老年胃癌组织中表皮生长因子受体、人类表皮生长因子受体2及基质金属蛋白酶7的表达及其相关性

余晓完 高 戈 黄东红 蔡俊峰 袁 衡 吴 翔

(福建医科大学附属第二医院检验科，福建 泉州 362000)



老年胃癌组织中表皮生长因子受体、人类表皮生长因子受体2及基质金属蛋白酶7的表达及其相关性

余晓完 高 戈1黄东红 蔡俊峰 袁 衡2吴 翔3

(福建医科大学附属第二医院检验科，福建 泉州 362000)

目的 探讨老年胃癌组织中表皮生长因子受体(EGFR)、人类表皮生长因子受体(HER)2及基质金属蛋白酶(MMP)7的表达及相关性。方法 选择行手术治疗的100例胃癌患者的胃癌组织蜡块标本，从100例胃癌组织蜡块标本上随机抽取50例，提取其癌旁组织作为癌旁对照组。比较EGFR、HER2、MMP7在胃癌组和癌旁组织的关系，并记录其和常见临床病理参数之间的关系。结果 在胃癌组织中EGFR、HER2、MMP7的阳性表达率明显比癌旁组织高(P<0.05)；EGFR、HER2、MMP7在胃癌组织中的表达和淋巴结转移、不同浸润程度、不同分化程度之间具有显著差异(P<0.05)；在胃癌组织中，EGFR、HER2、MMP7的表达均呈现正相关(P<0.05)。结论 EGFR、HER2、MMP7和老年胃癌中许多临床病理特征之间存在着密切的关系，且三者呈协同作用，可作为对病情的诊断、治疗、预后提供参考依据。

表皮生长因子受体；人表皮生长因子受体-2；基质金属蛋白酶7；胃癌

胃癌具有临床症状晚、进展速度快、生存率低的特点。研究指出，该病在65岁后的人群中发病呈明显升高的趋势。胃癌在发生和发展过程中属一个多阶段、多因素的过程，其中涉及多种分子、多个基因的水平变化，而表皮生长因子受体(EGFR)、人类表皮生长因子受体(HER)2作为胃癌靶向治疗的靶点和化疗耐药的相关基因，在临床上较为常见〔1〕。但仍有研究提出疑问，在肿瘤的分化程度、浸润程度、是否转移和胃癌患者的预后是否存在着相关性，而在肿瘤和浸润和转移中是否会存在细胞外基质蛋白的破坏〔2〕。近年研究发现，基质金属蛋白酶(MMPs)在降解细胞外基质蛋白中是最主要的蛋白水解酶〔3〕。本研究旨在探讨老年胃癌组织中EGFR、HER2、MMP7的表达及其相关性。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集2014年3月至2016年3月福建医科大学附属第二医院行手术治疗的100例老年胃癌患者的胃癌组织蜡块标本。其中，男69例，女31例，年龄52～81〔平均(67.43±1.39)〕岁，从100例胃癌组织蜡块标本上随机抽取50例，提取其癌旁组织(距癌旁组织5 cm以上)作为癌旁对照组。对照组男30例，女20例，年龄51～79〔平均(67.31±1.45)〕岁。患者在手术前均未进行化、放疗治疗。

1.2 方法 试剂：鼠抗人MMP7单克隆抗体，克隆号LW29；鼠抗人EGFR单克隆抗体，克隆号31G7；鼠抗人HER2单克隆抗体，克隆号B68；所使用的试剂盒以及二氨基联苯胺(DAB)显色试剂盒均购于北京中杉生物技术有限公司。

所有标本先进行苏木素-伊红(HE)染色病理形态学观察，之后进行病例回顾。标本在手术切除0.5 h后进行采集，使用10%甲醛固定，常规石蜡包埋，4 μm连续切片，进行免疫组织化学染色，操作方式严格按照试剂盒说明书进行，使用磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗作为阴性对照，已知切片为阳性对照。EFGR阳性表达判定：EFGR蛋白主要定位在细胞膜或细胞质中，颜色呈棕褐色，随机选择5个高倍视野(×400)计数，-表示阳性细胞<10%，+表示10%～20%，表示21%～40%，表示>40%，结果为和时则判定为阳性表达。HER2阳性表达判定：HER2主要定位在细胞膜，颜色呈棕褐色，-表示细胞膜未着色或阳性细胞数<10%，+表示细胞膜不完整且阳性细胞数≥10%，表示细胞膜完整轻至中度且阳性细胞数≥10%，表示细胞膜完整强染色且阳性细胞数≥10%，结果为和时则判定为阳性表达。MMP7阳性表达判定：MMP7定位在细胞质或细胞核中，颜色呈淡黄色至棕褐色颗粒，依照细胞染色强度以及阳性细胞面积判断，细胞染色强度根据无着色0分、淡黄色1分、棕黄色2分、棕褐色3分，阳性细胞面积根据0%计0分、1%～25%计1分、26%～50%计2分、51%～75%计3分、76%～100%计4分，统计两项结果。0分表示阴性-，≤3分表示阳性(+)，3～6分表示中度阳性()，≥6分表示强阳性()。

