肝郁调经膏质量标准的改进

刘丙艳+郑越中+隋馨

摘要：目的 建立并提高肝郁调经膏质量标准。方法 采用TLC法对白芍、牡丹皮进行定性鉴别；采用HPLC法测定白芍中芍药苷的含量。结果 白芍、牡丹皮薄层色谱斑点清晰、重现性好、阴性无干扰。白芍中芍药苷的含量测定方法专属性良好，阴性无干扰。结论 建立的质量标准专属性强、方法重复性好，可作为改进肝郁调经膏质量控制标准。

关键词：肝郁调经膏；薄层色谱；HPLC

中图分类号：R283 文献标识码：A 文章编号：1006-1959（2017）13-0125-03

肝郁調经膏是卫生部《中药成方》收载的品种，由白芍、佛手、特丹皮等十二味药材组成，具有疏肝解郁，清肝泻火、养血调经功效，主治肝郁所致的月经失调、痛经、乳房胀痛、不孕等症[1-2]。原质量标准无鉴别、含量测定鉴别方法。为提高产品质量，本文采用TLC分别对肝郁调经膏中的白芍、牡丹皮进行定性鉴别，采用HPLC法测定肝郁调经膏中芍药苷的含量。对肝郁调经膏进行全面的质量标准研究，为控制药品质量，保证药品安全提供科学依据。

1 材料与方法

Waters e2695高效液相色谱仪（美国）；Waters 2998紫外检测器（美国）；AE240型电子天平（北京赛多斯仪器有限公司）；JBT/C-YCL400T/2P（C）超声波清洗机（济宁金百特电子有限责任公司）瑞士卡玛Linomat5半自动点样仪；芍药苷对照品（批号：111736-201535），丹皮酚对照品（批号：110708-201506），均购自中国药品生物制品检定所。肝郁调经膏（广西华天宝药业有限公司批号：141102、150301、151203）

2 方法与结果

2.1 TLC鉴别

2.1.1白芍 取本品10 g，加乙醇50 ml，经过超声波20 min左右的处理，通过容器滤净、蒸干，而将滤净之后存在的渣滓进行溶解使之能够通过其他液体（正丁醇）进行提取，并将提取液分两次进行洗涤，再采用正丁醇蒸干。如果蒸干后存在渣滓，那么则要加入乙醇1 ml进行溶解，以此才能作为试剂溶液进行使用。同时，用芍药苷作为对照品，在其中计入乙醇溶液，以此作为对照品的溶液所应用。在照薄层色谱法试验过程中，分别采取上述两种溶液制剂5 μl，同时采取三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（40∶5∶10∶0.2）为展开剂，喷以5%香草醛硫酸溶液，在105 ℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点（见图1）。

2.1.2牡丹皮 取本品5 g，加乙醚10 ml，研匀，加石油醚（30～60）40 ml，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加丙酮2 ml使溶解，作为供试品溶液。另取丹皮酚对照品，加丙酮制成每1 ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。。照薄层色谱法试验，吸取上述述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯（20∶1）为展开剂，喷以盐酸酸性5%三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点（见图2）。

2.2含量测定

2.2.1色谱条件 色谱柱：Agilent Extend C18；（4.6mm×250mm，5 μm）；流动相：甲醇-醋酸-水（35：4：61）；检验波长：230 nm；流速：1.0 ml/min；进样量20 μl；柱温：30 ℃。

2.2.2供试品溶液的制备 取本品1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇10 ml，密塞，称定重量，超声处理[3]（功率2500 W，频率50 kHz）30min，放冷，再称定重量，用70%乙醇[4]补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。进样前经0.45μm微孔滤膜过滤。

2.2.3对照品溶液的制备 取芍药苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 ml含35 μg的对照品溶液，即得。进样前经0.45 μm微孔滤膜过滤。

2.2.4阴性样品溶液 在研究中根据所选定处方的比例对白芍阴性样品进行制作。在本文研究中以上述“溶液制备”中的程序以及溶液作为试剂，选取20μl作为实验溶液。按照上述色谱条件进样，记录色谱图，见图3，阴性样品不干扰芍药苷的测定，芍药苷与其它成分或杂质的分离度大于1.5，阴性供试品溶液在与对照品峰相应处未出现色谱峰。

2.2.5线性关系考察 精密吸取对照品溶液1、2、3、5、7、9 ml，分别置25 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，分别进样20 μl，按上述色谱条件测定峰面积，以进样量（μg）为横坐标，以峰面积为纵坐标，进行线性回归，芍药苷在1.402～12.614 μg内线性关系良好，回归方程为Y=15014X-610.08，r=0.9999。

2.2.6精密度试验 精密吸取上述对照品溶液20 μl，按“2.2.1”色谱条件连续进样6次，记录峰面积，其峰面积RSD为0.39%。

2.2.7稳定性试验 取供试品溶液20 μl（批号：091008），分别在0，4，8，12，24 h依次进样，测定其峰面积，结果芍药苷峰面积的RSD为0.47%。表明供试品溶液在24 h稳定。

2.2.8重复性试验 取批号为141102的样品6份，按"2.3"项下方法制备供试品溶液，测定，计算含量，结果芍药苷平均含量为0.146 mg/g，RSD为0.95%，表明该方法的重复性良好。

2.2.9加样回收率试验 分别精密称取0.5 g含芍药苷0.146 mg/g的供试品6份，分别精密加入芍药苷对照品溶液2 ml，按“2.2.2”项下方法制备制备供试品溶液，测得芍药苷含量，计算回收率，平均回收率为100.8%，RSD=1.22%。

2.2.10样品含量测定 精密吸取芍药苷对照品溶液与供试品溶液（批号：141102、150301、151203）20μl，按上述色谱条件测定，记录峰面积，以外标法计算样品中芍药苷含量分别为0.146、0.149、0.157 mg/g。

3 讨论

中成药制剂组成多复杂，每种药均发挥着不可替代的作用，对其建立专属性强的鉴别具有重要的意义[5-6]。本研究在原有质量标中增加白芍、牡丹皮的薄层鉴别，白芍具有养血调经，敛阴止汗，柔肝止痛，平肝抑阳的功效，故试验以白芍中芍药苷作为含量测定方法的研究对象。

参考文献：

[1]刘丙艳，郑越中.肝郁调经膏质量标准研究[J].医药卫生：文摘版，2016（8）：00224-00224.

[2]孙宏博.改进调经祛斑胶囊质量标准的研究[J].中国科技博览，2013（17）：230-230.

[3]陈繁华.补肾养阴降糖丸质量标准研究[J].中国药师，2014， 17（8）：1297-1230.

[4]卢昭延.调经抑乳汤治疗肝郁型高泌乳素血症的临床研究[D].广州中医药大学，2012.

[5]葛静，闫颖.《傅青主女科》运用白芍调经浅析[J].吉林中医药，2011，31（5）：457-458.

编辑/成森