儿童哮喘急性发作时人鼻病毒感染率的临床刍议

杨祎++徐云芳++张春生

[摘要] 探讨人鼻病毒所致哮喘的发病机制，为寻找该病的病因及发病机制提供依据。 方法 通过便利抽样法选取2015年10月—2016年4月于溧阳市人民医院儿科住院治疗的哮喘急性发作期患儿92例作为试验组，同时选取同期健康儿童30名作为对照组。采用酶联免疫法检测血清中的HRV感染情况。以HRV检测结果将试验组分为HRV阳性组和HRV阴性组。结果 试验组中HRV阳性者为64例，阳性率为69.57%；HRV阴性者为28例（30.43%）。对照组未检测出HRV阳性者，试验组阳性率显著高于对照组（P<0.01）。试验组HRV阳性的血白细胞计数（15.78±3.89）109/L、中性粒细胞比例（0.98±0.01）、CRP浓度（14.32±2.11）mg/L和平均住院天数（9.54±3.20）d与HRV阴性[（9.88±2.67）×109/L、（0.52±0.22）、（9.56±3.23）mg/L、（6.21±2.40）d]相比后，差异有统计学意义（P<0.01）。结论 哮喘发作期患儿人鼻病毒感染率明显高于正常儿童，提示HRV感染与哮喘的急性发作有关。

[关键词] 儿童哮喘；人鼻病毒（HRV）；感染；酶联免疫法

[中图分类号] R725.6 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2017）05（b）-0017-03

[Abstract] Objective To discuss the pathogenesis of asthma caused by the human rhinovirus and provide basis for the cause and pathogenesis. Methods 92 cases of children during the acute asthma attack period from October 2015 to April 2016 were selected as the test group， while 30 cases of healthy children at the same period were selected as the control group， and the serum HRV infection situation was tested by the enzyme-linked immunosorbent assay， and the test group were divided into the HRV positive group and HRV negative group according to the HRV test results. Results In the test group， there were 64 HRV positive cases， and the positive rate was 69.57%， and there were 28 HRV negative cases， and the negative rate was 30.43%， and the HRV positive patients were not tested in the control group， and the positive rate in the test group was obviously higher than that in the control group（P<0.01）， and the differences in the blood white cell count， neutrophil ratio， CRP concentration and average length of stay between the HRV positive patients and the HRV negative patients were statistically significant[（15.78±3.89）×109/L， （0.98±0.01）， （14.32±2.11）mg/L， （9.54±3.20）d vs （9.88±2.67）×109/L， （0.52±0.22）， （9.56±3.23）mg/L， （6.21±2.40）d]. Conclusion The human rhinovirus infection rate of children at the acute asthma attack is obviously higher than that of normal children， which reminds that the HRV infection is related to the acute attack of asthma.

[Key words] Asthma in children； HRV； Infection； Enzyme-linked immunosorbent assay

隨着社会的高速发展，人类的生活模式逐渐改变，全世界范围内哮喘患者逐年增多。支气管哮喘是气道的一种慢性变态反应性炎症性疾病，由多种诱发因素（如：感染，过敏源等）导致肥大细胞，嗜酸细胞，淋巴细胞等多种炎症细胞介导的气道炎症，以反复喘息、咳嗽、气促，胸闷为主要临床表现。由于儿童哮喘发病机制复杂，呼吸道病毒诱导哮喘发作可能有多种不同方式，目前尚不能完全明确，当前尚无有效的治疗和预防人鼻病毒的药物，最近成功开发α-ketoamide蛋白酶抑制剂可能对人鼻病毒有一定的作用[1]，该文通过酶联免疫分析（ELISA）法检测当地哮喘患儿血清中HRV（抗原）的感染情况，为该疾病寻找新型有效的治疗方法提供依据，该研究主要对该院2015年10月—2016年4月期间的122例儿童进行探析，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

该研究便利抽取的儿童哮喘急性发作期患儿和健康体检儿童共122例均为该院收治，将122例患儿按照计算机表法分为试验组（n=90）和对照组（n=32），试验组中男46例，女44例，年龄范围均在8个月～8岁之间，年龄跨度经计算后为（5.2±1.5）岁；对照组中男46例，女44例，年龄范围均在9个月～7岁之间，年龄跨度经计算后为（5.4±1.3）岁。统计工具对两组受检儿童的一般资料进行检验，差异无统计学意义（P>0.05），可比性显著。

