些经久不愈或反复破溃的瘢痕创面[1]。瘢痕癌最初特指瘢痕鳞状细胞癌，但随着瘢痕内其他一些细胞恶变的报道，现瘢痕癌泛指所有原发于体表瘢痕组织的恶性肿瘤[2,3]。随着国家医保覆盖面的大幅度提高，越来越多的瘢痕癌患者开始需求诊断和治疗。Ki67是一种核增殖性基因，其表达蛋白Ki67属于非组蛋白抗原，可作用于除G0期以外所有的细胞周期阶段[4]。本研究回顾性收集了27例瘢痕癌患者的临床资料，并采用免疫组化技术观察瘢痕癌组织中Ki67的表达，探讨Ki67在恶性肿瘤转化进程中的作用和关系，预期为瘢痕癌的临床诊断、治疗和复发判断提供参考依据。

1 资料与方法

1.1 临床资料

我院烧伤科2012年3月—2016年7月经过临床和组织病理学检查确诊为瘢痕癌且无并发其他肿瘤、近期内未接受过放疗等相关治疗的住院患者、且已行组织病理免疫组化检查的患者27例。收集了其现病史、既往史、临床表现、创面分泌物微生物培养、常规组织病理学和免疫组化检查、治疗措施、复发和预后等多项临床资料。

1.2 方法

所有患者的瘢痕癌组织标本常规甲醛固定，24 h内取材，石蜡包埋，连续5 μm厚度切片，苏木精-伊红（HE）染色。采用鼠抗人Ki67单克隆抗体、SP免疫组化试剂盒，并按照说明书操作进行免疫组化染色，光学显微镜下观察细胞染色情况。Ki67显色部位为细胞核，一旦有棕黄色颗粒出现即为阳性细胞。结果判断以阳性细胞所占百分率表示，即高倍镜下随机选取5个视野，每个视野计数200个细胞，将阳性细胞数总和除以计数细胞总数。

1.3 统计学方法

2 结果

2.1 27例瘢痕癌患者的临床特征

27例瘢痕癌患者中男18例（占66.7%），女9例（占33.3%），男女比例为3∶2。年龄23～78（50.3±12.0）岁，其中男患者平均年龄（48.9±12.0）岁，女患者平均年龄（49.5±12.5）岁。皮损部位分布：头部10例（37.0%）、躯干2例（7.4%）、上肢3例（11.1%）、下肢12例（44.5%）。原发病发展为瘢痕癌间隔时间为10～70（32.9±15.8）年，溃烂持续时间为0.3～40（7.9±10.4）年，瘢痕溃烂面积为2～200（61.3±58.5）cm2。

临床上瘢痕癌的大体形态为两种类型，浸润溃疡型（图1a），共17例（63.0%）；外生菜花型（图1b），共10例（37.0%）。27例瘢痕癌组织学分类包括25例高分化鳞状细胞癌（93.0%），1例低分化鳞状细胞癌（4.0%），1例软组织肉瘤（4.0%）。术前细菌学培养显示，13例患者伤口分泌物培养示阳性，主要以金黄色葡萄球菌（5例）、大肠埃希菌（4例）、铜绿假单胞菌（3例），其他菌（1例）。淋巴结增大5例（其中1例确诊转移），淋巴结无转移26例。

27例患者术后随访时间5～56个月，平均（22.6 ±16.9）个月。共有6例（22.2%）复发，复发时间为术后（3.5±2.1）个月，其中2例术后接受放疗的复发患者复发时间为（2.5±0.7）个月，4例术后未接受放疗的复发患者复发时间为（4.0±2.4）个月。

2.2 Ki67的表达与瘢痕癌临床特征的关系

27例瘢痕癌患者的组织样本均表达Ki67，但根据其阳性细胞百分率高低程度，可分为3组，≤10%有10例，11%～40%有10例，≥41%有7例（表1）。3组瘢痕癌患者的伤口分泌物均培养出金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和铜绿假单胞菌，组间的检出率比较差异无统计学意义。3组瘢痕癌患者的原发灶部位（头颈、躯干、上肢、下肢）在各组中均有出现，组间比较差异无统计学意义。

