某猪场PRRSV与PCV2双重感染的诊断

(贵州大学动物科学学院，贵州 贵阳 550025）

某猪场PRRSV与PCV2双重感染的诊断

徐 国，曾智勇*，代振江，叶百川，张爱琼，咸 文，何小莉

(贵州大学动物科学学院，贵州 贵阳 550025）

2017年2月，贵州某猪场发生以仔猪皮炎和持续性腹泻为特征的临床病例。为查明病因，送检发病保育仔猪2头于实验室进行病原诊断。根据流行病学情况、临床症状、病理解剖与PCR/RT-PCR检测，确诊该猪场送检保育猪存在猪蓝耳病病毒与猪圆环病毒2型的双重感染。

PRRSV；PCV2；双重感染

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)又称猪蓝耳病，是由猪繁殖与呼吸综合征病毒( PRRSV)引起的以猪发生呼吸道疾病和母猪发生繁殖障碍为特征的急性传染病[1], 我国自1996年，郭宝清等[2]确定了本病在我国存在以来，全国多地相继发生[3-5]。猪圆环病毒病感染是由猪圆环病毒2型（PCV2）感染所引起的一系列猪传染病的总称，临床特征多种多样，主要特征为体质下降、生长发育不良、腹泻、呼吸困难，特别是肾脏、脾脏及全身淋巴结肿大、出血和坏死[6]。近年来，由PRRSV、PCV2感染后造成猪只免疫抑制，从而继发其他病原感染呈上升趋势，给养猪业造成了巨大的经济损失。本文就贵州某猪场PRRSV与PCV2双重感染的诊断作如下报道。

1 发病情况

该猪场存栏保育仔猪1 000余头，保育猪腹泻发病率约10%左右，部分发病仔猪有皮炎、丘疹，呼吸困难，大腿内侧、阴囊部及耳根有发绀现象，随病情的加重病死率亦随之升高，达10%左右。

2 病理解剖

送检病仔猪解剖可见肠系膜淋巴结、腹股沟淋巴结与颌下淋巴结肿大、出血（图1），脾脏大面积梗死、表面有淡黄色纤维素性渗出物覆盖（图2），肾脏可见白斑（图3）；胸腔脏器黏连，肺脏间质增宽且有弥散性出血,心包积有大量浑浊的淡黄色液体，心脏表面有大量纤维素性渗出物覆盖，呈典型的“绒毛心”特征（图4）。

3 病毒的PCR/RT-PCR检测结果

根据临床症状、病理解剖可初步诊断存在典型的副猪嗜血杆菌的感染，并疑似有猪瘟病毒（CSFV）、猪蓝耳病病毒（PRRSV）或猪圆环病毒2型（PCV2）等病毒的混合感染。为确诊感染的病毒性病原，应用实验室设计合成的针对CSFV、PRRSV和PCV2的特异性引物（见表1），对疑似病原进行检测。应用TaKaRa MinBEST Viral DNA/ RNA Extraction Kit Ver.5.0 试剂盒提取核酸，分别用表1中特异性引物与PrimeScript One Step RT-PCR Kit Ver.2试剂盒进行PCR/RT-PCR扩增，反应体系为：RNase Free dH2O 7.5 μL，2×1 Step Buffer 12.5 μL，上下游引物各0.5 μL，核酸模板3.0 μL，PrimeSc ript 1 Step Enzyme Mix 1.0 μL。PCR反应条件为：95 ℃预变性5 min；95 ℃变性60 s，57 ℃退火40 s，72 ℃延伸100 s，35个循环；72 ℃终延伸10 min。RTPCR反应条件为：50 ℃逆转录40 min；95 ℃预变性5 min；95 ℃变性30 s，57 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，35个循环；72 ℃终延伸10 min；反应结束后分别取5 μL PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳检测。检测表明，PCV2阳性、PRRSV阳性，CSFV阴性，见图5。

图1 颌下淋巴结出血肿大

图2 脾脏表面覆盖有纤维素性渗出物

图3 肾脏见有白斑

图4 心脏严重纤维束性增生

图5 送检猪PCR/RT-PCR检测结果

表1 扩增目的片段的引物

4 分析讨论

通过流行病学情况、临床症状、剖检病理和病毒PCR/RT-PCR检测结果，确诊该养殖场仔猪存在PCV2与PRRSV双重感染。由于病理解剖观察到，心包积有大量浑浊的淡黄色液体，心脏表面有大量纤维素性渗出物覆盖，呈典型的“绒毛心”基本特征，以及病原检测结果表明，PCV2与PRRSV感染后会继发副猪嗜血杆菌等其他病原的感染，所以临床上见有类似疾病当多角度分析病因。

因病毒性疾病主要依靠疫苗免疫，故建议在发生该类疾病的猪场紧急接种PCV2疫苗和PRRSV疫苗；其次，对发病猪进行隔离饲养以防止散毒，病死猪及污染物彻底焚烧或深埋，对污染的圈舍和四周环境用2%的烧碱进行严格消毒，对新购进猪要进行严格的隔离、检疫，隔离期间定期进行血清学抗体检测。另外，对于猪蓝耳病与多种病原混合感染可采取全场用药，用泰妙菌素150 g/t，阿散酸90 g/t，黄芪多糖2 kg/t，阿莫西林300 g/t，磺胺-6-甲氧嘧啶钠1 kg/t(首次用量)，300 g/t(维持用量)，具有一定疗效[3]。

[1] SUR J H, DOSTER A R, CHRISTIAN J S, et al. Porcine reproductive and respiratory syndrome virus replicates in testicular germ cells, alters spermatogenesis, and induces germ cell death by apoptosis[J]. Journal of Virology, 1997, 71(12)﹕9170-9179.

[2] 郭宝清, 陈章水, 刘文兴,等. 应用间接免疫荧光法从国内生殖障碍综合征猪群中检测生殖和呼吸综合征阳性抗体的研究[J]. 中国兽医科学, 1996(3)﹕3-5.

[3] 孟婷,吴敏秋,徐小琴,等.一起猪蓝耳病与多种病原混合感染的诊治[J].黑龙江畜牧兽医,2011(2)﹕81-82.

[4] 冯玉龙,孙晓亮,高存帅,等.猪蓝耳病与圆环病毒病混合感染的诊治[J]. 黑龙江畜牧兽医,2014(2)﹕72-73.

[5] 王洪光,汤德元,罗险峰,等.贵州省某猪场PRRSV,PCV-2和PRV混合感染的快速诊断[J].黑龙江畜牧兽医,2013(21)﹕108-110.

[6] 陈溥言.兽医传染病学[M].5版.北京：中国农业出版社，2006：231.

2017-03-29）

贵州省省校合作计划项目“携带遗传标记的猪圆环病毒反向遗传操作平台的构建”,黔科合LH字[2014]7670号

徐国，男，在读硕士，研究方向：动物传染病病原分子生物学。E-mail:576144546@qq.com

*通讯作者：曾智勇，男，教授，博士，硕士生导师，从事动物传染病病原分子生物学研究