芒柄花黄素对阿尔茨海默病小鼠海马组织超微结构和肿瘤坏死因子-α的影响

费洪新，沈 博，陈玉琦，潘思文，明 玥，张英博

（齐齐哈尔医学院，黑龙江 齐齐哈尔 161006）

·药物分析·

芒柄花黄素对阿尔茨海默病小鼠海马组织超微结构和肿瘤坏死因子-α的影响

费洪新，沈 博，陈玉琦，潘思文，明 玥，张英博

（齐齐哈尔医学院，黑龙江 齐齐哈尔 161006）

目的探讨芒柄花黄素（FMN）对阿尔茨海默病（AD）小鼠海马组织超微结构和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的影响。方法小鼠随机分成对照组，模型组，治疗组，FMN高、中、低剂量组。采用β-淀粉样蛋白双侧脑室注射和D-半乳糖腹腔注射的方法诱导AD模型。给予FMN连续灌胃治疗后取材，观察小鼠海马镜下超微结构，采用双抗体夹心法测定海马组织炎症介质TNF-α水平。结果与模型组比较，FMN高、中剂量组脑海马形态明显改善，海马组织炎症介质TNF-α水平明显降低，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论FMN能改善AD小鼠海马超微结构，降低海马组织炎症介质TNF-α水平。

芒柄花黄素；阿尔茨海默病；超微结构

阿尔茨海默病是一种临床上非常常见的老年性、神经性、退行性疾病之一。据报道，AD患病率、死亡率逐年增加。目前，研究副作用小、具有整体调节作用的中药防治AD就显得尤为重要。前期研究显示，补阳还五汤对AD模型形态学、核转录因子-κBp65、血脑屏障[1]等有改善作用，补阳还五汤君药黄芪多糖对AD模型海马结构具有改善作用[2]。现代药理学研究显示，补阳还五汤的主要成分包括芒柄花黄、黄芪多糖、黄芪甲苷、阿魏酸、芍药苷、红花黄色素、川芎嗪等，其中，FMN药理作用包括很多，例如FMN可以降低糖尿病小鼠高血糖[3]、抑制脂肪生成、促进骨组织再生与愈合、促进白血病K562细胞凋亡、改善动脉内皮细胞功能。本实验采用FMN为处理因素，观察FMN对AD小鼠模型超微结构和TNF-α的影响，以期为临床上防治AD疾病奠定坚实的基础。

1 资料与方法

1.1 仪器和试剂

STW-1型脑立体定位仪；TCNAI-G2型透射电镜；HMIAS型图文分析系统；6100型RT-雷杜酶标仪；试剂盐酸多奈哌齐；β-淀粉样蛋白1-42和D-半乳糖；FMNTNF-α酶联免疫试剂盒。

1.2 复制模型

小鼠麻醉后，无菌消毒小鼠头部，STW-1型脑立体定位仪定位小鼠海马，使用经过消毒的微量加样器双侧脑室海马区一次性缓慢微量注入凝聚态β-淀粉样蛋白，同时腹腔注射D-半乳糖；对照组小鼠需要在小鼠双侧脑室内和腹腔内注射等量生理盐水。

1.3 分组给药

小鼠随机分为6组，包括对照组，模型组，治疗组，FMN高、中、低剂量组。对照组和模型组给予生理盐水灌胃，治疗组给予多奈哌齐灌胃，FMN高、中、低剂量组分别给予FMN 灌胃，各组小鼠灌胃40d。

观察小鼠体重指数、摄取食物、饮用水、毛发色泽、活动度、粪便颜色、动物垫料的潮湿度等指标。

海马超微结构。各组小鼠末次给药2h后，使用水合氯醛进行麻醉，左心室缓慢灌注生理盐水。肝脏变白后，用2.5%戊二醛灌注，取材小鼠脑组织海马，经过2.5%戊二醛固定、四氧化锇固定、脱水、包埋、切片等基本过程，观察小鼠脑组织海马CA1区结构。

观察海马TNF-α含量 各组小鼠断头后，迅速取小鼠脑海马，匀浆，冰箱进行保存，按酶联免疫试剂盒说明书使用6100型RT-雷杜酶标仪450nm波长处测定各孔吸光度（A），计算小鼠海马TNF-α含量。

1.4 统计学方法

2 结 果

对照组小鼠饮食与饮水正常；模型组与FMN低剂量两组小鼠皮肤弹性差，行动迟缓；治疗组、FMN高剂量组、FMN中剂量组总体状态好于模型组。 FMN对AD小鼠脑海马CA1区超微结构的影响。对照组小鼠海马CA1区神经元细胞质丰富；模型组小鼠海马CA1区神经元细胞质较少，核染色质边集；治疗组、FMN高剂量组、FMN中剂量组和FMN低剂量组小鼠海马CA1区神经元细胞质内的细胞器不同程度影响；模型组小鼠海马TNF-α含量明显升高，差异有统计学意义（P＜0.05），差异具有统计学意义；治疗后，治疗组、FMN高剂量组、FMN中剂量组小鼠海马TNF-α含量明显降低，差异有统计学意义（P＜0.05）；与模型组比较，低剂量组小鼠海马TNF-α的含量改变不明显，差异无统计学意义（P＞0.05）。

3 讨 论

AD表现为脑组织神经元结构改变并伴有TNF-α含量增

[1] 费洪新,韩玉生,杜 徽,等.补阳还五汤对阿尔茨海默病小鼠海马形态学和β淀粉样蛋白水平的影响[J].中国实验方剂学杂志,2014:142-145.

[2] 费洪新,周忠光,刘 斌.补阳还五汤对阿尔茨海默病小鼠NF-κBp65蛋白的影响[J].中国老年学杂志,2015:5369-5371.

[3] 费洪新,周忠光,韩玉生,等.补阳还五汤对阿尔茨海默病小鼠血脑屏障通透性的影响[J].时珍国医国药,2015:1028-1031.

R96

B

ISSN.2095-8803.2017.27.016.02

黑龙江省齐齐哈尔市科学技术局科学技术计划项目（SFGG-201630）加，本实验评价FMN对AD小鼠超微结构和TNF-α含量的影响。本实验检测了脑组织海马TNF-α的含量，表明模型组小鼠海马区域无菌性炎症反应明显。经过治疗后，FMN高、中剂量组TNF-α水平明显降低，差异有统计学意义（P＜0.05），本实验显示TNF-α的变化趋势与AD小鼠海马CA1区结构的变化趋势相关联，说明FMN可以通过降低小鼠海马TNF-α含量来改善小鼠海马的超微结构。综上所述，FMN能改善AD小鼠海马超微结构，降低海马组织炎症介质TNF-α水平，推测FMN防治AD的机制与降低海马TNF-α含量有关。