膀胱尿路上皮癌中Klotho和Ki-67的表达及其相关性

陆浩源 白先忠 唐 勇

(广西医科大学附属肿瘤医院泌尿外科，广西 南宁 530001)

膀胱尿路上皮癌中Klotho和Ki-67的表达及其相关性

陆浩源 白先忠 唐 勇

(广西医科大学附属肿瘤医院泌尿外科，广西 南宁 530001)

目的 探讨Klotho和Ki-67在膀胱尿路上皮癌发生、发展过程中的作用及其相关性。方法 采用免疫组化SP 法检测Klotho和Ki-67在膀胱尿路上皮癌和正常膀胱组织的表达。结果 Klotho 在膀胱尿路上皮癌组织中的表达显著低于正常膀胱组织，在复发患者中的阳性表达率显著低于初发组，其表达与膀胱尿路上皮癌病理分级、临床分期以及预后有关(P<0.05)；其表达与膀胱尿路上皮癌病理分级、临床分期以及预后有关(P<0.05) 。Klotho 与Ki-67的表达呈负相关(rs=-0.308，P<0.05) 。结论 Klotho 和Ki-67可能在膀胱尿路上皮癌的发生、发展过程中起重要作用，联合检测二者有助于膀胱尿路上皮癌发病机制的进一步研究。

膀胱尿路上皮癌；Klotho；细胞核增殖相关抗原；免疫组织化学

膀胱尿路上皮癌是泌尿系统最常见的恶性肿瘤，其生物学行为复杂多变，易于种植、复发〔1〕。近年来Klotho基因作为一种抑癌基因被广泛关注，其异常表达可能参与肿瘤的发生、发展。Hori等〔2〕发现分泌型Klotho蛋白在膀胱癌的发生发展中可能发挥重要的作用。细胞核增殖相关抗原67(Ki-67)是在增殖细胞中表达的一种核抗原，其表达与膀胱尿路上皮癌临床分期和病理分级相关〔3〕。本研究拟探讨Klotho和Ki-67蛋白表达的意义及相关性。

1 材料与方法

1.1 临床资料与标本收集 广西医科大学附属肿瘤医院泌尿外科2012～2014年收治的经手术证实且获得随访的膀胱尿路上皮癌患者52例。入选患者均诊断明确，资料完整，其中男45例，女7例。年龄56～80岁，平均(64.6±13.5)岁，标本均经病理证实为膀胱尿路上皮癌。52例标本病理分级按WHO标准分为：低级别16例，高级别36例。临床分期按UICC-TNM标准分为：Tis～T1期20例，T2～T4期32例。初发23例，复发29例。另取10例正常膀胱黏膜标本作对照。

1.2 免疫组化检测Klotho和Ki-67的表达 Klotho鼠抗人单克隆抗体购自美国Abcam公司，Ki-67鼠抗人单克隆抗体购自北京中杉金桥生物技术有限公司，二抗和二氨基联苯胺(DAB)显色试剂均购自福建迈新生物技术开发公司。

1.3 结果判定 Klotho阳性表达产物呈黄色颗粒状，表达较强时呈棕黄色，定位于细胞质中。Ki-67阳性表达定位于细胞核，阳性表达表现为棕黄色颗粒染色。由2位病理医师采取双盲法观察免疫组化结果。Klotho和Ki-67阳性率的判定和计算方式按文献〔4，5〕进行。

1.4 统计学分析 计数资料采用χ2检验，各指标阳性表达相关性分析采用Spearman等级相关分析。

2 结 果

2.1 Ki-67和Klotho在膀胱尿路上皮癌及正常膀胱上皮中的表达 Klotho在膀胱尿路上皮癌组织中的阳性率(34.6%)明显低于正常膀胱组织(100%，P<0.01)。Ki-67在膀胱尿路上皮癌组织中的阳性率(75%)明显高于正常膀胱组织(10%，P<0.01)。见图1。

