老年三阴乳腺癌组织中MMP-9和CD147的表达及意义

张玉扬 张 丹 孙丽丽 董奇观 程 丽 张 伟 程日霞 赵 林

(抚顺矿务局总医院肿瘤内二科，辽宁 抚顺 113008)

老年三阴乳腺癌组织中MMP-9和CD147的表达及意义

张玉扬 张 丹 孙丽丽 董奇观 程 丽 张 伟 程日霞 赵 林

(抚顺矿务局总医院肿瘤内二科，辽宁 抚顺 113008)

目的 探讨基质金属蛋白酶(MMP)-9和CD147在老年三阴乳腺癌(TNBC)中的表达及对预后的影响。方法 行手术切除治疗的年龄≥60岁TNBC患者组织标本63例，51例老年乳腺纤维瘤组织，采用免疫组化方法，检测MMP-9和CD147的表达情况，并分析其与临床病理特征的相关性，通过Kaplan-Meier生存曲线法计算不同组别的老年TNBC的生存率。结果 MMP-9和CD147在老年TNBC中的表达明显高于老年乳腺纤维瘤(P<0.05)；MMP-9和CD147的表达与老年TNBC肿瘤直径、病理学分级、组织学分级、淋巴转移情况以及Ki67高表达(>30%) 有关(均P<0.05)，而与P53的表达无关(P>0.05)；34例MMP-9阳性的老年TNBC中位生存时间(OS)为28.0个月，95%CI为10.0～41.3个月，29例MMP-9阴性的老年TNBC OS为34.0个月，95%CI(12.0～49.6个月)，MMP-9阳性生存率明显低于MMP-9阴性(P=0.015)；37例CD147阳性的老年TNBC OS为26.0个月，95%CI为10.0～35.2个月，26例CD147阴性的老年TNBC OS为35.0个月，95%CI为11.0～51.7个月，CD147阳性生存率明显低于CD147阴性(P=0.007)。结论 MMP-9和CD147在老年TNBC中表达显著增高，且与TNBC的恶性进展密切相关，有可能成为老年TNBC临床治疗新靶点。

三阴乳腺癌；基质金属蛋白酶-9；CD147

三阴乳腺癌(TNBC)是指孕激素受体(PR)、雌激素受体(ER)、人表皮生长因子受体(Her)-2均阴性的乳腺癌，是一种特殊类型的乳腺癌亚型，占乳腺癌的15%～25%〔1〕，但国内外对老年人TNBC的研究甚少。老年TNBC的组织学特点表现为组织分级高、核分裂数目多、易发生局部浸润转移、总生存率和无瘤生存率较低〔2，3〕。由于其不表达激素受体和Her-2，则不能进行内分泌及抗Her-2靶向治疗(曲妥珠单克隆抗体)。本研究通过免疫组化方法，检测老年TNBC组织切片中CD147和基质金属蛋白酶(MMP)-9蛋白表达水平，结合其临床病理特征指标以探讨MMP-9和CD147在老年TNBC表达中的相关性及对预后的影响。

1 对象与方法

1.1 对象 选取2008年6月至2010年6月来抚顺矿务局总医院行手术切除治疗的年龄≥60岁TNBC患者组织标本63例，标本均经甲醛固定，石蜡包埋，经病理学、免疫组化等证实。患者均为女性，年龄60～77〔平均(67.5±4.3)〕岁。根据《NCCN乳腺癌临床实践指南》(中国版)2014进行分型〔4〕，其中Ⅰ期22例，Ⅱ期19例，Ⅲ期19例，Ⅳ期3例。肿瘤直径≤2 cm 25例，>2 cm 38例。腋窝淋巴结未转移者33例，转移者30例。病例分型：浸润性导管癌48例，非浸润性导管癌15例。本组研究所选的TNBC患者均经过有效的临床治疗，包括保乳+腋淋巴结清扫术和乳腺癌根治术等。同时收集51例老年女性乳腺纤维瘤组织作为对照。本研究经过本院医学伦理委员会审查，获得批准。患者及家属均签署知情同意书。

