常山县不同区域胡柚果实生长过程中黄酮含量的监测

2017-07-18李小梅郑美瑜汪丽霞徐小忠陆胜民

浙江柑橘 2017年2期

李小梅郑美瑜汪丽霞徐小忠陆胜民

（1.浙江省农业科学院食品科学研究所/浙江省果蔬保鲜与加工技术研究重点实验室杭州310021；2.南京农业大学食品科技学院；3.浙江柚都生物科技有限公司）

李小梅1，2郑美瑜1汪丽霞3徐小忠3陆胜民1

常山胡柚的植物学名为Citrus Paradisi cv.Changshanhuyou，起源于常山县青石乡胡家村，又称“仙柚”、“孝子柚”、“长寿柚”，是优良的柚子与其它柑橘自然杂交品种[1]。常山胡柚因其具有耐瘠、耐寒、耐贮等优良品质，被誉为“中华第一杂柑”，至今已有100多年的栽培历史[2]。其果实富含多种维生素和人体所必须的18种氨基酸以及磷、钾、铁、钙等微量元素，营养价值很高[3]，并具有稳定血糖、排毒养颜、生津止渴、解酒醒脑、消食利尿、镇咳化痰、清热解毒、延年益寿等诸多功效[4]。此外，胡柚中还含有多种有益于健康的功能性成分，主要有黄酮类化合物、柠檬苦素类化合物和类胡萝卜素等[5]，是一种良好的纯天然保健食品，其中黄酮类化合物是含量最丰富的一类活性物质，大量地存在于胡柚幼果和成熟果皮中，代表性的为柚皮苷和新橙皮苷[6,7]。

本文对常山县产区不同区域的胡柚果实在生长发育过程中的主要黄酮类成分含量进行测定，以确定胡柚成熟过程中黄酮类物质的变化规律，为合理疏果时间和提取原料的选择提供参考。

1 材料与方法

1.1 实验材料

胡柚，采摘区域为衢州市常山县15个村（蒋莲铺村（十八里）、小白石村、红旗村、龙绕、同弓山、太公山（赵）、太公山、新品种、青石、阁底、五里、大桥、东案、老坞、丁家坞），分别于2015年6月上旬、6月下旬、7月上旬、7月下旬、8月上旬、8月下旬、9月、10月采摘，共8个批次。所有胡柚果实均切成小块，自然风干，干燥后粉碎，过40目筛。

1.2 试剂与仪器

甲醇，冰醋酸，均为分析纯；乙腈，色谱纯；芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷标准品购自上海士锋生物科技有限公司。

BS200S-WE1电子天平，余姚金诺电子天平仪器有限公司；BJ-200型高速多功能粉碎机，上海标本模型厂；LXJ－HB 飞鸽离心机，上海安亭科学仪器厂；KQ-500DB 型数控超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司；U3000高效液相分析仪，美国赛默飞世尔科技有限公司。

1.3 实验方法

1.3.1HPLC条件[8]。色谱柱：ODS C18柱（SunFire5um，4.6mm×250mm）；流动相：水和乙腈，采用梯度洗脱，洗脱梯度为：0～15min，乙腈为20%；15～35min，乙腈为20%～60%；35～40min，乙腈为60%～100%；42～45min，乙腈为100%～20%；45～50min，乙腈为20%。流速：1mL/min；柱温：25℃；检测波长：280nm；进样量：10μL。

1.3.2 芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷混合标准品溶液的配制。分别准确称取标准品芸香柚皮苷5mg、柚皮苷5mg、橙皮苷5mg和新橙皮苷10mg，用甲醇超声波辅助溶解于25mL容量瓶中，定容，制得混合标准溶液贮备液。

1.3.3 芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷标准曲线的绘制。用移液枪分别移取0mL、2.0mL、4.0mL、6.0mL、8.0mL、10.0mL的上述混合标准溶液贮备液于6个10mL的容量瓶中，分别用甲醇定容至刻度线，即得6个浓度的混合标准溶液。用0.45μm微孔滤膜过滤，进行HPLC分析。

