阿萨伊对虚热和虚寒证大鼠的脂肪代谢、免疫物质和内分泌激素的影响

王子晨+张建军+朱映黎+瞿研+费文婷+王莎+王景霞+王林元

[摘要] 研究阿萨伊对虚热证、虚寒证大鼠的脂肪代谢、免疫物质及内分泌激素水平变化。SD大鼠分为空白组、虚热模型组、虚热模型加黄柏组、虚热模型加阿萨伊高、低剂量组、虚寒模型组、虚寒模型加肉桂组、虚寒模型加阿萨伊高、低剂量组；采用每日肌肉注射地塞米松磷酸钠、氢化可的松琥珀酸钠1次、连续21 d的方法制备大鼠虚热模型、虚寒模型；通过比色法检测脂肪代谢（FFA，LPL，HL）指标变化以及免疫（IgG，IgM，C3，C4）指标变化；通过放免法检测内分泌激素（CORT，E2，T）指标变化。阿萨伊高剂量组能降低虚热证大鼠血清中FFA，LPL，HL值（P<0.01或P<0.001）；阿萨伊高剂量组能显著升高虚热证大鼠血清中IgG，IgM，C3值（P<0.05或P<0.001）；阿萨伊高剂量组能显著升高虚热证大鼠血清中CORT值（P<0.05），能显著降低E2，E2/T值（P<0.05）；阿萨伊高剂量组对虚寒模型脂肪代谢指标作用不明显，但可以升高免疫指标IgG，IgM，C3值（P<0.05或P<0.001），同时对内分泌激素指标CORT值也有升高的作用（P<0.05）。阿萨伊的作用趋向与黄柏一致，表现出对虚热模型大鼠的调整作用；与肉桂相反，对虚寒模型大鼠的指标纠正不明显。本实验从同类比较、异类反证角度验证了理论推导的阿萨伊中药寒凉药性。

[关键词] 阿萨伊；虚热证；虚寒证；脂肪代谢；免疫物质；内分泌激素；中药药性

[Abstract] To study the effects of Aaí （Euterpe oleracea） on lipid metabolism， immune substances and endocrine hormone level in rats with deficiency-heat and deficiency-cold syndrome. SD rats were divided into blank control group， deficiency-heat model group， deficiency-heat & Phellodendri Cortex group， deficiency-heat & Aaí high dose and low dose groups， deficiency-cold model group， deficiency-cold & Cinnamomi Cortex group， deficiency-cold & Aaí high dose and low dose groups. The rats received intramuscular injection of dexamethasone sodium phosphate （0.35 mg） or hydrocortisone sodium succinate （20 mg） for 21 days to set up deficiency-heat models and deficiency-cold models. Then the changes in fatmetabolism levels （FFA， LPL， HL） and immune indexes （IgG， IgM， C3 and C4） were detected by colorimeter；and the levels of endocrine hormone indexes （CORT， E2 and T） were detected by radioimmunoassay. The levels of FFA， LPL and HL in serum were reduced （P<0.01 or P<0.001）；levels of IgG， IgM and C3 in serum were increased （P<0.05 or P<0.001）；level of CORT in serum was increased （P<0.05） and the level of E2， E2/T in serum were reduced in the Aaí high dose group （P<0.05）. The effect of high dose Aaí on fat metabolism was not obvious in deficiency-cold models， but the levels of IgG， IgM， C3 and CORT in serum were increased （P<0.05 or P<0.001）. Aaí was showed the same effect trend with Phellodendri Cortex in adjusting the levels of deficiency-heat rats；but unlike Cinnamomi Cortex， Aaí was showed no obvious effect in adjusting the levels of deficiency-cold rats. In this experiment， homogeneous comparison and heterogeneous disproof were used to verify the cold nature of Aaí.

[Key words] Aaí；deficiency-heat；deficiency-cold；lipid metabolism；immune substances；endocrine hormone；Chinese herbal properties

阿薩伊（英文名：Aaí）在我国被称为巴西莓，一种产自南美的棕榈树Euterpe oleraceae Mart.的新鲜果实[1]，在巴西、秘鲁、哥伦比亚、苏里南等地广泛使用[2]，2013年由卫生部引入我国[3]。在古代，中医药是古丝绸之路商贸活动的重要内容。两晋南北朝时期，中医药传入朝鲜、日本、韩国，并逐步影响到东南亚诸国。隋唐五代、宋元时期，鉴真东渡日本，玄奘西行取经，加强了中医药与周边国家的交流。随后，乳香、没药、血竭等阿拉伯地区传统药物也随丝绸之路交流传入中国，丰富了本草学品种。如今在中医药现代化背景下，作为外来植物药的阿萨伊能否引入中药与我国现有中药进行配伍使用发挥医疗保健作用，尚需要进行理论及实验多方面的科学研究。