1.2 主要试剂 免疫组化SP试剂盒、二氨基联苯胺(DAB)显色试剂、鼠抗人单克隆PR抗体、鼠抗人单克隆ER抗体、鼠抗人单克隆Her-2抗体、鼠抗人单克隆MMP-9抗体均购自福州迈新生物技术开发有限公司，兔抗人多克隆CD147抗体购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.3 免疫组化染色及结果判定 对所有石蜡切片采用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)法染色，具体操作步骤按照试剂盒说明书进行，采用已知阳性片作阳性对照，同时采用磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗作为阴性对照。MMP-9定位组织细胞膜或胞质，CD147蛋白表达定位组织细胞的细胞膜和细胞质，出现明显的黄色或棕黄色颗粒视为着色阳性，参考袁中玉等〔5〕提出的染色标准(在高倍镜下对每张切片随机选择5个视野，计数200个细胞/视野，共1 000个)综合阳性细胞率合计染色强度进行综合评估：未见阳性细胞为阴性(-)，阳性细胞数<10%为弱阳性(+)，10%～50%为中度阳性()，≥50%为强阳性()。

1.4 术后随访 随访至2015年12月，随访时间为10～80个月，中位随访时间49个月，总生存时间(OS)的计算为治疗开始到死于任何疾病、最后随诊或观察截止的时间。

1.5 统计学方法 应用SPSS19.0软件进行χ2检验，Kaplan-Meier法计算生存率、绘制生存曲线，各组生存率比较用Log rank检验。

2 结 果

2.1 MMP-9和CD147在老年TNBC和乳腺纤维瘤组织中的表达情况 MMP-9和CD147均定位于乳腺癌切片组织细胞膜和(或)细胞质，染色阳性为黄色或棕黄色颗粒状，分布不均，显色深浅不同，呈现片状、灶状或散在分布，而在对照组乳腺纤维瘤病变中导管腺上皮细胞中轻度着色或不着色(见图1)。63例老年TNBC切片组织中，MMP-9和CD147阳性率分别为54.0%(34/63，-29例，+14例，11例，9例)和58.7%(37/63，-26例，+12例，15例，0例)；51例老年乳腺纤维瘤组织中，MMP-9和CD147的阳性率分别为33.3%(17/51，-34例，+15例，2例，0例)和29.4%(15/51，-36例，+13例，2例，0例)，MMP-9和CD147在老年TNBC中的表达明显高于老年乳腺纤维瘤(P<0.01)。

2.2 MMP-9和CD147在老年TNBC中的表达与临床病理因素的关系 MMP-9和CD147的表达与老年TNBC肿瘤直径、病理学分级、组织学分级、淋巴转移情况及Ki67高表达(>30%)有关(P<0.05)，而与P53的表达无关(P>0.05)。见表1。

图1 MMP-9和CD147在老年TNBC和老年乳腺纤维瘤中的表达 (SP法，×200)

表1 老年TNBC中MMP-9和CD147的表达与临床病理参数的关系(n)

2.3 MMP-9和CD147表达对预后的影响 对TNBC患者随访期间，死亡52例，其中46例死于乳腺癌的进一步进展，6例死于其他疾病。随访的34例MMP-9阳性的老年TNBC中29例死亡，生存率14.7%，中位生存时间28.0个月，95%CI为10.0～41.3个月，29例MMP-9阴性的老年TNBC中死亡23例，生存率为20.7%，中位生存时间为34.0个月，95%CI为12.0～49.6个月，MMP-9阳性生存率明显低于MMP-9阴性(P=0.015)；37例CD147阳性的老年TNBC中32死亡，生存率为13.5%，中位生存时间为26.0个月，95%CI为10.0～35.2个月，26例CD147阴性的老年TNBC中死亡20例，生存率为23.1%，中位生存时间为35.0个月，95%CI为11.0～51.7个月，CD147阳性生存率明显低于CD147阴性(P=0.007)。见图2，图3。

图2 MMP-9阳性表达组与阴性表达组OS曲线比较

图3 CD147阳性表达组与阴性表达组OS曲线的比较

3 讨 论

TNBC的临床特征包括病理组织学分级高、肿瘤体积大、易转移、内分泌及抗HER-2靶向治疗无效，因而TNBC处于何种TNM分期，其预后均较差，5年生存率不足15%〔5〕。研究发现，TNBC与患者年龄和组织学分型相关，已证实老年TNBC中浸润性导管癌占83%〔6〕，其次是腺癌和小叶癌。由于老年人生物功能有所减退，手术放化疗耐受性差，同时TNBC的治疗缺乏明确的治疗靶点，揭示老年TNBC的预后更差。