1.3.4 胡柚中黄酮的提取。准确称取各个区域每个批次的干燥样品各1g于锥形瓶中，加入15mL甲醇，在超声功率为500W、超声温度为45℃的条件下提取30min，提取后离心5min，倾出上清液，滤渣再超声两次（每次加入15mL甲醇，超声提取30min，离心，倾出上清液），合并三次提取液，并定容至50mL容量瓶中[9]。用0.45μm微孔滤膜过滤，进行HPLC分析。重复三次，取平均值。

图1 芸香柚皮苷标准曲线

图2 柚皮苷标准曲线

图3 橙皮苷标准曲线

图4 新橙皮苷标准曲线

2 结果与讨论

2.1 标准曲线的绘制

根据1.3.1色谱条件，测定不同浓度下的峰面积，以峰面积为纵坐标，标准品溶液的质量浓度为横坐标，绘制标准曲线(见图1～4)。

2.2 不同区域胡柚生长过程中芸香柚皮苷的含量分析

根据1.3.1的实验方法，对常山县15个村6～10月份的胡柚样品中的芸香柚皮苷含量进行了监测，结果见表1。

由表1可知，常山县15个村的胡柚中芸香柚皮苷的含量普遍较低，从平均含量来看，其中太公山、丁家坞、同弓山、红旗村和青石的胡柚中芸香柚皮苷的含量相对较高，而五里、东案、太公山（赵）和龙绕的胡柚中含量较低。在6月上旬到7月上旬胡柚中芸香柚皮苷的含量较高，而在7月下旬急剧下降，8月上旬到10月随着胡柚的逐渐成熟芸香柚皮苷的含量缓慢下降，其中10个村的胡柚中芸香柚皮苷的含量均在6月下旬达到最高。常山县15个村6～10月份的胡柚样品中，青石村6月下旬的胡柚中芸香柚皮苷的含量最高为26.10mg/g，其次是龙绕村6月下旬的胡柚，其芸香柚皮苷的含量为25.27mg/ g。所以应采摘青石和龙绕6月下旬的胡柚进行芸香柚皮苷的研究。

表1 不同区域胡柚生长过程中芸香柚皮苷的含量（mg/g）

2.3 不同区域胡柚生长过程中柚皮苷的含量分析

根据1.3.1的实验方法，对常山县15个村6～10月份的胡柚样品中的柚皮苷含量进行了监测，结果见表2。

由表2可知，常山县15个村的胡柚中柚皮苷的含量均较高，从平均含量来看，其中新品种、红旗村、同弓山、太公山和小白石村的胡柚中柚皮苷的含量相对较高，而蒋莲铺村（十八里）、阁底、太公山（赵）和龙绕的胡柚中含量较低。从6月上旬到10月，随着胡柚的成熟柚皮苷的含量逐渐下降，其中11个村的胡柚中柚皮苷的含量均在6月上旬最高。常山县15个村6～10月份的胡柚样品中，老坞村6月上旬的胡柚中柚皮苷含量最高为144.40mg/g，其次是东案村6月上旬的胡柚，其柚皮苷含量为141.05mg/g。所以应采摘老坞和东案6月上旬的胡柚进行柚皮苷的研究。

表2 不同区域胡柚生长过程中柚皮苷的含量（mg/g）

2.4 不同区域胡柚生长过程中橙皮苷的含量分析

根据1.3.1的实验方法，对常山县15十五个村6～10月份的胡柚样品中的橙皮苷含量进行了监测，结果见表3。

由表3可知，常山县15个村的胡柚中的橙皮苷的含量普遍较低，从平均含量来看，其中太公山（赵）、太公山、同弓山、红旗村和大桥的胡柚中橙皮苷的含量相对较高，而五里、青石、老坞、阁底和龙绕的胡柚中含量较低。在6月上旬和6月下旬，胡柚中橙皮苷的含量较高，而在7月上旬快速下降，从7月下旬到10月随着胡柚的逐渐成熟橙皮苷的含量缓慢下降，其中13个村的胡柚中橙皮苷的含量均在6月上旬最高。常山县15个村6～10月份的胡柚样品中，同弓山村6月上旬的胡柚中橙皮苷含量最高为32.11mg/g，其次是太公山（赵）六月下旬的胡柚，其橙皮苷含量为32.04mg/g。所以应采摘同弓山6月上旬的胡柚或太公山（赵）6月下旬的胡柚进行橙皮苷的研究。