万物以阴阳为纲，药物以寒热分之，在中药药性中寒热药性起着举足轻重的地位，同时也是当今药性研究的主要方向[4]。《素问》云：“所谓寒热温凉，反从其病也。”根据巴西、秘鲁等南美地区传统医学记载，阿萨伊可用于治疗痢疾，皮肤溃疡，发烧以及糖尿病，脱发，出血，肝炎、黄疸等肝脏疾病，肾脏疾病，疟疾，月经不调，经期疼痛和肌肉酸痛等。现代药理、临床研究表明阿萨伊具有抗氧化、抗癌、抗炎、降脂、降糖、保肝等多方面的作用。以中医药理论为指导，作者提出了阿萨伊性凉的科学假说[5]，进而又通过药理学实验的方法通过考察cAMP，cGMP，T3，T4，rT3，TP，UA，TC，TG，ALB等指标变化，对阿萨伊的寒凉药性进行了验证[6]。而本实验则进一步以同类比较、异类反证角度通过考察阿萨伊对虚热证、虚寒证大鼠代谢、免疫以及内分泌激素的影响，对阿萨伊的寒凉药性进行药理学实验验证。

1 材料

1.1 药品 阿薩伊冻干粉[蒙纳维（上海）贸易有限公司，批号20151102]；地塞米松磷酸钠（天津金耀集团湖北天药药业股份有限公司，批号H42020020）；氢化可的松琥珀酸钠（天津生物化学制药有限公司，批号H21020493）；黄柏配方颗粒（北京康仁堂药业有限公司，批号15015431）；肉桂配方颗粒（北京康仁堂药业有限公司，批号15025691）。

1.2 动物 SD大鼠90只，雄性，体重（240±10） g。由斯贝福动物实验中心提供，合格证号SCXK（京）2016-0002。

1.3 试剂 游离脂肪酸（FFA）试剂盒（中生北控生物科技股份有限公司，批号20160301）；脂蛋白酯酶（LPL）试剂盒（中生北控生物科技股份有限公司，批号20160301）；肝脂肪酶（HL）试剂盒（中生北控生物科技股份有限公司，批号20160306）；免疫球蛋白G（IgG）试剂盒（中生北控生物科技股份有限公司，批号20160206）；免疫球蛋白M（IgM）试剂盒（中生北控生物科技股份有限公司，批号20160206）；补体C3（C3）试剂盒（中生北控生物科技股份有限公司，批号20160208）；补体C4（C4）试剂盒（中生北控生物科技股份有限公司，批号20160208）；皮质酮（CORT）放免试剂盒（北京华英生物技术研究所，批号20160306）；雌二醇（E2）放免试剂盒（北京华英生物技术研究所，批号20160228）；睾酮（T）放免试剂盒（北京华英生物技术研究所，批号20160228）。

1.4 仪器 XH-6020全自动放免计数仪（西安核仪器厂）；STAT FAX 2100全自动酶标仪（Awareness Technology Inc.，USA）；日本日立7160全自动生化仪；TGL-16A台式高速冷冻离心机；JY203电子天平。

2 方法

2.1 分组、造模及给药 SD大鼠适应性喂养1周后，随机分成9组，每组10只，即空白组、虚热模型组、虚热模型加黄柏配方颗粒组（5 g·kg^-1相当于60 kg人每日生药量37.5 g）、虚热模型加阿萨伊冻干粉高剂量组（3.2 g·kg^-1相当于60 kg人每日生药量24 g）、虚热模型加阿萨伊冻干粉低剂量组（1.6 g·kg^-1相当于60 kg人每日生药量12 g）、虚寒模型组、虚寒模型加肉桂配方颗粒组（30 g·kg^-1相当于60 kg人每日生药量225 g）、虚寒模型加阿萨伊冻干粉高剂量组（3.2 g·kg^-1相当于60 kg人每日生药量24 g）、虚寒模型加阿萨伊冻干粉低剂量组（1.6 g·kg^-1相当于60 kg人每日生药量12 g）。动物适应数天后，肌肉注射地塞米松磷酸钠（0.35 mg·kg^-1）造成虚热证模型，肌肉注射氢化可的松琥珀酸钠（20 mg·kg^-1）造成虚寒证模型，每日上午造模，持续21 d[16-17]。除空白组、模型组每天灌胃去离子水外，其余各组灌胃相应药物。造模7 d后，按大鼠每100 g体重灌胃1 mL给药，每日下午1次，给药14 d，根据体重适当调整灌胃量。

