高效液相色谱法测定丹参片中丹参酮ⅡA含量的方法

褚晶晶

高效液相色谱法测定丹参片中丹参酮ⅡA含量的方法

褚晶晶

目的 观察采用高效液相色谱法对丹参片中的丹参酮ⅡA的含量进行测定的效果。方法 本研究检测供试品溶液以超声波提取法对丹参片进行制备, 对照品采用丹参酮ⅡA, 测定方法采用高效液相色谱法, 选择合适的色谱柱、流动相以及检测波长, 并控制适宜的流速以及进样量, 测定温度选择为室温。结果 在0.5126～4.8700 μg/ml范围内丹参酮ⅡA与峰面积具有良好的线性关系, 求的回归方程为Y=1425.3X+28.75, r=0.9996, n=5；平均回收率为99.63%, RSD值为1.46%(n=9)。结论 采用高效液相色谱法对丹参片中的丹参酮ⅡA的含量进行测定具有操作方法简便, 测定结果稳定的优势, 适用于丹参片中的丹参酮ⅡA的含量控制, 值得推广。

高效液相色谱法；丹参片；丹参酮ⅡA；含量测定

丹参片在2015年版《中国药典》中质量标准只有丹酚酸B的含量测定, 本文采用高效液相色谱法对丹参片中丹参酮ⅡA的含量测定方法进行了研究。

1 仪器与材料

本研究采用的高效液相色谱仪为美国waters E2695高效液相色谱仪。丹参片(批号分别为161011, 161012, 161013),丹参酮ⅡA对照品(中国药品生物制品检定所, 批号为0766-200201)。本研究所用甲醇均为色谱纯, 所用水为纯化水。

2 方法与结果

2. 1 色谱条件 选择规格为(4.6 mm×250 mm, 5 μm)的waters symmetry C18色谱柱, 以甲醇-水(80∶20)为流动相, 控制流速为1.0 ml/min, 选取270 nm为检测波长, 并控制适宜的冲柱比例以及进样量。

2. 2 溶液的制备 ①对照品溶液：称取20 mg丹参酮ⅡA对照品, 将其放于100 ml棕色量瓶中, 采用甲醇溶解后稀释至刻度。精密量取5 ml置于50 ml棕色量瓶中, 稀释至刻度即可。②供试品溶液：取10片丹参片, 称重后研细, 精密称取其中1.5 g, 放于25 ml量瓶中, 加入甲醇至刻度, 超声30 min, 过滤取续滤液即为供试品溶液［1］。③阴性样品溶液：取不含丹参酮ⅡA的辅料, 以制备供试品溶液的方法进行制备阴性样品溶液。

2. 3 专属性 精密量取20 μl上述3种溶液, 注入色谱仪。丹参酮ⅡA在设定的色谱条件下保留时间为12.8 min, 分离良好, 且无干扰。见图1。

图1 色谱图

2. 4 线性关系 分别准确吸取0.25、0.50、1.00、1.50、2.00 ml对照品溶液置于10 ml量瓶中, 并稀释至刻度, 按设定色谱条件进行进样, 每次进样20 μl, 测峰面积［2］。根据峰面积以及浓度求得回归方程为Y=1425.3X+28.75, r=0.9996, n=5, 在0.5126~4.8700 μg/ml范围内丹参酮ⅡA与峰面积具有良好的线性关系。

2. 5 精密度 取对照品溶液, 进样20 μl, 重复操作5次, 测峰面积。RSD值为1.03%(n=5), 其精密度良好。

2. 6 重复性 按照同一供试品溶液制作方法制作同一批次样品5份, 然后进行丹参酮ⅡA的含量测定。RSD值为1.55%(n=5), 其重现性良好。

2. 7 稳定性 取同批供试品, 分别在0、2、4、6、8 h测定丹参酮ⅡA峰面积。RSD值为1.74%(n=5), 表明在8 h内其稳定性良好。

2. 8 加样回收率试验 称取已知含量为0.550 mg/g的样品9份, 分别加入不同浓度丹参酮ⅡA对照品溶液, 按供试品方法制备供试品溶液后进样测峰面积, 计算回收率［3］。平均回收率为99.63%, RSD值为1.46%(n=9)。见表1。

2. 9 样品测定 取10片丹参片样品, 称定制备好供试品溶液后, 按照色谱条件对3个不同批次样品中丹参酮ⅡA的含量进行测定。丹参片中丹参酮ⅡA的平均含量分别为0.1590 mg/片, 0.1601 mg/片, 0.1679 mg/片。

