毛蕊异黄酮葡萄糖苷自微乳给药系统的制备及质量控制Δ

邝洁容，陈伯丛，梁晓燕

(佛山市中医院药剂科，广东 佛山 528000)



·论 著·

毛蕊异黄酮葡萄糖苷自微乳给药系统的制备及质量控制Δ

邝洁容*，陈伯丛，梁晓燕

(佛山市中医院药剂科，广东 佛山 528000)

目的：制备毛蕊异黄酮苷自微乳给药系统并建立其质量评价方法。方法：以乳化剂OP-10、聚氧乙烯醚(40)和二乙二醇单乙基醚制备毛蕊异黄酮苷自微乳给药系统，考察其外观、粒径分布、Zeta电位及稳定性；采用高效液相色谱法建立毛蕊异黄酮苷自微乳的质量评价方法。结果：所得自微乳稳定性良好，平均粒径为32.21 nm，电动电势为-19.43 mV(n=3)。毛蕊异黄酮苷的进样量在0.207～3.105 μg范围内具有良好的线性关系，平均回收率为99.90%(n=9)，RSD=0.79%。结论：该制剂制备工艺简便，质量稳定可控，符合良好的自微乳制剂的要求。

毛蕊异黄酮葡萄糖苷； 自微乳给药系统； 质量评价

毛蕊异黄酮苷是黄芪中具有代表性的黄酮类成分之一[1-3]，具有抗病毒、抗菌、调节血脂、抗氧自由基、抗缺血等作用[1，4]，能通过抑制内皮细胞氧化应激损伤、炎性反应和凋亡，保护血管内皮不受糖尿病病变影响[5]，抑制宫颈癌Hela细胞增殖[6]，具有广阔的临床应用价值。毛蕊异黄酮苷难溶于水，在体内不能稳定吸收[7]，无法正常发挥疗效，从而限制了其制剂开发。自微乳给药系统(self-microemulsifying drug delivery system，SMEDDS)是由非离子表面活性剂、助表面活性剂和油相形成的各相同性、透明、均一并包含药物的混合液，在37 ℃环境下慢慢搅拌乳化而成的微乳，粒径<100 nm[8-10]。SMEDDS能提高难溶性药物的溶解度，促进其在体内吸收，从而提高生物利用度，保证疗效。本研究将毛蕊异黄酮苷制成SMEDDS，并参考相关文献[11-13]，采用高效液相色谱法(high performance liquid chromatography，HPLC)测定毛蕊异黄酮苷-SMEDDS中毛蕊异黄酮苷的含量以评估自微乳的质量，现报告如下。

1 材料

1.1 仪器

安捷伦1260型高效液相色谱仪(美国安捷伦公司)；G1316A型二极管阵列检测器检测器(美国安捷伦公司)；SartoriusBT-125D型电子天平(德国赛多利斯公司)；ZNCL-TS型智能数显磁力搅拌电热套(巩义市予华仪器有限公司)；Nicomp-380/ZLS型激光粒度分析仪(美国PSS Nicomp公司)。

1.2 仪器与试剂

毛蕊异黄酮苷(Aladdin Chemistry Co.Ltd，批号：67526)；毛蕊异黄酮苷对照品(中国食品药物检定研究院，批号：111930-201304)；乳化剂OP-10(西安悦来医药科技术有限公司，批号：20151207)；二乙二醇单乙基醚(Transcutol P)(上海三齐医药科技有限公司，批号：20160210)；聚氧乙烯醚(40)(Cremophor RH40)(德国巴斯夫公司，批号：18520263-G0)；甲醇(默克公司)为色谱纯；超纯水等。

2 方法

2.1 微乳制备与分析

2.1.1 处方：通过实验筛选改进，结合参考文献[14]，得到处方为Cremophor RH40 50 mg、乳化剂OP-10 30 mg、Transcutol P 18 mg、毛蕊异黄酮苷2.0 mg。

2.1.2 微乳制备：按处方量称取1个处方量的辅料，搅拌均匀，得澄清透明的空白微乳，加入毛蕊异黄酮苷2 g，充分搅拌30 min，得到微黄色透明的毛蕊异黄酮苷自微乳。