2.2 检测指标 从造模第8天下午开始给药，第22天腹主动脉取血，分离血清，采用放免、比色等方法检测各组大鼠血清中游离脂肪酸（FFA）、脂蛋白酯酶（LPL）、肝脂肪酶（HL）、免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白M（IgM）、补体C3（C3）、补体C4（C4）、皮质酮（CORT）、雌二醇（E2）、睾酮（T）等指标的变化。

2.3 统计方法 数据用±s表示，采用SPSS 20.0的One-way ANOVA过程进行统计学分析，以P<0.05为有统计学意义。

3 结果

3.1 阿萨伊冻干粉对虚热证、虚寒证脂肪代谢水平的影响 与空白组比较，虚热模型组FFA，LPL，HL值均明显升高（P<0.01或P<0.001）；与模型组比较，黄柏组FFA，LPL，HL值均明显降低（P<0.001）；阿萨伊高剂量组FFA，LPL，HL值均明显降低（P<0.01或P<0.001）；阿萨伊低剂量组FFA，LPL，HL值均明显降低（P<0.05，P<0.001，P<0.01）。

与空白组比较，虚寒模型组FFA，LPL，HL值均明显降低（P<0.01或P<0.001）；与模型组比较，肉桂组FFA，LPL，HL值均明显升高（P<0.001或P<0.05）；阿萨伊高剂量组、阿萨伊低剂量组FFA，LPL，HL值差异不显著，见表1。

3.2 阿萨伊冻干粉对虚热证、虚寒证免疫水平的影响 与空白组比较，虚热模型组IgG，IgM，C3值明显降低（P<0.05，P<0.01，P<0.001），C4值明显升高（P<0.01）；与模型组比较，黄柏组IgG，IgM，C3值明显升高（P<0.01或P<0.05）；C4值差异不显著，无统计学意义；阿萨伊高剂量组IgG，IgM，C3值均明显升高（P<0.01或P<0.001）；阿萨伊低剂量IgG，IgM，C3值均明显升高（P<0.05，P<0.001，P<0.01）；C4值差异不显著，无统计学意义。

与空白组比较，虚寒模型组IgG，IgM，C3，C4值明显降低（P<0.001或P<0.05）；与模型组比较，肉桂组IgG，IgM，C3，C4值明显升高（P<0.001）；阿萨伊高剂量组IgG，IgM，C3值明显升高（P<0.05或P<0.001）；C4值差异不显著，无统计学意义；阿萨伊低剂量组IgM值明显升高（P<0.001）；IgG，C3，C4值差异不显著，无统计学意义，见表2。

3.3 阿萨伊冻干粉对虚热证、虚寒证内分泌激素水平的影响 与空白组比较，虚热模型组CORT，T值明显降低（P<0.001，P<0.05），E2，E2/T值明显升高（P<0.001，P<0.01）。与模型组比较，黄柏组CORT，T值明显升高（P<0.05），E2，E2/T值明显降低（P<0.001，P<0.01）；阿萨伊高剂量组CORT值明显升高（P<0.05），E2，E2/T值明显降低（P<0.05）；阿萨伊低剂量组E2/T值明显降低（P<0.05）。

与空白组比较，虚寒模型组CORT，T值明显降低（P<0.001，P<0.05），E2，E2/T值明显升高（P<0.001）。与模型组比较，肉桂组CORT，T值明显升高（P<0.001，P<0.01），E2，E2/T值明显降低（P<0.001）；阿萨伊高剂量组CORT值明显升高（P<0.05），E2，T，E2/T值差异不显著，无统计学意义；阿萨伊低剂量组CORT值明显升高（P<0.05），E2，T，E2/T值差异不显著，无统计学意义，见表3。

4 讨论

“药有寒热温凉四气”，辩其寒热，需临证而尝之，“取其偏长为本。”偏于寒者善治热证，偏于热者善治寒证，观其证候之变，以析寒热[7]。在中医理论体系中，虚热者，阴气亏耗，失于制阳，无以滋润、宁静制约阳热，常以燥热、升动化气太过而见之。虚寒者，阳气亏耗，失于制阴，以至推动、气化、温煦功能减退，常以精神不振、面色淡白、少气乏力、畏寒肢冷而见之[8-9]。笔者根据文献的方法[10-12]，分别采用地塞米松磷酸钠与氢化可的松琥珀酸钠诱导大鼠产生类似中医虚热与虚寒的证候。