2.2.1 Ki67的表达与瘢痕形成年限、溃疡持续年限及溃疡面积的关系 阳性细胞百分率与溃疡持续年限之间存在明显的负相关（r=-0.425，P=0.027）。阳性细胞百分率与瘢痕形成年限之间无相关关系（r=0.341，P=0.082＞0.05）。阳性细胞百分率与溃疡面积之间无相关关系（r=0.168，P=0.401）。可见，Ki67阳性细胞百分率的增大与溃疡持续时间长短有关，Ki67阳性细胞数百分率越高，瘢痕溃疡时间越短；与瘢痕形成年限、肿瘤溃疡面积大小关系不明显。

图1 瘢痕癌患者典型皮损

表1 27例瘢痕癌患者Ki67的表达与主要临床特征的关系 （¯s）

表1 27例瘢痕癌患者Ki67的表达与主要临床特征的关系 （¯s）

患者例数（n） 10 10 7 Ki67阳性细胞（%） 8.1±3.1 22.0±5.9 42.9±4.9瘢痕年限（y） 28.3±13.8 31.3±15.7 41.9±18.1 r=0.341 0.082溃疡年限（y） 12.4±12.8 6.3±8.7 1.5±1.0 r=-0.425 0.027溃疡面积（cm2） 47.5±59.0 66.4±54.4 73.7±68.1 r=0.168 0.401浸润深度评分（n） χ2=18.357 0.000皮内（+） 7 1 0皮下（++） 3 6 0肌肉骨骼（+++） 0 3 7术后复发情况χ2=6.667 0.036复发例数（n） 1 1 4复发百分率（%） 10.0 10.0 57.2

2.2.2 Ki67与瘢痕癌浸润深度的关系 Ki67阳性细胞百分率与瘢痕癌组织浸润深度之间有显著的相关关系（χ2=18.357，P=0.000）。Ki67阳性细胞数百分率越高，瘢痕癌组织浸润深度越深。

2.2.3 Ki67与瘢痕癌复发情况的关系 Ki67阳性细胞百分率与瘢痕癌患者术后复发情况之间有明显的关系，其Ki67阳性细胞数百分率越高，患者术后复发的概率也会显著增高（χ2=6.667，P=0.036）。

3 讨论

瘢痕癌最常见于深度烧伤非手术治愈的陈旧性瘢痕，其次是慢性骨髓炎、静脉瘀滞性溃疡、压疮，以及其他各类迁延不愈创面或反复破溃的瘢痕[5]。据报道，烧伤瘢痕恶变的发生率为0.77%～2%[6]。有文献报道瘢痕癌患者的年龄为18～84岁，平均50岁，从原发病发展至瘢痕癌的平均时间为31年[7]。本组患者的平均年龄、病变部位、溃疡面积与文献报道接近。瘢痕癌最常见的组织病理学类型为鳞状细胞癌，其次为基底细胞癌，其他例如腺癌、黑素瘤、骨肉瘤、纤维肉瘤、脂肪肉瘤等较少见[7]。本组26例患者为鳞状细胞癌、1例患者为软组织梭形细胞肉瘤，与之相符。27例患者中有6例复发，其术后复发时间均在半年内，提示在术后半年内要加强随访。

