双孢蘑菇蛛网病病菌生物学特性研究*

兰玉菲，安秀荣，王庆武，唐丽娜

（泰安市农业科学研究院，山东 泰安 271000）

双孢蘑菇蛛网病病菌生物学特性研究*

兰玉菲，安秀荣，王庆武，唐丽娜

（泰安市农业科学研究院，山东 泰安 271000）

研究结果表明双孢蘑菇蛛网病病原Cladobotryum mycophilum菌丝最适生长条件为温度25℃，pH5，最适碳源为蔗糖，最适氮源为蛋白胨和牛肉膏。菌丝的致死温度为49℃。

双孢蘑菇；蛛网病病原；生物学特性

双孢蘑菇（Agaricus bisporus） 是全世界广泛消费的食用菌，也是目前世界上栽培最广泛、年产量最高的食用菌，在全世界的70多个国家和地区进行栽培[1]。

近年来，双孢蘑菇蛛网病在欧洲、美国、澳大利亚和韩国等大面积发生并造成严重的损失[2]。2014年，在邹城双孢菇工厂化厂房内发现类似蛛网病的病害，该病害首先在覆土层表面长出绒毛状的菌丝体，并逐渐沿菌柄向菌盖蔓延。病原菌菌丝体渐呈棉絮状，同时产生大量孢子，发病双孢蘑菇子实体出现褐色斑点，最后腐烂。通过形态学和分子生物学鉴定其病原为Cladobotryum mycophilum (teleomorph Hypomyces odoratus)，在国内首次发现该病原引起双孢蘑菇蛛网病[3]。本研究进一步对该病原菌的生物学特性进行研究，以期为该病害发生规律和综合防治措施的制定提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 供试菌株

供试菌株为泰安市农业科学研究院实验室分离的病原菌ZC。

1.2 培养基

1．2．1 PDA培养基

马铃薯200 g、葡萄糖20 g、琼脂粉20 g，水定容至1 L。

1．2．2 基础培养基

葡萄糖20 g、蛋白胨10 g、磷酸二氢钾1 g、硫酸镁0．5 g、琼脂粉20 g，水定容至1 L。

1.3 温度对菌丝体生长的影响

病原菌ZC菌株在PDA培养基上培养6 d后，用打孔器打取菌落，然后接种到PDA平板上并分别置于15℃、20℃、25℃、30℃、35℃、40℃下黑暗培养，每个处理5次重复。采用“十字交叉”法测量菌落直径，计算菌丝日生长速度并进行方差分析。具体方法参照文献[4]。

1.4 pH对菌丝体生长的影响

用HCl或NaOH溶液将PDA培养基的pH分别调节成4～10，并制成平板，接入菌丝块置于25℃恒温黑暗培养。结果测量和分析方法同1．3。

1.5 碳源筛选试验

按照基础培养基的配制方法，分别用蔗糖、麦芽糖、乳糖、果糖替代葡萄糖。制成平板后分别接入菌丝块，25℃恒温黑暗培养，每个处理5次重复。结果测量和分析方法同1．3。

1.6 氮源筛选试验

供试氮源分别为蛋白胨、牛肉膏、酵母膏、硫酸铵、硝酸铵，试验方法同1．5。

1.7 病原菌菌丝致死温度的测定

参照文献[5]的方法，取培养好的新鲜菌丝分装于离心管中水浴10 min，水浴温度分别设为35℃、40℃、45℃、50℃、55℃和60℃，无菌条件下将水浴处理的菌丝块移至PDA平板培养基上，25℃黑暗培养，每个处理5次重复。根据试验结果进一步按1℃梯度设计温度梯度，进行相同处理，确定菌丝的致死温度。

2 结果与分析

2.1 温度对菌丝体生长的影响

不同温度对ZC菌株菌丝生长的影响见表1。

表1 不同温度对ZC菌株菌丝生长的影响Tab．1 Effect of different temperature on mycelia growth of ZC strain

试验结果表明，该病原菌菌丝在15℃～30℃条件下均可生长，25℃时菌丝生长最快，达0．73 cm·d-1，且长势好，其次为20℃，两者菌丝生长速度差异显著；15℃时菌丝生长一般，长势较弱；30℃培养6 d菌丝刚萌发；35℃以上菌丝停止生长。该病原菌适宜生长温度为20℃～25℃，最适温度为25℃。

2.2 不同pH对菌丝体生长的影响

不同pH对菌丝生长的影响见图1。

图1 pH对ZC菌株菌丝生长的影响Fig．1 Effect of pH on mycelia growth of ZC strain

从图1中可以看出，病原菌菌丝在pH4～10范围内均能生长，pH为5时菌丝生长最快，日生长速度达0．85 cm·d-1，且长势好，其次是pH8、pH6和pH7，pH为4时菌丝长势弱，pH大于9时菌丝生长速度明显减慢。因此确定该病原菌生长的适宜pH为5～8，最适pH为5。

2.3 不同碳源对菌丝体生长的影响

不同碳源对菌丝生长的影响见表2。

表2 不同碳源对ZC菌株菌丝生长的影响Tab．2 Effect of carbon sources on mycelia vigor of ZC strain

试验结果表明，病原菌可利用供试的5种碳源。在以乳糖为碳源的培养基上菌丝生长最快，达0．69 cm·d-1，但菌丝长势差；在以蔗糖为碳源的培养基上菌丝生长较乳糖稍慢，为0．66 cm·d-1，菌丝浓密、健壮，长势好，两者菌丝生长速度差异不显著；其次是果糖和葡萄糖，菌丝生长速度分别为0．63 cm·d-1和0．61 cm·d-1；在以麦芽糖为碳源的培养基上菌丝生长最慢，仅为0．56 cm·d-1。综合菌丝生长速度和菌丝长势，该病原菌菌丝生长最适宜的碳源为蔗糖。