图1 膀胱尿路上皮癌组织中Klotho、Ki-67阳性表达(DAB)

2.2 Klotho和Ki-67表达与膀胱尿路上皮癌生物学行为的关系 Klotho的表达随癌细胞恶性程度及浸润程度增加有减弱的趋势(P<0.05)，而Ki-67的表达随癌细胞恶性程度及浸润程度增加有增强趋势(P<0.05)。Klotho的表达在初发组的阳性率明显高于复发组，而Ki-67的表达在初发组的阳性率明显低于复发组(P<0.01)。见表1。

2.3 膀胱尿路上皮癌中Klotho和Ki-67表达的相关性 在膀胱尿路上皮癌组织中Klotho、Ki-67共阳性12例，共阴性3例，仅Klotho阳性6例，仅Ki-67阳性31例，Klotho和Ki-67表达呈负相关(rs=-0.308，P<0.05)。

表1 Klotho和Ki-67阳性表达率与膀胱尿路上皮癌生物学行为的关系〔n(%)〕

3 讨 论

膀胱尿路上皮癌的发生发展是多种基因和各种因素共同参与的多阶段进程。在这个进程中，多种基因的表达和蛋白分子水平的变化共同推进了肿瘤细胞的侵袭和转移。

Klotho基因最早是作为衰老相关基因由日本学者Kuro-o等〔6〕于1997年发现的。近年Klotho基因作为一种抑癌基因被广泛关注，其与肿瘤的发生及发展有密切关系〔7〕。Klotho 基因多态性与膀胱尿路上皮癌的肿瘤易感性有关，其中rs1207568位点的GA 和 AA 基因型携带者可增加患膀胱尿路上皮癌的风险。而膀胱尿路上皮癌的发生发展与 rs9527025位点的 GC基因型呈正相关〔8〕。Klotho基因过表达能够降低机体DNA氧化损伤，从而影响肿瘤的发生、发展〔9〕。Zhu等〔10〕研究发现，肾癌组织中Klotho蛋白的表达与肿瘤的大小、临床分期呈负相关，Klotho蛋白表达与肾癌病人的生存率呈正相关。本研究提示Klotho蛋白下调可能促进肿瘤的发生及发展，检测其表达水平对于监测膀胱尿路上皮癌发生发展有一定指导意义。

Ki-67是一种仅在细胞核内表达，与细胞分裂增殖相关的蛋白；是目前检测肿瘤细胞增殖活性的指标之一。Ki-67在膀胱尿路上皮癌中的表达与肿瘤的浸润程度、病理分级呈正相关，这与我们先前的研究结果〔3〕一致，并在此基础上发现其与预后有关，提示Ki-67可能不仅与膀胱尿路上皮癌的发生发展有关，还与浸润、转移有关，这为今后评估膀胱尿路上皮癌的预后提供了依据。

研究表明，Klotho作为一个肿瘤抑制因子，能抑制多种肿瘤通路，从而抑制肿瘤细胞增殖、促进细胞凋亡〔11，12〕。本研究发现在膀胱尿路上皮癌组织中Klotho和Ki-67表达呈负相关，与Wolf等〔13〕在乳腺癌中的研究结果一致。这提示在膀胱尿路上皮癌中，Klotho蛋白通过抑制Ki-67蛋白的表达而发挥抗肿瘤作用，而Klotho蛋白表达下调可能会影响相关通路，从而导致膀胱尿路上皮癌的发生。

1 Jemal A，Siegel R，Xu JQ，etal.Cancer statistics，2010〔J〕.CA Cancer J Clin，2010；60(5)：277-300.

2 Hori S，Miyake M，Onishi S，etal.Clinical significance of α-and β-Klotho in urothelial carcinoma of the bladder〔J〕.Oncol Rep，2016;36(4)：2117-25.

3 杨 森，陆浩源，白先忠，等.TK1和Ki-67在膀胱尿路上皮癌中的表达及其相关性〔J〕.广西医学，2015;37(1)：18-20.

