肝细胞癌CD15s和PTEN的表达及其意义

李永庆，王志湖，尚培中，裴树俊，赵一洁，李庆春，马跃燕，谷化平

(1.中国人民解放军第251医院普通外科，河北 张家口 075000； 2.河北省涿鹿县人民医院外科，河北 涿鹿075600;3.河北北方学院图书馆，河北 张家口 075000)



肝细胞癌CD15s和PTEN的表达及其意义

李永庆1，王志湖2，尚培中1，裴树俊1，赵一洁3，李庆春1，马跃燕1，谷化平1

(1.中国人民解放军第251医院普通外科，河北 张家口 075000； 2.河北省涿鹿县人民医院外科，河北 涿鹿075600;3.河北北方学院图书馆，河北 张家口 075000)

目的 探讨肝细胞癌CD15s和PTEN的表达及其意义。方法 应用免疫组化染色EliVisionTM plus两步法检测140例肝细胞癌组织中CD15s和PTEN的表达，分析其与肝细胞癌转移率、分化程度及患者5年生存率的关系。结果 CD15s和PTEN在肝细胞癌中阳性表达率分别为39.3%和33.6%。PTEN阳性表达的肝细胞癌转移率低(P<0.05)，分化程度及患者5年生存率高(P<0.05)；CD15s阳性表达的肝细胞癌转移率高(P<0.05)，分化程度及患者5年生存率低(P<0.05)。CD15s的表达与PTEN的表达呈负相关(r=-0.41)。结论 CD15s和PTEN的表达与肝细胞癌分化程度、浸润转移和患者生存期密切相关，联合检测CD15s和PTEN的表达可作为评估肝细胞癌预后的参考指标。

肝细胞性肝癌；CD15s；PTEN；肿瘤转移

肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)发病隐匿，恶性度高，侵袭力强，细胞与细胞或细胞与基质之间黏附特性的异常在浸润和转移过程中发挥了重要作用[1-2]。我们采用免疫组化染色EliVisionTMplus两步法检测140例HCC组织中CD15s(sialyl Lewis X，唾液酸化Lewis X)和PTEN(phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten，张力蛋白同源基因蛋白)的表达，探讨其表达与HCC浸润、转移和患者预后的关系及其之间相关性。

1 资料与方法

1.1 一般资料

2000-11—2011-02月于中国人民解放军第251医院手术切除的原发性HCC标本140例，所有患者术前均未接受过放疗、化疗、免疫或生物治疗；按照Edmondson分级标准Ⅰ～Ⅱ级为高分化癌56例，Ⅲ～Ⅳ级为低分化癌84例；伴有淋巴结、肝内、肝外转移者63例，无转移者77例。其中男90例，女50例；年龄27～73岁，平均(48.6±8.8)岁；肉眼形态：巨块型63例，结节型54例，弥漫型23例；肿瘤≤5 cm 48例，>5cm 92例。140例HCC患者中随访满5年者84例，其中死亡62例，存活22例。选取距癌灶2 cm的癌旁肝组织30例和尸检正常肝组织10例作为对照。研究方案通过医院伦理委员会批准，所有患者及家属均签署知情同意书。

1.2 免疫组化染色方法

鼠抗CD15s单克隆抗体和兔抗PTEN多克隆抗体、EliVision试剂盒和二氨基联苯胺显色剂购自福州迈新生物技术开发有限公司。

标本行常规HE染色，取相邻切片行免疫组化染色，10%中性甲醛固定，石蜡包埋，常规制备4 μm厚连续切片，65 ℃烘烤备用。采用EliVisionTMplus两步法，主要操作步骤：①石蜡切片脱蜡至水，微波5档(输出功率90 W，下同)，磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗1 min×3；②微波-枸橼酸钠缓冲液(0.01 mol·L-1,pH=6.0)修复抗原，微波3档(输出功率150 W)2 min，微波5档5 min×2，自然冷却至近室温时自来水冲洗，PBS冲洗1 min×3；③微波5档，甲醇-双氧水中封闭内源性过氧化物酶2 min，PBS冲洗1 min×3；④加一抗，4 ℃冰箱过夜，从冰箱取出后，微波5档5 min，PBS冲洗2 min×3；⑤加聚合物增强剂，室温下孵育20 min，PBS洗2 min×3；⑥加生物素化鼠抗人IgG(1∶300)，37 ℃、30 min，微波5档5 min，PBS冲洗2 min×3；⑦3,3′-二氨基联苯胺(diaminobenzidine,DAB-H2O2)显色10 min，自来水终止显色；⑧苏木素复染0.5～1.0 min；⑨常规酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。