2.4 不同氮源对菌丝体生长的影响

不同氮源对菌丝生长的影响见表3。

表3 不同氮源对ZC菌株菌丝生长的影响Tab．3 Effect of nitrogen sources on mycelia vigor of ZC strain

试验结果表明，在以蛋白胨为氮源的培养基上病原菌菌丝生长最快，达到0．60 cm·d-1，且菌丝粗壮，长势好，其次为牛肉膏，为0．59 cm·d-1，病原菌在上述2种氮源上菌丝生长速度和长势差异均不显著；在以酵母膏和NH4NO3为氮源的培养基上菌丝浓密健壮，但生长速度较慢；在以 (NH4)2SO4为氮源的培养基上菌丝生长速度最慢，长势也较差。说明菌丝生长适宜的氮源为蛋白胨和牛肉膏。

2.5 病原菌菌丝致死温度

病原菌C.mycophilum菌丝在35℃～45℃水浴处理10 min后能够在PDA培养基上继续生长，但当温度高于50℃时均不能生长。进一步在45℃～50℃范围内按1℃梯度设计6个温度梯度，处理后发现45℃、46℃、47℃和48℃水浴处理的菌丝能够继续生长，而49℃、50℃水浴处理的菌丝不能生长。由此确定病原菌菌丝的致死温度是49℃。

3 讨论

蛛网病是由Cladobotryum属或者Hypomyces属真菌侵染引起的食用菌病害，已对双孢蘑菇生产造成了重大损失。该病害可为害多种食用菌，已在欧洲、美洲和亚洲等地区都有报道[6]。前人研究结果表明C.mycophilum可以为害双孢蘑菇[2，7]、杏鲍菇[8-9]、灵芝[10]等，食用菌生产者和管理部门都应该引起高度重视。

C.mycophilum菌丝生长速度极快，且易产生大量的孢子，传播速度快，一旦发病很难控制。

本文对引起中国双孢蘑菇蛛网病的病原C.mycophilum进行生物学特性研究，结果表明C.mycophilum菌丝体最适生长温度为25℃，最适pH为5，最适碳源为蔗糖，最适氮源为蛋白胨和牛肉膏，菌丝致死温度为49℃。研究结果能够为深入研究该病害的发生规律、流行动态及综合防治提供理论参考。

[1]王博.双孢蘑菇营养菌丝老化现象的研究[D].哈尔滨：东北农业大学，2010.

[2]Back CG,Kim YH,Jo WS,et al.Cobweb disease on Agaricus bisporus caused by Cladobotryum mycophilum in Korea[J]. Journal of General Plant Pathology,2010,76(3):232-235.

[3]Lan YF,Wang QW,Yu CX,et al.First Report of Cladobotryum mycophilum causing cobweb disease on Agaricus bisporus in China[J].Plant Disease,2016,100(11):2334.

[4]兰玉菲，安秀荣，唐丽娜，等.泰山硫磺菌硫磺原变种的生物学特性研究[J].山东农业科学,2012，44（8）：46-48.

[5]孙嘉曼，张进忠，韦弟，等.一种新的香蕉黑斑病病原菌鉴定及生物学特性研究[J].植物病理学报，2016，46（1）：119-123.

[6]张琪辉，王威，李成欢，等.斑玉蕈蛛网病的病原菌及其生物学特性[J].菌物学报，2015，34（3）：350-356.

[7]Gea FJ,Navarro MJ,Carrasco J.First report of cobweb on white button mushroom(Agaricus bisporus)in Spain caused by Cladobotryum mycophilum [J].Plant Disease,2012,96 (7):1067.

[8]Gea FJ,Navarro MJ,Suz LM.First report of Cladobotryum mycophilum causing cobweb on cultivated king oyster mushroom in Spain[J].Plant Disease,2011,95(8):1030.

[9]Kim MK,Lee YH,Cho KM,et al.First report of cobweb disease caused by Cladobotryum mycophilum on the edible mushroom Pleurotus eryngii in Korea[J].Plant Disease,2012, 96(9):1374.

[10]Zuo B,Lu BH,Liu XL,et al.First report of Cladobotryum mycophilum causing cobweb on Ganoderma lucidum cultivated in Jilin Province,China[J].Plant Disease,2016,100 (6):1239.

Biological Characteristics of Cladobotryum mycophilum Causing Cobweb Disease on Agaricus bisporus

LAN Yu-fei,AN Xiu-rong,WANG Qing-wu,TANG Li-na
(Tai'an Academy of Agricultural Sciences,Tai'an 271000,China)

The biological test showed that the optimum culture conditions for the Cladobotryum mycophilum were 25°C,pH5, sucrose as carbon source and peptone and beef extract as nitrogen source．The lethal temperature was 49℃for hypha of C.mycophilum.

Agaricus bisporus;Cladobotryum mycophilum;biological characteristics

S646.1

A

1003-8310（2017）04-0062-04

10．13629/j．cnki．53-1054．2017．04．015

山东省食用菌创新团队病虫害防控与质量控制岗位（SDAIT-07-04）；国家现代农业（食用菌）产业体系建设专项（CARS-24）。

兰玉菲（1980-），女，博士，高级农艺师，主要从事食（药）用菌遗传多样性分析、新品种选育、驯化栽培、病虫害防控及技术开发推广。E-mail:lanyufei526＠163．com

2017-05-13