4 伍 季，苟 欣，李云祥.联合检测ΔNp63、Ki-67和VEGF与膀胱移行细胞癌预后的相关性研究〔J〕.重庆医学，2010;39(22)：3056-8.

5 成 慧，宋明芮，张晓云，等.子宫颈鳞状细胞癌中Klotho与Wnt10b的表达及其相关性〔J〕.临床与实验病理学杂志，2014;30(5)：498-500，505.

6 Kuro-o M，Matsumura Y，Aizawa H，etal.Mutation of the mouse klotho gene leads to a syndrome resembling ageing〔J〕.Nature，1997;390(6655)：45-51.

7 汤小伟，黄 曙，范志宁.Klotho基因与恶性肿瘤生物学行为关系的研究进展〔J〕.国际消化病杂志，2013;33(4)：220-3.

8 Pjmb EA,Adam MW.Genetic polymorphism of klotho gene and bladder cancer risk〔J〕.Folia Medica Lodziensia，2012;39(2)：189-205.

9 Arking E，Becker M，Yanek R，etal.KLOTHO allele status and the risk of early-onset occult coronary artery disease〔J〕.Am J Hum Genet，2003;72(5)：1154-61.

10 Zhu Yu，Xu Le，Zhang JP，etal.Klotho suppresses tumor progression via inhibiting PI3K/Akt/GSK3β/Snail signaling in renal cell carcinoma〔J〕.Cancer Sci，2013;104(6)：663-71.

11 Zhou XX，Wang X.Klotho：a novel biomarker for cancer〔J〕.J Cancer Res Clin Oncol，2015;141(6)：961-9.

12 Kim JH，Hwang KH，Lkhagvadorj S，etal.Klotho plays a critical role in clear cell renal cell carcinoma progression and clinical outcome〔J〕.Korean J Physiol Pharmacol，2016;20(3)：297-304.

13 Wolf I，Levanon-Cohen S，Bose S，etal.Klotho：a tumor suppressor and a modulator of the IGF-1 and FGF pathways in human breast cancer〔J〕.Oncogene，2008;27(56)：7094-105.

〔2016-12-15修回〕

(编辑 徐 杰)

Expression and correlation of Klotho and Ki-67 in bladder urothelial carcinoma

LU Hao-Yuan, BAI Xian-Zhong, TANG Yong.

Department of Urinary Surgery; Cancer Hospital Affiliated to Guangxi Medical University; Nanning 530021; Guangxi, China

Objective To study the expressions of Klotho and Ki-67 in bladder urothelial carcinoma and normal bladder tissue, and to explore their roles in the carcinogenesis and progression of bladder urothelial carcinoma.Methods The expressions of Klotho and Ki-67 were evaluated by immunohistochemical SP method staining in bladder urothelial carcinoma and normal bladder tissue. Results The expression of Klotho in bladder urothelial carcinoma was significantly lower than that in normal bladder tissue. The positive rate of Klotho in the recurred cases was lower than that of the primary cases. Klotho expression was associated with pathological grade, clinical stage and prognosis (P<0.05). Positive expression of Ki-67 was remarkable higher in bladder urothelial carcinoma than that in normal bladder tissue ,which was associated with pathological grade, clinical stage and prognosis (P<0.05).Expressions of Klotho and Ki-67 were negative relationship (rs=-0. 308，P<0.05).Conclusions The expressions of Klotho and Ki-67 may play a crucial role in the progress and metastasis of bladder urothelial carcinoma.Combined detection of Klotho with Ki-67 could provide further study of the pathogenesis of bladder urothelial carcinoma.

Bladder urothelial carcinoma; Klotho; Ki-67

国家自然科学基金项目(No.81560428)

唐 勇(1975-)，男，博士，主任医师，主要从事泌尿系肿瘤研究。

陆浩源(1976-)，男，硕士，副主任医师，主要从事泌尿系肿瘤研究。

R737.1

A

1005-9202(2017)13-3127-02；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.13.003