福州迈新生物技术开发有限公司提供的已知CD15s和PTEN阳性染色切片为阳性对照，磷酸盐缓冲液代替一抗为阴性对照。

1.3 判定标准

由2位有经验的病理医师在光学显微镜下进行双盲观察。阳性颗粒呈棕黄色或棕褐色，按染色深浅强度评分：无染色0分，棕黄色1分，棕褐色2分。按染色癌细胞所占比例评分：≤30% 1分，31%～70% 2分，≥71% 3分。每例按2项评分之和定性：0分为阴性(-)，1～3分为弱阳性(+)，4～6分为强阳性(++)。弱阳性和强阳性均计为阳性。

1.4 统计学方法

应用SPSS 17.0统计软件处理数据，计数资料行χ2检验，检验水准α=0.05，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 HCC组织、癌旁肝组织和正常肝组织中CD15s和PTEN的表达

HCC组织中CD15s和PTEN阳性染色主要见于细胞质，阳性率分别为39.3%(55/140)和33.6%(47/140)；30例癌旁肝组织中CD15s弱阳性表达3例(阳性率10%)，PTEN均呈不同程度的阳性表达(阳性率100%)；10例正常肝组织中CD15s均阴性(阳性率0%)，PTEN均呈不同程度的阳性表达(阳性率100%)。HCC中CD15s阳性率显著高于癌旁肝组织和正常肝组织(χ2=9.427，χ2=6.203，P<0.05)，HCC中PTEN阳性率显著低于癌旁肝组织和正常肝组织(χ2=43.998，χ2=17.481，P<0.05)。

2.2 HCC临床病理特征与CD15s和PTEN表达的关系

不同性别、年龄、肿瘤肉眼形态及大小间CD15s和PTEN的表达差异无统计学意义(P>0.05)，不同分化程度及有无转移之间的表达差异有统计学意义(表1)。

2.3 HCC预后与CD15s和PTEN表达的关系

随访满5年患者中，CD15s阳性者死亡率高，生存率低；PTEN阳性者死亡率低，生存率高(表1)。

表1 HCC临床病理特征与CD15s和PTEN表达的关系(n)

注：与高分化组比较*P<0.05；与无转移组比较△P<0.05；与生存组比较#P<0.05。

2.4 CD15s和PTEN表达的关系

CD15s阳性表达的55例中，PTEN阳性表达4例(7.3%)；CD15s阴性表达的85例中，PTEN阳性表达43例(50.6%)。CD15s与PTEN表达呈负相关(P<0.05，r=-0.41)。

3 讨 论

恶性肿瘤发生发展的各个时期至少有两种或两种以上功能不同、异常激活的基因发挥不同作用，协同促进细胞癌变。局部浸润和远处转移是影响HCC患者生存的重要因素，与多种基因及其蛋白产物的表达异常相关。近年发现不少与HCC发生发展、浸润转移相关的肿瘤标志物，如甲胎蛋白(AFP)等，其应用价值在临床诊疗中不断获得肯定。

CD15s属于Lewis血型决定簇Ⅱ型抗原，是一种含有四糖碳水化合物的糖蛋白，其合成由岩藻糖转移酶介导，通过调节性T细胞等参与机体免疫反应[3]，Lewis血型决定簇抗原与配体分子选择素(selectin)与白细胞透出血管和肿瘤细胞转移时逸出血管密切相关。研究表明，CD15s与选择素结合，通过Lewis-selectin转移途径，参与介导癌细胞与血管内皮细胞的黏附作用，是癌细胞浸润及转移过程中的重要途径之一[4-5]。CD15s在良、恶性肝细胞中的表达分布存在明显差异，在HCC组织中，CD15s高表达者具有较高转移潜能[6]。肝内卫星灶、门静脉癌栓及肝外转移的患者CD15s阳性表达率较高，CD15s与选择素同时阳性者，常首先发生肝内复发转移[7-8]。

