脐血干细胞与脐带间充质干细胞移植治疗乙型肝炎肝硬化的疗效比较

张岁 柳立平 马文波 段卫 解从君 佟立新 李保欣

·论著·

脐血干细胞与脐带间充质干细胞移植治疗乙型肝炎肝硬化的疗效比较

张岁 柳立平 马文波 段卫 解从君 佟立新 李保欣

目的 比较经外周静脉移植脐血干细胞与脐带间充质干细胞治疗乙型肝炎肝硬化患者的临床疗效。方法 乙型肝炎肝硬化患者42例，分为脐血干细胞组20例，给予脐血干细胞治疗；脐带间充质干细胞组22例，给予脐带间充质干细胞治疗，2组均给予内科综合治疗。比较2组移植前及移植后2、4、12、24周生化指标、临床症状的改善情况及不良反应。结果 2组干细胞移植后白蛋白、胆碱酯酶及凝血酶原活动度均较移植前升高(P<0.05)，移植后24周总胆红素较移植前降低(P<0.05)，丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶移植后各时间点与移植前比较差异无统计学意义(P>0.05)。2组间各时间点比较差异无统计学意义(P>0.05)。干细胞移植4周后，2组食欲、乏力、腹胀及腹水情况均较移植前改善，2组间比较无统计学意义(P>0.05)。2组患者均未发生严重不良反应和并发症。结论 脐血干细胞与脐带间充质干细胞移植治疗乙型肝炎肝硬化患者安全有效，疗效差异无统计学意义。

脐血干细胞；脐带间充质干细胞；移植；乙型肝炎肝硬化

肝硬化是指弥漫性肝脏纤维化伴有异常结节形成，为肝病的终末期阶段，常并发上消化道出血、肝性脑病、继发感染等而死亡。其中，由乙型肝炎病毒导致的肝硬化占肝病患者总人数的80%左右。目前有效的治疗方法为肝移植，但由于肝源缺乏、价格昂贵及移植后长期服用免疫抑制剂等阻碍其临床广泛应用。近年来，干细胞移植技术的发展为肝硬化的治疗提供了一条新途径。临床试验证实干细胞移植治疗肝硬化患者是安全有效的[1-7]。其中脐血干细胞和脐带间充质干细胞来源丰富、繁殖速度快、繁殖能力强、具有强大的组织器官修复能力及多向分化潜能，在临床应用中越来越受到重视。本文经外周静脉输注脐血干细胞与脐带间充质干细胞治疗乙型肝炎肝硬化患者，对其安全性和疗效进行了观察比较，报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2012年11月至2015年11月于我科住院的乙型肝炎肝硬化患者42例，符合2000年《病毒性肝炎防治方案》中肝硬化的临床诊断标准。排除标准：严重脑、心、肺疾病以及衰竭状态病人；确诊肝脏或其他脏器肿瘤；重型肝炎急性期；严重感染；消化道大出血；肝肾综合征；中重度肝性脑病；有精神疾病者；高度过敏体质者。所有患者采用单盲、平行对照分为脐血干细胞组和脐带间充质干细胞组，其中脐血干细胞组20例，男13例，女7例;年龄34～73岁，平均(55.8±11.9)岁；Child-Pugh分级A级5例，B级10例，C级5例，给予脐血干细胞移植；脐带间充质干细胞组22例，男15例，女7例;年龄34～74岁，平均(54.8±10.8)岁；Child-Pugh分级A级6例，B级10例，C级6例，给予脐带间充质干细胞移植。2组患者均口服核苷类药物抗病毒，并给予内科综合治疗。2组患者的性别比、年龄、Child-Pugh分级无统计学意义(P>0.05)。本研究获医院伦理委员会批准，所有患者均签署知情同意书。

1.2 脐血干细胞制备 选择健康产妇，获产妇知情同意。胎儿娩出断脐后，用装有ACD-B保存液的一次性采血袋用封闭式采血法采血，每袋采脐血约60～140 ml。采用细胞处理试剂盒分离脐血干细胞，经流式细胞仪检测细胞表型确定为脐血干细胞，细胞活性检测大于95%，细胞内毒素检测阴性。

1.3 脐带间充质干细胞制备 选择健康产妇，获产妇知情同意。采用贴壁培养法分离脐带间充质干细胞。脐带间充质干细胞传代到第三代，镜下观察，可见细胞贴壁良好，融合密度达85%。进行流式染色后，流式细胞仪上机检测细胞表型确定为脐带间充质干细胞。收集培养至第4代的干细胞。

1.4 干细胞移植 经外周静脉回输干细胞，2组输注前20 min均给予肌内注射苯海拉明注射液20 mg，输注前后均给予0.9%氯化钠溶液100 ml冲管。每次回输的干细胞数量为(1.4～2.3)×106/kg，用0.9%氯化钠溶液稀释至100 ml，静脉滴注。每半月输注1次，共回输2次。

1.5 观察指标 检测干细胞移植前及移植后2、4、12、24周患者丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、总胆红素(total bilirubin,TBIL)、白蛋白(albumin,ALB)、胆碱酯酶(cholinesterase,CHE)、凝血酶原活动度(prothrombin activity,PTA)水平变化，观察临床症状(食欲、乏力、腹胀、腹水)改善情况、移植后不良反应及肝癌的发生率、病死率。

2 结果

2.1 生化指标改善情况 2组患者ALB、CHE移植后12、24周较移植前升高(P<0.05或P<0.01)，PTA移植后4、12、24周较移植前升高(P<0.05或<0.01)，TBIL移植后24周较移植前降低(P<0.05或<0.01)，ALT、AST移植后各时间点与移植前比较差异无统计学意义(P>0.05)。2组间各时间点比较差异均无统计学意义(P>0.05)。见表1。