2.1.3 评价：(1)外观。观察所制备的自微乳在不同温度下的性状，4 ℃时为微黄色黏稠状液体，25、37 ℃时均为微黄色透明、流动性较好的油状溶液。(2)Zeta电位。取“2.1.2”制备好的自微乳适量，在常温(25 ℃)条件下，以超纯水稀释10倍后，利用激光粒度仪分析毛蕊异黄酮苷自微乳的Zeta电位。结果显示，本研究所制备的毛蕊异黄酮苷自微乳的Zeta电位为-19.43 mV(n=3)，见图1。(3)粒径分析。取“2.1.2”制备好的毛蕊异黄酮苷自微乳10 ml，在常温(25 ℃)下，以超纯水稀释后，采用激光粒度分析仪测定。结果显示，毛蕊异黄酮苷自微乳平均粒径为32.21 nm(n=3)，粒度在20～40 nm占97.0%。(4)稳定性考察。取西林瓶装取毛蕊异黄酮苷自微乳20 ml进行影响因素考察，分别于高温(40和60 ℃)、低温(4 ℃)、光照[(4 500±500)lx]条件下各放置10 d，同时在室温(25 ℃)条件下放置1个月。结果显示，该自微乳表面无分层现象，理化性质及含量均无明显变化，表明该SMEDDS稳定性好。

图1 毛蕊异黄酮苷自微乳的Zeta电位分析结果Fig 1 Zeta potential result of Calycosin-7-glucoside-SMEDDS

2.2 质量评价

采用HPLC建立毛蕊异黄酮苷-SMEDDS的质量评价方法。

2.2.1 色谱条件：色谱柱为Agilent Extend C18色谱柱(250 mm×4.6 mm，5μm)；流动相为甲醇(A)-0.1%甲酸水溶液(B)，梯度洗脱，见表1；柱温为25 ℃；进样量为10 μl；流速为1.0 ml/min。采用以上色谱条件，毛蕊异黄酮苷色谱峰与其他成分的分离度良好，空白辅料无干扰，专属性良好，理论塔板数以毛蕊异黄酮苷计≥4 000。吸收波长的选择方面，将毛蕊异黄酮苷溶于甲醇，于200～400 nm处全波长扫描，结果在220、260、290 nm处均有吸收，结合《中华人民共和国药典》(2015年版)关于毛蕊异黄酮苷的检测波长为260 nm，因此，本研究选择260 nm为检测波长，见图2。

2.2.2 样品制备：称取毛蕊异黄酮苷对照品约5 mg，精密称定，置于25 ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得对照品溶液(质量浓度为0.207 mg/ml)。取毛蕊异黄酮苷自微乳1 ml，精密称定，置于100 ml容量瓶中，用少量甲醇稀释，并定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液。取空白自微乳(不含毛蕊异黄酮苷)1 ml，置于100 ml容量瓶中，用少量甲醇稀释，并定容至刻度，摇匀，作为空白溶液。

表1 梯度洗脱程序

图2 毛蕊异黄酮苷紫外吸收图谱Fig 2 Ultraviolet absorption spectrum of Calycosin-7-glucoside

2.2.3 结果分析：吸取“2.2.2”所制备的供试品、对照品、空白溶液各10 μl，分别按“2.2.1”项下色谱条件进行分析，结果显示，供试品色谱图中与对照品相应位有相同色谱峰，而空白溶液色谱图中相应位置上无干扰峰，见图3。

A. 空白溶液；B.对照品溶液；C.供试品溶液A.blank solution；B.reference solution；C.test solution图3 HPLC图Fig 3 HPLC chromatogram

2.2.4 线性关系考察：精密吸取上述对照品溶液1.0、2.0、3.0、5.0、10.0、15.0 μl，分别按“2.2.1”项下色谱条件进样测定，分别记录各峰面积。以进样量(μg)为横坐标X，峰面积为纵坐标Y，画回归曲线，回归方程为：Y=7 356.4X-3 522.7(R2=0.999 9)。结果显示，毛蕊异黄酮苷的进样量在0.207～3.105 μg范围内具有良好的线性关系。

2.2.5 精密度试验：精密吸取上述毛蕊异黄酮苷对照品溶液，采用“2.2.1”项下色谱条件进行检测分析，重复进样6次，记录每次的色谱峰面积。计算RSD值为0.62%，结果表明该仪器的精密度良好，见表2。

表2 精密度试验结果(n=6)

2.2.6 重复性试验：取同一批次(批号：20160613)供试品，采用“2.2.2”项下方法进行制备，同法平衡制备6份供试品溶液，以“2.2.1”项下色谱条件进行检测，记录毛蕊异黄酮苷的色谱峰面积。结果显示，6份样品的RSD值为1.00%，表明其重复性良好，见表3。

2.2.7 稳定性试验：精密量取供试品溶液500 μl，采用“2.2.2”项下制备方法操作，以“2.2.1”项下色谱条件进行检测分析，分别于0、4、8、16、24、48 h时进样，记录峰面积。结果显示，6份样品的RSD=1.12%，表明该SMEDDS溶液在48 h 内稳定性良好，见表4。

表3 重复性试验结果(n=6)