Ki67是近年临床上组织病理检查常用的细胞增殖指标之一[8]。无论正常细胞株或肿瘤细胞株，其抗原性的表达随细胞周期的进展而增加，它在G0期和G早期不表达，G1中期到后期始出现表达，S期到后半期增加明显，G2/M期达高峰[9]，其在细胞分裂后迅速降解或丢失，它的表达是细胞处于分裂期的标志。Ki67能客观反映细胞的增殖活性，是临床上应用比较广泛的增殖细胞标记物，并与多种肿瘤的发生发展、转移和预后有关[10]。有研究表明Ki67的染色部位主要分布在肿瘤细胞的胞核中，而在正常皮肤组织中均无着色[11]，且随着肿瘤恶性程度增高，其表达增强[12]。故本研究用Ki67的表达程度来分析瘢痕癌患者的瘢痕溃烂、溃烂面积、浸润深度等临床特征。本研究发现Ki67阳性细胞百分率与溃疡持续时间长短可能有关 ，其阳性细胞百分率的增高提示瘢痕发生溃烂的年限越短，越容易出现溃烂 ，且面积偏大，易于引起患者重视而到医院就医。通过观察患者的临床特征，Ki67阳性细胞百分率高的患者其瘢痕癌浸润深度普遍比较深，其术后复发率相对较高，说明其细胞增殖程度越高，恶性程度越高；而Ki67阳性细胞百分率不高的患者其溃疡持续时间较长，溃疡面积和浸润深度相对比较稳定，说明其细胞增殖程度和恶性程度相对不高。虽然有人曾报道增生性瘢痕组织角质形成细胞和成纤维细胞表达Ki67增多[13]，但最新文献表明任何瘢痕组织（包括非病理性瘢痕和病理性瘢痕）的角质形成细胞表达Ki67与正常皮肤无差别[14]。目前未见Ki67与瘢痕癌的相关临床报道和基础研究文献支持这一初步结果，值得今后关注相关进展和进一步研究。

本研究还发现Ki67阳性细胞百分率与瘢痕癌组织浸润深度、患者术后复发率有关。细胞的增殖活性越高，说明肿瘤组织生长越迅速，其浸润深度自然就越深。而术后复发主要受手术根治程度的影响[15]，肿瘤组织增殖越活跃，浸润深度越深，其彻底切除干净的难度就越大，术后复发的概率相对就比较高。复发的6例患者，其Ki67阳性细胞百分率为（32.5±16.0）%。由此可见，Ki67反映了瘢痕癌患者肿瘤组织的溃烂持续时间、生长浸润特点及手术后复发等临床特征，这对于瘢痕癌的临床诊断和治疗方案确定起到重要的指导价值。

总而言之，本研究提示Ki67在瘢痕癌组织中的表达水平可反映瘢痕癌的发生、发展和预后等临床特点，可作为瘢痕癌常规组织病理和免疫组化检查的常规指标，为临床制定瘢痕癌的相关诊疗常规提供重要的参考依据。

[1] Pekarek B, Buck S, Osher L. A comprehensive review on marjolin's ulcers: diagnosis and treatment [J]. J Am Col Certif Wound Spec, 2011, 3(3):60-64.

[2] Kowal-Vern A, Criswell BK. Burn scar neoplasms: a literature review and statistical analysis [J]. Burns, 2005, 31(4):403-413.

[3] Ochenduszkiewicz U, Matkowski R, Szynglarewicz B, et a1. Marjolin's ulcer: malignant neoplasm arising in scars [J]. Rep Praet Oncol Radiother, 2006, 11(3):135-138.

[4] 史飞涛, 秦守杰, 孔武明. 中期因子与Ki67在大肠癌中的表达及其临床意义 [J]. 中国实用医刊, 2012, 39(15):12-14.

[5] Saaiq M, Ashraf B. Marjolin's ulcers in the post-burned lesions and scars [J]. World J Clin Cases, 2014, 2(10):507-514.

[6] Copcu E. Marjolin's ulcer: a preventable complication of burns? [J]. Plast Reconstr Surg, 2009, 124(1):e156-164.

[7] Das KK, Chakaraborty A, Rahman A, et al. Incidences of malignancy in chronic burn scar ulcers: experience from bangladesh [J]. Burns, 2015, 41(6):1315-1321.