方法与流程

1.2 标本采集

两组受检儿童入院后均接受标本采集，在凌晨选取静脉血，血标本量为1 mL，共计3份，而后将其进行静置凝固，时间为15 min，保存条件为常温。静置后将其进行离心操作，时间为20 min，其速度参数为3 000 r/min，待上述操作完成后选取上层清液，最后将其放置在适宜温度下，即-70℃。

1.3 鼻病毒检测流程

①编号：将选取后的上层清液样本进行数字编号，确保与微孔对应。而后设置阴性与阳性对照，分别为2孔，同时选择1孔作为空白对照。②加样。在上述3组对照样品中分别将阴性对照、阳性对照加入阴性、阳性对照，剂量分别为50 μL。随后将稀释好的40 μL液体加入待检测样品孔中，在此期间，还需将10 μL液体加入待测样品中。上述操作全部完成后进行缓慢摇晃，使其处于混匀状态。③温育：待封板膜完成封板，将其放置在适宜温度下静置，即37℃温育箱，时间为30 min。④配液：将600 m；蒸馏水加入30倍浓缩洗涤液，进行备用。⑤洗涤：事先将封板膜揭开，将上层清液去除后甩干板，随后将洗涤液加入至各个孔中，静置时间为30 s，而后将洗涤液去除，将上述操作进行反复重复，共计5次，最后拍干板。⑥加酶：将50 μL酶标试剂加入各个孔中，而空白孔无需加入该试剂。⑦温育和洗涤操作同与③相同。⑧显色：将50 μL显色剂A分别加入至各个孔中，而后进行晃动让其混匀，待完成后将其放置在适宜温度下保存，即：37℃温育箱中避光显色，时间为15 min。⑨终止：将50 μL终止液分别加入至各个孔中，进行终止反应。⑩测定：终止液加入时间在15 min内，测定各孔，利用酶标仪方法进行，调零以空白孔为主，最后对各孔吸光度（OD 值）进行测量，使用450 nm 波长进行即可。

结果判断：阴性判定依据：若样品吸光度参数在临界值以下，提示为鼻病毒（RhV）阴性。阳性判定依据：若样品吸光度参数在临界值及以上，提示为鼻病毒（RhV）阳性。

1.4 指标观察

利用常规检测仪器对两组受检人员的血白细胞计数、中性粒细胞比例、CRP进行检测，并将研究结果予以详细记录。

1.5 统计方法

该研究中的相关数据均通过SPSS 17.0统计学软件予以整理和计算，数据通过软件计算后，计数资料以[n（%）]表示，行χ2检验，计量资料以（x±s）表示，行t检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 试验组与对照组HRV的感染情况

试验组共92例患儿，HRV阳性者为64例，阳性率为69.57%，HRV阴性者为28例（30.43%）。对照组未检测出HRV阳性者，两组患儿的HRV感染情况比较，差异有统计学意义（χ2=43.898，P=0.000<0.05），见表1。

