丹参药材水溶性成分的高效液相色谱指纹图谱研究

耿 乾

（海南医学院，海南 海口 570102）

丹参药材水溶性成分的高效液相色谱指纹图谱研究

耿 乾

（海南医学院，海南 海口 570102）

目的 利用高效液相色谱建立5个地区的丹参样品的指纹图谱。方法 仪器为HP1100高效液相色谱仪和C18色谱柱，进样量为20 uL，利用甲醇和7%磷酸水溶液进行梯度洗脱，色谱柱温度为30摄氏度，流速设置为1.0 ml/min，检验波长设置为280 mm。结果 通过中药色谱图相似系统评价软件，将数据导入和修剪建立对照指纹图谱。5种来源的丹参指纹图谱与对照指纹图谱进行相似度比较，结果显示相似度均大于0.997；5种来源的丹参指纹图谱在保留时间上标准偏差最大为0.415%，而相对峰面积标准偏差最大为9.477%。结论 本研究建立5个地区的丹参样品水溶性成分的指纹图谱，峰分离度好，操作简单，大大减少检验时间。具备良好的灵敏度和稳定性，可用于丹参质量控制。

丹参，高效液相色谱，指纹图谱

随着中药学发展中药质量控制一直都是研究的热点，中药指纹图谱是目前用于鉴定中药质量的方法之一[1]。指纹图谱具备两个特点第一为根据药物的特征吸收峰来辨别药物的真伪，第二通过吸收峰面积来辨别药物的质量[2]。而丹参属于唇形科植物，在临床上常见于活血化瘀方和安神醒脑方中，按照其成分进行分化可为脂溶性成分和水溶性成分[3]。水溶性成分在心脏方面具有增加冠脉灌注，保护心肌的作用，对于肾脏具有抗氧化，减少炎症因子表达的作用。临床上对其研究不断深入，在临床上应用增加[4]。丹参可能受到产地、药物管理和杂志等的影响真伪和质量好坏，从而影响患者病情控制[5]。所以本研究应用高效液相色谱建立本院丹参的指纹图谱对水溶性成分的峰敏感性和分离作用。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

仪器为HP1100高效液相色谱仪和C18色谱柱。研究中使用的乙氰、甲醇和磷酸均为色谱醇。

1.2 研究药材编号及采购

研究对照品原茶儿醛、丹参素钠和丹参酚酸均从某生物制品鉴定所购入。研究药材编号及采购原。见表1。

表1 药材编号及采购原

1.3 溶液配制

称取不同样本0.5 g，将丹参过40目筛。应用锁式提取加入25 mL纯净水，回流1 h。结束后以采用微孔滤膜滤过备用。对照品配制将干燥后的原茶儿醛、丹参素钠和丹参酚酸精密称取1 mg，加入纯进水50 mL进行配置。取配制后溶液各1 mL，加入10 mL容量瓶中，加入纯进水配制到刻度待用。

1.4 高效液相色谱参数

进样量为20 uL，利用甲醇和7%磷酸水溶液进行梯度洗脱，色谱柱温度为30摄氏度，流速设置为1.0 ml/min，检验波长设置为280 mm。

2 结 果

2.1 指纹图谱分析

通过中药色谱图相似系统评价软件，将5种来源的丹参高效液相色谱数据进行导入和修剪建立对照指纹图谱。通过与对照品指纹图谱进行对比六种化学成分得到确认。将5种来源的丹参指纹图谱与对照指纹图谱进行相似度比较，结果显示相似度均大于0.997，见表2。

表2 样品相似度

2.1 两组疗效指标对比

根据五种来源的丹参高效液相色谱峰匹配结果显示共有22个共有峰，考虑到共有峰的稳定性，选取其中12个作为特有峰，包括原茶儿醛、丹参素钠和丹参酚酸的参照峰。计算五种来源丹参指纹图谱的峰保留时间和相对面积。见表3表4。

将研究样本与对照品指纹图谱对比结果可见12个特有峰的保留时间和相对面积浮动较小，结果显示在保留时间上标准偏差最大为0.415%，而相对峰面积标准偏差最大为9.477%。说明研究中的五种来源丹参指纹图谱相对稳定，有利于质量的控制。

表3 指纹图谱的峰保留时间对比

表4 指纹图谱的峰面积对比

3 讨 论

本研究对丹参水溶性成分建立指纹图谱，考察高效液相色谱对丹参水溶性成分峰的分离灵敏性。结果显示5种来源的丹参指纹图谱与对照指纹图谱进行相似度高，且保留时间上标准偏差最大为0.415%，而相对峰面积标准偏差最大为9.477%。提示高效液相色谱是一种可作为丹参水溶性成分质量控制的方法。在操作中需注意以下几点：

①色谱柱的选择决定了丹参峰的敏感性和分离情况，本研究使用的是C18色谱柱。有研究显示C18色谱柱能有效的分离丹参水溶性成分[6]。这也是本研究实现峰良好分离的关键之一。

②不同检验波长对生成丹参指纹图谱的信息量有差距，本研究选用280 mm的原因在于，在研究之前采用不同波长检验，发现在280 mm下可获得信息量最大的指纹图谱。

③目前梯度洗脱的方案有甲醇和磷酸水溶液，另一种为乙氰和磷酸水溶液，从试剂价格上考虑乙氰要贵于甲醇，同时甲醇较乙氰而言其毒性较低[7]。所以本研究采用的是甲醇和磷酸水溶液。

总上所述，利用高效液相色谱建立丹参水溶性成分的指纹图谱，对于成分的敏感性和分离作用较好，指纹图谱特征峰明显，可用于丹参水溶性成分质量控制。

[1] 刘东方,赵丽娜,李银峰,等.中药指纹图谱技术的研究进展及应用[J].中草药,2016,47(22):4085-4094.

[2] 甄汉深,范秀春,丘琴,等.中药指纹图谱研究的一些问题探讨[J].时珍国医国药,2015(8):1960-1961.

[3] 丁晓彦,刘 青,胡万峰,等.丹参水溶性成分HPLC指纹图谱与化学模式识别研究[J].辽宁中医杂志,2015(8):1479-1481.

[4] 陈俞材,方莲花,杜冠华.丹参水溶性化合物抗心肌缺血作用的研究进展[J].中国药理学通报,2015(2):162-165.

[5] 赵志刚,郜舒蕊,侯俊玲,等.不同产地加工方法对山东丹参药材质量的影响[J].中国中药杂志,2014,39(8):1396-1400.

[6] 张 珺,程月发,张爱兵.丹参胶囊水溶性成分的高效液相色谱指纹图谱分析[J].医药导报,2015,34(1):89-94.

[7] 时正媛,曾蔚欣,杨 丽,等.HPLC梯度洗脱法同时测定地麻滴鼻液中2种组分的含量[J].实用药物与临床,2015,18(3):313-315.

本文编辑：赵小龙

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ISSN.2095-8242.2017.24.4709.02