PTEN是一种抑癌基因蛋白，与细胞骨架蛋白和张力蛋白高度同源，具有多种重要功能，可通过三磷酸磷脂酰肌醇途径、蛋白激酶途径、黏着斑激酶途径3种方式参与细胞的信号传导，是细胞生长主要调控通路的关键因素之一，影响细胞分化、骨架重组及迁移能力[9]。PTEN的突变和失活存在于多种肿瘤中，在癌细胞中的功能缺失可促进肿瘤发展，其多态性与HCC易感性有关[10-11]。有研究表明PTEN可能在HCC发生发展过程中调控hTERT的活化，其阳性表达率随HCC组织分化降低及侵袭力增强而明显下降，提示PTEN突变或杂合性缺失可能与癌组织浸润和癌细胞转移密切相关[12-13]。

本研究表明，HCC组织中CD15s阳性表达率显著高于癌旁肝组织和正常肝组织，PTEN阳性表达率显著低于癌旁肝组织和正常肝组织，CD15s和PTEN的表达与HCC分化程度、浸润转移及患者生存期密切相关；HCC组织中两者表达呈显著负相关，提示在HCC恶性发展过程中可能具有协同调节作用。联合检测CD15s和PTEN有助于了解其临床病理进程，提高对其生物学特性，尤其是浸润能力和转移潜能的判断水平。深入研究其在HCC中的作用机制，对评估患者预后、探索靶向治疗新途径具有一定指导意义[14-15]。

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[责任编辑：李蓟龙 英文编辑：刘彦哲]

Expression and Significance of CD15s and PTEN in Hepatocellular Carcinoma

LI Yong-qing1,WANG Zhi-hu2,SHANG Pei-zhong1,PEI Shu-jun1, ZHAO Yi-jie3,LI Qing-chun1,MA Yue-yan1,GU Hua-ping1

(1.Department of General Surgery,251st Hospital of PLA,Zhangjiakou,Hebei 075000,China; 2.Department of Surgery,People's Hospital of Zhuolu County,Zhuolu,Hebei 075400,China; 3.Library of Hebei North University,Zhangjiakou,Hebei 075000,China)

Objective To investigate the expression and significance of CD15s and PTEN in hepatocellular carcinoma(HCC).Methods EliVisionTMplus two-step immunohistochemical method was used to detect the expression of CD15s and PTEN in 140 cases of HCC.The relationship between the expression and hepatocell metastatic rate,differentiation degree and 5-year survival rate was analyzed.These expressions were analyzed in combination with the follow-up information.Results Positive expression rates of CD15s and PTEN in HCC were 39.3% and 33.6%,respectively.HCC with positive expression of CD15s had a higher metastatic rate(P<0.05)and a lower 5-year survival rate(P<0.05)；HCC with positive PTEN expression had a lower metastatic rate(P<0.05)and a higher 5-year survival rate(P<0.05).The expression of CD15s was negatively correlated with PTEN expression in HCC(r=-0.41).Conclusion These results showed that the expression of CD15s and PTEN were closely correlated with differentiation degree,invasion metastasis and patient survival peried in HCC.Expression of CD15s and PTEN may be clinically used as indicators for assessing HCC prognosis.

hepatocellular carcinoma;CD15s;PTEN;neoplasm metastasis

李永庆(1963-)，男，内蒙古锡林浩特人，副主任医师，研究方向：普通外科。

尚培中(1964-)，男，河南商丘人，医学硕士，主任医师，研究方向：普通外科。

R 735.7

A

10.3969/j.issn.1673-1492.2017.08.002

来稿日期：2017-06-26