MMP是Zn2+依赖性高度保守的内肽酶，能够降解细胞外基质以及基底膜的所有胶原蛋白质，目前共发现20种MMP，按照其靶向作用物的不同，将其分为4大类：肽原酶、明胶酶、膜型MMP和基质降解素。MMP-9(明胶酶B，92 kD)隶属于明胶酶中的一个亚型，具有MMP的共同结构特点，在细胞基质的代谢调节中起重要作用，其可通过降解基底膜Ⅳ型胶原从而破坏其完整性，利于肿瘤的局部浸润、生长以及远处转移〔7〕。CD147是一种表达于肿瘤细胞表面的黏附分子，参与细胞间及细胞与基质间的黏附，在恶性肿瘤细胞表面呈现过表达状态。CD147在机体内广泛分布，具有不同的生理功能并参与多种生理及病理过程。研究表明〔8〕，CD147是MMP-9的上游调节因子，能够通过多种信号转导途径调控MMP的产生。研究发现〔9〕，在肿瘤组织中，CD147的高表达能够刺激MMP-9基因高转录及其高分泌而导致肿瘤细胞侵袭转移。Li等〔10〕通过将CD147的反义RNA转染肝癌细胞，MMP-9的分泌明显减少，癌细胞的侵袭和转移也出现明显抑制。

本研究结果表明，MMP-9和CD147在老年TNBC组织中的表达水平明显增加，高于老年乳腺纤维瘤组织，而且，MMP-9与CD147的表达水平呈现正相关趋势，这与前期文献报道结果类似〔11〕。同时，本研究结果表明MMP-9和CD147在老年TNBC肿瘤细胞发生、生长以及转移中相互影响，相互作用。黄晓曦等〔12〕研究发现，乳腺癌 MMP-2和(或)MMP-9的表达与腋窝淋巴结转移呈正相关，薛松等〔13〕发现，CD147蛋白表达与转化生长因子(TGF)β1及其Ⅰ型受体(TGFβR I)表达均呈显著正相关，这可能与它的生物学特性更具侵袭性及缺乏有效的减危手段有关，肿瘤恶性程度越高，转移越早，阳性表达越高，提示患者的预后越差。

1 杜 娟，阮祥燕.三阴乳腺癌的特点及研究进展〔J〕.首都医科大学学报，2015；36(4)：578-82.

2 王 琢，王丽娟，张颖超，等.老年三阴型乳腺癌患者和青年患者临床生物学特征对比〔J〕.中国老年学杂志，2013；33(3)：694-5.

3 高 静.老年三阴性乳腺癌的临床病理特征及治疗〔J〕.国际肿瘤学杂志，2013；40(12)：921-3.

4 李荣萍，张 芳，韩 猛，等.PARP-1与HMGA2在三阴型老年局部晚期乳腺癌中的表达及对预后的影响〔J〕.山西医药杂志，2014；43(23)：2736-9.

5 袁中玉，王树森，高 岩，等.305例三阴乳腺癌患者的临床特征及预后因素分析〔J〕.癌症，2008；27(6)：561-5.

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7 刘桃桃，申梦琴，王丹丹，等.三阴性乳腺癌中MMP-9及E-cadherin表达的意义〔J〕.实用肿瘤学杂志，2014；28(1)：19-23.

8 Kreike B，Van Kouwenhove M，Horlings H，etal.Gene expression profiling and histopathological characterization of triple-negative/basal-like breast carcinomas〔J〕.Breast Cancer Res，2007；9(5)：R65.

9 Kim JY，Kim WJ，Kim H，etal.The stimulation of CD147 induces MMP-9 expression through ERK and NF-kappaB in macrophages：implication for atherosclerosis〔J〕.Immune Netw，2009；9(3)：90-7.

10 Li Y，Shang P，Qian AR，etal.Inhibitory effects of antisense RNA of HAb18G/CD147 on invasion of hepatocellular carcinoma cells in vitro〔J〕.World J Gastroenterol，2003；9(10)：2174-7.

11 王善伟，陈丽荣.CD147、MMP-9和P-ERK在乳腺癌中的表达及临床意义〔J〕.实用肿瘤杂志，2007；22(2)：133-7.

12 黄晓曦，许东坡，王力群，等.MMP-2/MMP-9在乳腺癌组织中的表达及其生物学意义〔J〕.癌症，2001；20(11)：1251-5.

13 薛 松，李守新，吴正生，等.CD147、基质金属蛋白酶和转化生长因子β1在乳腺癌中的表达与肿瘤转移和预后及其相互间的关系〔J〕.中华病理学杂志，2009；38(8)：524-8.

〔2016-12-11修回〕

(编辑 袁左鸣/滕欣航)

赵 林(1980-)，女，副主任医师，主要从事乳腺癌综合治疗研究。

张玉扬(1980-)，男，副主任医师，主要从事肿瘤的综合治疗研究。

R73

A

1005-9202(2017)13-3257-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.13.061