表1 加样回收率试验结果

3 讨论

丹参片的主要药理功效为理气止痛以及活血化瘀, 其临床常用于心绞痛等疾病的治疗［4］。中药材丹参的化学成分主要由两部分组成, 分别为脂溶性成分以及水溶性成分。丹参酮ⅡA是中药材丹参中的主要脂溶性成分, 在正品中药材中,丹参酮ⅡA的含量应该是其中最高的。采用适当的方法对丹参片中的有效成分丹参酮ⅡA进行准确测定对有效控制药品的质量具有十分重要的意义［5］。

本研究主要探究了采用高效液相色谱法对丹参片中的丹参酮ⅡA的含量进行测定应用效果。研究结果表明：在0.5126～4.8700 μg/ml范围内丹参酮ⅡA与峰面积具有良好的线性关系, 求的回归方程为Y=1425.3X+28.75, r=0.9996, n=5；平均回收率为99.63%, RSD值为1.46%(n=9)。这就说明采用高效液相色谱法对丹参片中的丹参酮ⅡA含量进行测定具有线性关系好, 精密度好、重复性强以及稳定性好的优势。采用高效液相进行含量测定时, 其流动相选择一般为甲醇-水,有相关研究表明, 同时采用甲醇-水, 乙腈-甲醇-水以及甲醇-0.2%磷酸作为流动相进行洗脱时, 甲醇-水的保留时间以及峰型是最为理想的［6］。因此在本研究中即采用了甲醇-水作为流动相。由于在270 nm处丹参酮ⅡA的吸收峰最大, 因此, 在本研究中选取270 nm作为色谱检测波长。有相关研究表明在分别采用超声提取、索氏提取以及加热回流提取三种提取方法时, 以甲醇作为提取溶剂进行超声提取的提取率是最高的［7］。另外, 由于丹参酮ⅡA在热环境下不稳定易发生降解, 因此, 应注意控制提取所需的温度以及时间,以避免其发生降解［8-10］。在本研究中作者选取甲醇超声提取法, 并设定提取时间为30 min, 有效避免了丹参酮ⅡA的降解现象, 保证了研究结果的准确可靠性。

综上所述, 采用高效液相色谱法对丹参片中丹参酮ⅡA的含量进行测定具有操作方法简便, 测定结果稳定的优势,适用于丹参片中的丹参酮ⅡA的含量控制, 值得推广应用。

［1］ 潘磊. 高效液相色谱法测定复方丹参片中有效成分丹参酮ⅡA的含量. 现代诊断与治疗, 2012, 23(6):693-694.

［2］ 于百青, 杨敏, 孙鹏云. 高效液相色谱法测定心舒丸中丹参酮ⅡA含量. 中国药业, 2012, 21(13):36-37.

［3］ 杨新. 用高效液相色谱法测定丹参药材中丹参酮ⅡA含量的最优测定条件分析. 当代医药论丛, 2014(1):156-157.

［4］ 刘翔, 陈向明. 高效液相色谱法测定丹参饮片中丹参酮ⅡA的含量. 福建分析测试, 2015(1):36-38.

［5］ 吴德明, 董茂臣, 唐文君. 高效液相色谱法测定乙肝扶正胶囊中丹参酮ⅡA的含量. 黑龙江中医药, 2012, 41(2):49-50.

［6］ 孟建升, 杨文文. 高效液相色谱法测定五明丹胶囊中丹参酮ⅡA含量. 中国药业, 2012, 21(19):40-41.

［7］ 武晓红, 敬永生. 高效液相色谱法测定乙肝扶正胶囊中丹参酮ⅡA的含量. 河南大学学报(医学版), 2013(3):187-189.

［8］ 钱之光. 高效液相色谱法检测不同产地的丹参中丹参酮ⅡA的含量. 临床和实验医学杂志, 2013, 12(8):591-592.

［9］ 刘梅, 夏鑫华. 丹参酮ⅡA的化学稳定性研究. 中药材, 2010, 33(4):606-609.

［10］ 赵阳, 尹兴斌, 付京, 等. 丹参醇提液中丹参酮ⅡA热稳定性研究及其有效期推算. 现代中药研究与实践, 2016(1):64-66.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2017.12.112

2017-04-17］

123000 阜新市药品检验所业务办公室