基于已有实验研究的基础，进一步分析本研究指标变化。在脂肪代谢水平上，当垂体-甲状腺机能活跃，甲状腺激素分泌亢进，进一步动员了脂肪内的甘油三酯（TG），增强了脂蛋白酯酶（LPL）、肝酯酶（HL）的活性，促进了脂蛋白内源性与外源性2条代谢途径，使游离脂肪酸（FFA）增加，而游离脂肪酸是持久活动的所需物质更是热量的直接来源，故实验大鼠出现虚热证候。当垂体-甲状腺机能减退，甲状腺激素分泌减弱，最终使游离脂肪酸减少，热量来源不足，故实验大鼠出现虚寒证候。黄帝内经有云：“体虚则百病始生。”在免疫指标上，当长期注射内源性氢化可的松琥珀酸钠与外源性地塞米松磷酸钠时，抑制了机体免疫反应，影响了免疫球蛋白（IgG，IgM）与补体C3的合成，补体C4有不同程度的增高和减少，造成了中医所谓“体虚”之证候。从皮质酮（CORT）变化上看，由于长期应用糖皮质激素，通过负反馈抑制下丘脑-垂体-肾上腺皮质轴（HPA），导致肾上腺皮质萎缩和功能不全，进一步导致皮质酮产生减少。而皮质酮为应激反应时产生的类激素，当皮质酮含量降低，处于虚热与虚寒等“虚性”证候时，机体对不利环境的应对能力则会相对减弱。在性激素的变化上看，下丘脑-垂体-性腺轴（HPGA）是调控人体生殖系统发育和功能维持的主要代谢轴，且与中医“虚热、虚寒”密切相关。从雌二醇（E2）、睾酮（T）以及雌二醇/睾酮（E2/T）的指标变化上看，当机体处于虚热证候时，E2，E2/T会有所升高，T有所降低。当机体处于虚寒证候时，E2，E2/T会有所升高，T有所降低，但较虚热证候相比变化幅度较小[13-21]。

在传统中药中，黄柏苦、寒，为寒性中药；肉桂辛、甘、大热，为热性中药。当给予寒凉黄柏干预虚热动物模型时，实验结果显示，大鼠的脂肪代谢水平（FFA，LPL，HL）、免疫水平（IgG，IgM，C3，C4）以及激素水平（CORT，E2，T）均趋于正常；当给予温热肉桂干预虚寒动物模型时，实验结果显示，大鼠的脂肪代谢水平（FFA，LPL，HL）、免疫水平（IgG，IgM，C3，C4）以及激素水平（CORT，E2，T）均趋于正常，可见寒热药性对于寒热证候相关指标的作用趋势较为明显[22]。基于阿萨伊药性寒凉的假说[5]，通过干预虚热、虚寒证候大鼠，以同类比较，异类反证的药理学实验方法揭示其中药药性。结果显示，阿萨伊对于大鼠的脂肪代谢指标（FFA，LPL，HL）、性激素指标（E2，T）的变化与黄柏的作用趋势相似，与肉桂的作用趋势相反。但对于皮质酮（CORT）含量变化，阿萨伊与黄柏，肉桂都起到了促进的作用，其变化机制是否与抑制糖皮质激素，恢复HPA轴负反馈功能有关，还有待进一步深入研究。同时阿萨伊对于大鼠的免疫指标（IgG，IgM，C3，C4）亦与黄柏、肉桂的作用趋势均相同，通过检索文献分析阿萨伊化学组成成分，作者发现阿萨伊具有大量的原花青素、花青素以及黄酮等化学成分[23]，这些成分具有很强的抗氧化性，能够提高机体免疫能力，而在文献中也有相关的药理实验报导[24]。综上所述，阿萨伊作用于大鼠后的指标含量变化与黄柏较为相似，而与肉桂作用趋势略有差异，故阿萨伊的药性与黄柏相似，性偏寒凉。但对于其功效、各化学成分及有效成分部位还需更深一步的探讨研究。

本研究以同类比较、异类反证的药理实验研究方法，通过考察黄柏、肉桂以及阿萨伊对虚热证、虚寒证大鼠脂肪代谢、免疫物质以及内分泌激素的相关指标变化，验证了阿萨伊的中药寒凉药性。随着中医药“一带一路”政策的实施以及在世界文化大融合的背景下，大量的外来植物药进入我国市场，为将这些外来植物药“本土化”，需要不断地通过现代科学技术研究其中药药性，以便以复方配伍的方式将其应用于临床，使之更有效的去解除人类之疾苦，更好的提高人们的生活质量。同时本文也为阿萨伊在中药药性指导下进一步的中医功效、有效成分藥理作用等基础研究奠定了实验基础。

[致谢] 本校中医学院科研实验中心李伟老师在药物制备及实验操作中给予帮助。

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[责任编辑 张宁宁]