2.2 试验组HRV阳性和HRV阴性的血白细胞计数、中性粒细胞比例、CRP、平均住院天数情况比较

试验组HRV阳性和HRV阴性的血白细胞计数、中性粒细胞比例和平均住院天数比较后差异有统计学意义（P<0.05），见表2。

3 讨论

支气管哮喘是气道的一种慢性变态反应性炎症性疾病，由肥大细胞，嗜酸细胞，淋巴细胞等多种炎症细胞介导的气道炎症，以反复喘息、咳嗽、气促，胸闷为主要临床表现[2]。最近有研究表明HRV与儿童病毒诱发的喘息密切相关，占儿童及青少年病毒诱发哮喘的75%～80%，研究鼻病毒感染致儿童喘息的发作和/或哮喘加重仍是宿主-病原体相互作用研究的重要领域[3]。该研究结果显示：试验组HRV阳性和HRV阴性的血白细胞计数，中性粒细胞比例，C-反应蛋白（C-Reactive protein， CRP）水平，HRV阳性患儿在这些指标中明显高于HRV阴性患儿[4]。这说明HRV阳性患儿更容易导致其他疾病的发生，平均住院天数也比HRV阴性患儿高[5-7]。该实验初步验证了HRV与儿童哮喘发作的密切关系，提示了HRV与儿童哮喘的相关性，同时为HRV抗原浓度的分级提供资料，在今后研究治疗该疾病的过程中，如何以HRV为儿童哮喘的预防和治疗研究新型药品，或许是治疗方向之一[8-9]。这一研究结果与孙秋凤等人[10]的研究结果相似，在孙秋凤等人的研究中，对153例患儿的标本进行分析，结果表明：呼吸道病毒检出情况：1 933份标本中共检出728株病毒株（37.66%），其中HRV214例（11.07%）、RSV210例（10.86%）、HBoV 146例（7.55%）、 Pinf-396例（20.49%）、Pinf-124例（6.41%）等。35例HRV感染为混合感染（35/214，16.36%），以HRV混合HBoV多见（15/35，42.86%），由此可见，哮喘2岁以下儿童多见；HRV感染可引起哮喘急性发作，且与过敏性体质相关，该研究结果显示：验组中HRV阳性者为64例，阳性率为69.57%；HRV阴性者为28例（30.43%）。对照组未检测出HRV阳性者，试验组阳性率显著高于对照组（P<0.01）。试验组HRV阳性的血白细胞计数（15.78±3.89）×109/L、中性粒细胞比例（0.98±0.01）、CRP浓度（14.32±2.11）mg/L和平均住院天数（9.54±3.20）d与HRV阴性[（9.88±2.67）×109/L、（0.52±0.22）、（9.56±3.23）mg/L、（6.21±2.40）d]相比后差异有统计学意义（P<0.05）。这一研究结果与上述学者的报道類似。

4 結论与展望

哮喘发作期患儿人鼻病毒感染率明显高于正常儿童，HRV感染对患儿的临床症状及各项观测指标有着重要的影响，延长住院时间和加重临床哮喘症状的发生，这可能与人鼻病毒感染后的患儿更容易病毒感染之后引起的一系列的炎症反应综合征有很大的关系，病毒感染之后可以适当的引起白细胞的升高。目前国内外的调查研究较为地区化，有一定的局限性，HRV阳性率的不同可能与检测方法，人类种群，气候条件等因素有关，同时对HRV抗原定量检测浓度的分级国内尚无统一标准，后续的研究需要扩大样本量使数据更具说服力。

[参考文献]

[1] 靳丹丹，周卫芳，林强，等.苏州地区2013～2014年儿童哮喘急性发作诱因分析[J].右江医学，2015，43（5）：589-592.

[2] 庞英.鼻病毒感染与儿童哮喘急性加重机制[J].国际儿科学杂志，2010，37（6）：577-579.

[3] 江文辉，赵明奇，陈羿，等.鼻病毒感染诱发儿童哮喘急性发作时血清粘附分子水平及意义[J].中国儿童保健杂志，2012， 20（1）：82-83.

[4] 王美怡.人类鼻病毒感染与哮喘研究进展[J].国际儿科学杂志，2011，38（3）：232-235.

[5] 杨祎.氯雷他定（开瑞坦）在人鼻病毒感染致儿童哮喘急性发作的临床观察[J].中国保健营养，2016，26（19）：99.

[6] 梁芳芳，雷建存，王云云，等.PM2.5浓度与儿童哮喘急性发作相关性的Meta分析[J].中华实用儿科临床杂志，2016，31（9）：687-691.

[7] 丁蓉，朱群，陈建斌，等.儿童下呼吸道感染与哮喘加重的相关性研究[J].中国医学前沿杂志：电子版，2014（12）：80-83.

[8] 江文辉，陈羿，吕淑泓，等.鼻病毒感染与儿童哮喘急性发作关系的临床研究[C].//中华医学会第十一次全国呼吸病学术会议.长春：中华医学会，中华医学会呼吸病分会，2010：483.

[9] 人莹禹.重庆市儿童哮喘急性加重309例临床分析[D].重庆：重庆医科大学，2011.

[10] 孙秋凤.苏州地区呼吸道感染和哮喘儿童中鼻病毒感染的研究[D].苏州：苏州大学，2014.

（收稿日期：2017-02-15）