1.3 统计学方法 应用SPSS18.0软件进行t检验、χ2检验、Spearman等级相关分析。

2 结 果

2.1 胃癌组织与癌旁组织中EGFR、HER2、MMP7表达比较 在胃癌组织中EGFR、HER2、MMP7的阳性表达率〔49例(49.00%)、54例(54.00%)、73例(73.00%)〕明显比癌旁组织〔1例(2.00%)〕、1例(2.00%)、2例(4.00%)高(χ2=33.135,38.813,76.842；均P=0.000)。

2.2 胃癌组织中EGFR、HER2、MMP7和临床病理参数的关系 EGFR、HER2、MMP7和性别、年龄之间无统计学意义(P>0.05)，在胃癌组织中的表达和淋巴结转移、不同浸润程度、不同分化程度之间具有显著差异(P<0.05)。见表1。

2.3 EGFR、HER2、MMP7相关性分析 在胃癌组织中，EGFR、HER2、MMP7的表达均呈现正相关(rEGFR-MMP7=0.504,rHER2-MMP7=0.658,rHER2-EGFR=0.673,均P<0.01)。

表1 胃癌组织中EGFR、HER2、MMP7和临床病理参数的关系〔n(%)〕

3 讨 论

老年胃癌中，多以男性为主，其和男性长期吸烟、饮酒有关，且老年人脏器功能多呈衰退状态，合并疾病较多，在治疗上较为复杂，早期胃癌的生存率较高，可达90%，但是进展期胃癌在5年内的生存率却仅有30%，甚至更低〔4〕。

EGFR是原癌基因C-erbB-1的表达产物，在肿瘤细胞的黏附、增殖、侵袭、转移、肿瘤细胞凋亡之间均发挥着作用，而HER2和EGFR之间存在着大约50%的同源性，均可接受EGFR样物质的信息，促进细胞增殖，且具有酪氨酸激酶活性。有较多临床报道显示，在多种恶性肿瘤中，均发生着EGFR、HER2基因的异常扩增，并且和不良预后之间关系密切〔5〕。Lu等〔6〕研究显示，和邻近的正常胃黏膜组织相比，在胃癌组织中EGFR的表达有所增加，而其主要多见在浸润程度深、淋巴结转移阳性、未分化癌以及进展期癌。Kanayama等〔7〕研究称，HER2在胃癌组织中过度表达，提示患者的肿瘤恶性程度更高、侵袭、浸润、复转移的能力更强，并和肿瘤位置、淋巴结转移、肿瘤分化之间存在相关性。而组织分化、浸润深度、淋巴结转移在胃癌侵袭转移因素，可作为反映胃癌进展、患者预后中的相关指标〔8〕。而在本次研究中也支持这一论证。