表3 不同区域胡柚生长过程中橙皮苷的含量（mg/g）

2.5 不同区域胡柚生长过程中新橙皮苷的含量分析

根据1.3.1的实验方法，对常山县15个村6～10月份的胡柚样品中的新橙皮苷含量进行了监测，结果见表4。

由表4可知，常山县15个村的胡柚中的新橙皮苷的含量普遍较高，从平均含量来看，其中红旗村、同弓山、小白石村、太公山（赵）和新品种的胡柚中新橙皮苷的含量相对较高，而青石、老坞、阁底和龙绕的胡柚中含量较低。15个村的胡柚中新橙皮苷的含量都在6月上旬为最大值，且几乎为6月下旬的两倍，从7月上旬到10月随着胡柚的逐渐成熟新橙皮苷的含量缓慢下降。常山县15个村6～10月份的胡柚样品中，太公山（赵）6月上旬的胡柚中新橙皮苷含量最高为158.82mg/ g，其次是太公山6月上旬的胡柚，其新橙皮苷含量为149.94mg/g。所以应采摘太公山（赵）和太公山6月上旬的胡柚进行新橙皮苷的研究。

2.6 胡柚生长过程中四种黄酮含量的变化

由图5可知，不同生长时期常山胡柚中四种黄酮的含量随着果实的成熟而逐渐下降。在6月上旬时柚皮苷和新橙皮苷的含量均非常丰富，高达116.88mg/g和121.91mg/ g。从6月上旬到7月下旬柚皮苷和新橙皮苷的含量下降明显，7月下旬到8月下旬，则趋于稳定，但仍有缓慢降低的趋势，在9月份，两种黄酮的含量均有所增长。而芸香柚皮苷的含量在6月下旬达到最大值，之后也一直缓慢下降，橙皮苷的含量则一直保持缓慢下降。所以应当采用6月上旬胡柚进行黄酮的提取制备。

表4 不同区域胡柚生长过程中新橙皮苷的含量（mg/g）

图5 胡柚生长过程中四种黄酮含量的变化

3 结论

本文监测了常山县15个主栽村的胡柚在生长发育过程中主要黄酮类成分含量的变化规律，得到如下结论。

3.1 四种黄酮中，芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷含量最高的分别是太公山、新品种、太公山（赵）和红旗村的胡柚，含量分别为11.17mg/g、65.76mg/g、10.51mg/g和49.00mg/ g；龙绕胡柚中的芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷含量均为最低，分别为7.57mg/g、40.93mg/g、6.56mg/g和31.17mg/g。

3.26 ～10月份的胡柚中四种黄酮总含量大小按时间排序依次为：6月上旬＞6月下旬＞7月上旬＞9月＞7月下旬＞8月上旬＞8月下旬＞10月。

3.3 常山胡柚中的黄酮主要为柚皮苷和新橙皮苷，平均含量分别为54.51mg/g和39.61mg/g，而芸香柚皮苷和橙皮苷的含量较少，平均含量只有8.97mg/g和7.90mg/g。

[1]陆胜民，张俊，郑美瑜等.常山胡柚营养成分及其保健功能研究进展[J].浙江柑橘，2015，32(1): 2～7

[2]赵雪梅.胡柚皮化学成分及其活性研究[D].杭州，浙江大学博士学位论文，2003

[3]赵雪梅，叶幸乾，席屿芳等.胡柚皮中的化学成分研究[J]，中国食品学报，2004，4(2):239～241

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[5]裴凌鹏，惠伯棣，金宗濂，等.黄酮类化合物的生理活性及其制备技术研究进展[J].食品科学，2004，25(2):203～207

[6]杨宏亮，田珩，李沛波等.柚皮苷及柚皮素的生物活性研究[J].中药材，2007，30(6):752～754

[7]杨亚妮，苏智先.中国名柚资源与品种现状研究[J].四川师范学院学报(自然科学版)，2002，23(2): 1683～1691

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10.13906/j.cnki.zjgj.1009-0584.2017.02.533