[8] Sueta A, Yamamoto Y, Hayashi M, et al. Clinical significance of pretherapeutic Ki67 as a predictive parameter for response to neoadjuvant chemotherapy in breast cancer: is it equally useful across tumor subtypes? [J]. Surgery, 2014, 155(5):927-35.

[9] 姚开泰. 抑瘤基因、细胞周期、DNA修复与肿瘤易感性 [J]. 中国科学基金, 1995, (2):17-23.

[10] Gurgel CA, Ramos EA, Azevedo RA, et al. Expression of Ki-67, p53 and p63 proteins in keratocyst odontogenic tumours: an immunohistochemical study [J]. J Mol Histol, 2008, 39(3):311-316.

[11] 李丽丽, 朴冰, 崔英, 等. COX-2和Ki67在鲍恩病皮损中的表达 [J].实用皮肤病学杂志, 2014, 7(2):107-109.

[12] 谢红付, 程晓明, 李吉. COX-2在皮肤鳞状细胞癌中的检测 [J]. 中国皮肤性病学杂志, 2005, 19(8):452-454.

[13] 王擎, 付晋凤, 葛茂星, 等. Ki67核增殖抗原在增生性瘢痕组织中的表达与意义 [J]. 国际医药卫生导报, 2008, 14(8):18-22.

[14] Limandjaja GC, Broek LJ, Waaijman T, et al. Increased epidermal thickness and abnormal epidermal differentiation in keloid scars [J]. Br J Dermatol, 2016, 176(1):116.

[15] Aliperti LA, Predina JD, Vachani A, et al. Local and systemic recurrence is the Achilles heel of cancer surgery [J]. Ann Surg Oncol, 2011, 18(3):603-607.

Expression of Ki67 in scar carcinoma and its clinical significance

GAN Yu，PENG Dai-zhi，DUAN Xiao-dong，et al

Institute of Burn Research, Southwest Hospital, State Key Laboratory of Trauma, Burns and Combined Injury, the Third Military Medical University, Chongqing 400038, China

Objective To investigate the expression of Ki67 in scar carcinoma tissues and its correlations with the clinical characteristics of the patients with scar carcinoma. Methods A total of 27 patients who had been pathologically diagnosed as scar carcinoma were enrolled in this retrospective study. The expression of Ki67 in scar carcinoma tissues from those 27 cases was measured by immunohistochemical method. The correlations between Ki67 protein expression and each relevant clinical characteristic were also analyzed. Results The detection rate of Ki67 protein in scar carcinoma tissues was 100% (27/27). According to the percentage of Ki67-positive cells, the patients were divided into three groups, i.e. ≤10% (10 cases), 11%～40% (10 cases) and ≥41% (7 cases). The percentage of Ki67-positive cells in scar carcinoma tissues was significantly associated with ulcer duration(P＜0.05), depth of invasion(P＜0.01) and post-operation recurrence(P＜0.05). However, the expression of Ki67 was not correlated with scar duration and ulcer size in scar carcinoma tissues(P=0.082, P=0.401). Conclusion The expression of Ki67 in scar carcinoma tissues would provide a meaningful evidence for evaluating invasion depth and recurrence after operation.

Scar carcinoma；Ki67；Skin ulcer；Invasion depth；Recurrence

R739.5

A

1674-1293(2017)03-0129-03

2017-01-06

2017-03-11）

（本文编辑 耿建丽）

10.11786/sypfbxzz.1674-1293.20170301

第三军医大学第一附属医院重大领域技术创新计划一般项目（SWH2016ZDCX3021）

400038 重庆，第三军医大学西南医院全军烧伤研究所，创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室（甘雨，彭代智，段小冬，张宜澜，刘洋，黄亚兰）

甘雨，硕士研究生在读，研究方向：皮肤瘢痕癌的诊疗，

E-mail: 106462755@qq.com

彭代智，E-mail: dzpengmd@126.com