肿瘤的发生和发展是一个十分复杂的过程，其最重要的生物学特征为转移和浸润，但其过程中的机制在临床上尚未得到明确的阐明，MMP主要是通过在细胞外基质和基底膜中产生降解，从而在肿瘤的浸润、转移中产生着重要的作用〔9〕。有研究指出，在肿瘤细胞中，首先需有降解细胞外基质、基底膜的功能，然后通过已经存在或者重新形成的结合位点，和细胞外基质相互结合，从而对细胞外基质进行溶解，随后向外扩散，在邻近组织和远处器官发生侵袭和转移〔10〕。MMP7基因主要在11q21-q22存在，cDNA全场为1 094 bp，该物质主要是通过癌细胞以无活性的形式进行分泌〔11〕。无活性的MMP7在癌组织中，可被MMP3以及胰蛋白酶在内的多种蛋白酶进行有效激活，激活之后的MMP7具有较为广泛的蛋白水解活性，MMP7的作用底物主要包括糖蛋白和蛋白多糖。本研究结果中显示，在胃癌组织中，MMP7的阳性表达高达73.00%，显示出其与胃癌存在着明显的关系，而在经过和常见临床病理参数的进一步分析结果中显示出，MMP7与胃癌患者的性别、年龄之间无明显的相关性，而和淋巴结转移、不同浸润程度、不同分化程度之间存在关系，有淋巴结转移、浸润程度侵及浆膜层、浆膜外以及低、未分化的胃癌组织，其阳性表达率更高。通过分析可能是由于在肿瘤组织中所形成的特殊微环境，促使利于肿瘤进展的细胞印祖、酶类发生过表达或者减少表达，例如MMPs家族、FGF、VEGF等，更利于肿瘤生成。Ye等〔12〕研究显示，MMP7和胃癌的分化程度、临床分期之间存在着密切的关系，在基因水平的角度证实MMP7在胃癌组织中的侵袭和转移中有所参与。

在癌细胞的增殖过程中，存在不同生长因子的信号通路参与，对单独一个信号转导通路的观察在分析肿瘤情况上可能只会得到片面的结论，而联合分析具有积极的临床意义。本研究结果表明EGFR、HER2、MMP7在胃癌的发生、发展过程中存在着相互协同的作用。通过分析可能是由于EGFR和HER2分子同是生长因子家族，两者之间的蛋白结构、功能相似，而EGFR、HER2和MMP7之间的关系临床上仍需要作进一步的研究。

1 吴楠蝶，魏 嘉，刘宝瑞.胃癌分子靶向治疗的研究进展〔J〕.医学研究生学报，2014；27(12)：1318-22.

2 刘 坤，王海江，孙振强，等.胃癌组织HER-2和VEGF及EGFR表达临床意义研究〔J〕.中华肿瘤防治杂志，2015；22(10)：781-5.

3 黄国强，吴新民，郭亚民.MMP-7与胃癌相关性的研究进展〔J〕.当代医学，2013；19(22)：12.

4 孙雪峰.老年胃癌的手术治疗方法及对术后并发症的影响〔J〕.中国老年学杂志，2015；35(14)：3937-8.

5 左立莹.胃癌组织中HER2和EGFR基因扩增及其临床意义〔J〕.医疗装备，2016；29(4)：204.

6 Lu W，Li M，Wang H，etal.An epidermal growth factor receptor exon 19 mutation in a mucin-producing gastric cancer sample from a Chinese patient〔J〕.Jpn J Clin Oncol，2016；46(6)：502-6.

7 Kanayama K，Imai H，Yoneda M，etal.Significant intratumoral heterogeneity of human epidermal growth factor receptor 2 status in gastric cancer：a comparative study of immunohistochemistry，FISH，and dual-color in situ hybridization〔J〕.Cancer Sci，2016；107(4)：536-42.

8 刘 涛，李燕京，韩 宇.HER2在胃癌中的研究进展〔J〕.现代肿瘤医学，2015；23(15)：2216-9.

9 张晓东，张阳德.血清MMP-7、MMP-9在胃癌中的表达及临床意义〔J〕.中国现代医学杂志，2013；23(24)：41-5.

10 王一波，汤黎明.MMP-2、MMP-7和MMP-14在胃癌患者组织中表达的临床意义〔J〕.实用临床医药杂志，2015；19(15)：44-8.

11 Wu D.Isocitrate dehydrogenase 2 inhibits gastric cancer cell invasion via matrix metalloproteinase 7〔J〕.Tumour Biol，2016；37(4)：5225-30.

12 Ye Y，Zhou X，Li X，etal.Inhibition of epidermal growth factor receptor signaling prohibits metastasis of gastric cancer via downregulation of MMP7 and MMP13〔J〕.Tumour Biol，2014；35(11)：10891-6.

〔2017-03-15修回〕

(编辑 袁左鸣)

湖南省自然科学基金(No.2015JJ4073)

高 戈(1978-)，男，博士，副教授，主要从事临床免疫学诊断研究。

余晓完(1984-)，女，硕士，主管检验师，主要从事分子生物学研究。

R73

A

1005-9202(2017)14-3492-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.14.050

1 中南大学湘雅医学院检验系

2 长沙医学院组织学与胚胎学教研室 3 海南省中医院检验科