表4 稳定性试验结果(n=6)

2.2.8 加样回收率试验：精密量取含毛蕊异黄酮苷0.207 mg/ml的对照品溶液50、100、150 μl各3份，置于带盖磨口锥形瓶中，挥干甲醇。精密量取供试品溶液500 μl，加入上述锥形瓶中，按“2.2.2”项下方法制备得供试品溶液，以“2.2.1”色谱条件下进行检测分析，记录毛蕊异黄酮苷的色谱峰面积，计算加样回收率。结果显示，9份供试品溶液的平均加样回收率为99.90%(n=9)，RSD=0.79%，见表5。

表5 加样回收率试验结果(n=9)Tab 5 Recovery test results(n=9)

2.2.9 样品含量测定：取处方辅料制备3批毛蕊异黄酮苷-SMEDDS，分别取样品适量，采用“2.2.2”项下方法进行制备，按“2.2.1”色谱条件下测定，记录毛蕊异黄酮苷的峰面积，采用外标一点法计算含量。结果显示，3批样品的平均标示量为100.23%。

3 讨论

油相和表面活性剂的选择对制备毛蕊异黄酮苷自微乳的影响至关重要。本研究选用的油相可以很好地溶解药物；选用的表面活性剂毒性低，具有较强的乳化能力，其亲水疏水平衡值>10，在搅拌中与油相制成微乳，微乳粒径为32.21 nm，Zeta电位为-19.43 mV(n=3)。从Zeta电位值分析，该自微乳体系似乎不稳定，但经过研究发现，该自微乳系统非常稳定，说明自微乳的Zeta电位不能作为稳定性的评定指标，与稳定性无直接关系，而是由自微乳本身的药物及辅料的性质即所产生的表面张力变化所决定。

毛蕊异黄酮苷水溶性较差、口服吸收困难，导致其生物利用度低；同时，其在肝脏或胃肠道被代谢和分解，难以达到治疗效果。自微乳属于纳米乳剂，粒径小，服用后，通过胃肠道蠕动可自发形成乳滴(O/W型)，增加药物接触范围，促进吸收，保证疗效。自微乳对胃肠道淋巴组织具有良好的亲和力，能使药物避开肝脏、肠道的生物转化，直接通过淋巴组织进入血液系统，从而更好地促进药物吸收，提高疗效[15]。本研究将毛蕊异黄酮苷制成稳定的自微乳，可显著提高药物在体内的生物利用度，从而保证疗效。同时，采用HPLC建立了毛蕊异黄酮苷-SMEDDS的质量评价方法，方法简便、可控。

自微乳的制备工艺简单，可填充到胶囊中；也可以通过各种制剂技术制备固体自微乳，可同时具有稳定性好、易于保存、可过滤灭菌、生物利用度高等优势。因此，SMEDDS具有广阔的开发及市场前景，本研究具有重要意义。

综上所述，SMEDDS是一种新的给药系统，具有稳定性好、制备简单、适合大生产等优点，可较好地提高口服制剂的生物利用度、保证疗效，具有广阔的应用前景和研究价值。

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Study on Self-Microemulsifying Drug Delivery System of Calycosin-7-glucoside and Quality EvaluationΔ

KUANG Jierong, CHEN Bocong, LIANG Xiaoyan

(Dept.of Pharmacy, Foshan Hospital of Traditional Chinese Medicine, Guangdong Foshan 528000, China)

OBJECTIVE: To establish the self-Microemulsifying drug delivery system of calycosin-7-glucoside and quality evaluation method. METHODS: The Calycosin-7-glucoside-SMEDDS was prepared with OP-10 emulsifier, Cremophor RH40 and Transcutol P, and the appearance, size distribution, Zeta potential and stability were examined. The contents of Calycosin-7-glucosidecwas determined by HPLC. RESULTS: The Calycosin-7-glucoside-SMEDDSwas stable, the average particle size and Zeta potential were 32.21 nm and -19.43 mV(n=3), respectively.The linear ranges of Stanozolol was 0.207 μg-3.105 μg. The average recovery of Trenbolone Acetate was 99.90%(n=9),RSD=0.79%. CONCLUSIONS: The preparation technique of the microemulsion is simple and feasible, and the quality is stable and controllable, which meets the needs of good SMEDDS formulation.

Calycosin-7-glucoside; Self microemulsifying drug delivery system; Quality evaluation

澳门科学技术发展基金(No.049/2012/A2)

R943

A

1672-2124(2017)07-0885-04

2017-02-08)

*主管中药师。研究方向：中药新药研究与开发。E-mail：kkjjrr2007@126.com

DOI 10.14009/j.issn.1672-2124.2017.07.007