组别ALT(U/L)AST(U/L)TBIL(μmol/L)ALB(g/L)CHE(U/L)PTA(%)脐血干细胞组(n=20) 移植前34．7±15．735．4±15．038．3±14．734．0±5．03562．7±1269．863．5±14．0 移植后2周31．3±13．834．2±15．236．3±13．434．7±5．73695．0±1251．365．5±14．6 移植后4周30．0±9．131．7±12．935．8±13．036．2±5．03752．3±1367．169．9±16．5# 移植后12周27．4±10．130．4±12．733．7±13．238．3±6．0#4032．2±1365．7#75．3±18．8# 移植后24周29．0±12．832．5±17．031．2±11．6#38．0±6．5#4266．9±1122．7#77．7±18．5#脐带间充质干细胞组(n=22) 移植前34．2±15．435．7±9．537．8±13．032．3±5．73440．7±1274．762．4±14．1 移植后2周33．5±14．634．4±9．336．7±13．033．4±3．93558．0±1271．264．6±12．7 移植后4周33．2±11．935．1±8．535．3±10．333．7±4．13637．0±1228．868．3±15．9∗ 移植后12周32．5±11．733．8±8．735．1±12．636．1±5．1#3977．9±1251．4∗73．3±16．1# 移植后24周31．3±10．432．6±7．732．7±9．5∗36．1±5．5#4100．8±1280．5#74．6±18．5#

注：与移植前比较，*P<0.05与移植前比较，#P<0.01

2.2 临床症状改善情况 2组患者移植后4周，食欲、乏力、腹胀、腹水情况均较移植前改善，但2组间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表2 2组临床症状改善情况 例

2.3 不良反应 2组患者在移植及随访24周过程中均无与干细胞移植相关的不良反应发生，无肝癌发生，无死亡病例。

3 讨论

肝硬化是一类严重威胁人们健康的肝脏疾病，是所有肝病的终末期阶段，肝移植是其最有效的治疗方法，但由于供肝缺乏、高额的费用及移植后免疫排斥反应等限制了其广泛开展。干细胞是指具有自我更新能力、多向分化潜能、免疫调节作用和靶向治疗功能的原始细胞，越来越多的被应用于器官损伤的治疗。干细胞移植技术在肝病方面的研究应用，为肝硬化的治疗提供了一种新的治疗方法。目前临床上用来治疗肝硬化的干细胞主要是骨髓干细胞、外周血干细胞、脐血干细胞和脐带间充质干细胞。但有报道指出骨髓干细胞移植取材相对不易，对于体弱和老年患者不适用，外周血干细胞移植在骨髓干细胞动员期间，白细胞明显增加，存在形成心脑血管血栓的风险[8]，临床应用均受到一定限制。脐血干细胞与脐带间充质干细胞以其自身优点，比如来源广泛、取材方便、干细胞含量丰富、自身繁殖能力强、繁殖速度快、表面抗原性弱、无需配型，受到广泛关注。脐血干细胞来源于脐带血，有造血干细胞和间充质干细胞；脐带间充质干细胞来源于脐带，主要是间充质干细胞。临床试验证实这两种不同来源的干细胞移植治疗肝硬化患者均可改善患者的临床症状及肝功能，安全可靠[5-7]。但此两种干细胞治疗肝硬化患者的疗效是否存在差异，仍需进一步探讨。本研究通过对比脐血干细胞与脐带间充质干细胞治疗乙型肝炎肝硬化患者的临床疗效，为肝硬化的临床治疗提供进一步指导。

研究结果显示2组间干细胞移植治疗乙型肝炎肝硬化患者的疗效比较无统计学差异，但2组在临床上均取得了一定疗效。2组患者移植后ALB、CHE、PTA均较移植前升高，TBIL较移植前降低，差异均有统计学意义。表明脐血干细胞与脐带间充质干细胞均可发挥修复病损肝脏的作用，改善肝脏的合成功能，其可能机制为：(1)干细胞通过“归巢”到达肝脏后在肝脏的微环境中分化为功能性肝细胞[9,10]； (2)干细胞可分泌营养因子，抑制炎性反应，抑制肝细胞凋亡，促进肝细胞再生[11]，抑制肝纤维化形成[12]；(3)氧化应激活性氧激发的氧化应激反应，能够诱发肝损伤，干细胞的抗氧化活性起到了降低肝损伤的作用[13]；(4)干细胞可表达各种可溶性因子，例如前列腺素E2、吲哚胺2,3双加氧酶、白介素-6、白介素-10和人白细胞抗原G，这些可溶性因子可调节各种免疫细胞的增殖和功能，并可诱导调节性T细胞[14]，干细胞的这种免疫调节潜能在肝硬化的治疗中起到了重要的作用。本研究显示两组患者ALT、AST移植前后无统计学差异，考虑与肝硬化患者干细胞移植前ALT、AST在正常范围内或升高不明显有关。

2组患者食欲、乏力、腹胀症状改善，腹水减轻，无与干细胞移植相关的不良反应发生，安全性好。既往有研究指出干细胞可通过直接转化、抑制抗肿瘤免疫反应和对肿瘤细胞的营养作用等导致肿瘤发生[15]。但也有报道认为干细胞可能对肝硬化患者起到了更好的保护作用，防止了肝癌的发生[16]。本试验所有患者随访24周，均无肝癌发生，进一步说明了脐血干细胞与脐带间充质干细胞移植治疗的安全性。

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10.3969/j.issn.1002-7386.2017.16.011

项目来源：河北省医学科学研究重点课题(编号：20150636)

050031 石家庄市，河北医科大学第一医院中西医结合肝病诊疗中心

R 575.2

A

1002-7386(2017)16-2448-03

2017-04-06)