霉变饲料中添加酯化葡甘露聚糖对肉鸡肝脏霉菌毒素含量和免疫功能的影响

孟凡生，朱风华，陈甫，巩青军，常顺华，朱连勤*

（1.临沂大学生命科学学院，山东临沂276005；2.青岛农业大学动物科技学院，山东青岛266109）

霉变饲料中添加酯化葡甘露聚糖对肉鸡肝脏霉菌毒素含量和免疫功能的影响

孟凡生1，朱风华2，陈甫2，巩青军2，常顺华2，朱连勤2*

（1.临沂大学生命科学学院，山东临沂276005；2.青岛农业大学动物科技学院，山东青岛266109）

本试验选取108羽1日龄AA肉鸡，随机分为6组，每组设3个重复。第1组饲喂常规饲料；第2组饲喂霉变饲料；第3～5组分别饲喂添加0.05%、0.1%和0.2%酯化葡甘露聚糖（EGM）的霉变饲料；第6组饲喂添加0.1%霉可吸的霉变饲料，研究霉变饲料中添加EGM对肉鸡肝脏霉菌毒素含量和免疫功能的影响。结果表明：与饲喂霉变饲料组相比，霉变饲料中添加0.1%、0.2%EGM和0.1%霉可吸，肉鸡肝脏中黄曲霉毒素B1（AFB1）含量分别降低了62.02%、79.44%和57.27%，玉米赤霉烯酮（ZEN）含量分别降低了66.33%、70.72%和52.01%，呕吐毒素（DON）含量分别降低了55.72%、81.33%和81.05%（P＜0.05）；肉鸡血液新城疫（NDV）抗体水平分别提高了36.86%、66.27%和52.94%，传染性法氏囊病（IBDV）抗体水平分别提高了26.81%、46.81%和32.72%，淋巴细胞转化率分别提高了13.22%、14.83%和13.31%（P＜0.05）。霉变饲料中添加0.2%EGM时，肉鸡肝脏AFB1、ZEN含量及血液NDV、IBDV抗体水平与对照组差异不显著（P＞0.05）。综上，EGM可以有效吸附AFB1、ZEN和DON，霉变饲料中适宜添加剂量为0.2%。

肉鸡；酯化葡甘露聚糖；霉菌毒素；肝脏；免疫功能

霉菌毒素污染谷物和饲料，对动物健康及生产效益造成严重危害，引起养殖业的高度关注。张丞等（2009）调查我国玉米和配合饲料霉菌毒素的污染情况发现，80%样品含2种或2种以上霉菌毒素，70%样品含4种及以上霉菌毒素，配合饲料中玉米赤霉烯酮（ZEN）和呕吐毒素（DON）的平均含量分别为333 ng/g和1277 ng/g，最高含量分别为1579 ng/g和5117 ng/g。朱风华等（2016）检测玉米中黄曲霉毒素B1（AFB1）、ZEN和DON含量发现，55%玉米含有两种以上霉菌毒素，玉米中AFB1、ZEN和DON超标率分别是20%、15.79%和28.13%。张晓云（2009）报道，霉菌毒素可导致畜禽免疫抑制、繁殖障碍、肝肾出血和变性坏死等不同程度的损伤。因此，研制高效的霉菌毒素吸附剂具有重要的现实意义。Aravind等（2003）报道，利用酵母细胞壁制备的酯化葡甘露聚糖（EGM）对霉菌毒素有很好的吸附作用，在霉菌毒素污染的饲料中添加EGM，可显著提高动物的增重和饲料报酬。于宗民（2007）、付学锋（2008）、马小明（2009）和李华（2009）等利用植物源葡甘露聚糖成功制备了EGM，并以小鼠为试验动物进行了EGM对黄曲霉毒素、T-2毒素、玉米赤霉烯酮和呕吐毒素吸附能力的研究，均取得了较好的结果。本试验旨在通过研究霉菌毒素污染饲料中添加不同水平的EGM对肉鸡肝脏霉菌毒素含量和免疫功能的影响，确定EGM对霉菌毒素的吸附效果及适宜的添加剂量，为EGM在实际生产中的应用提供理论依据。

1材料与方法

1.1试验动物与处理选取108只1日龄的AA肉鸡，随机分为6组，每组设3个重复。第1组为对照组，饲喂基础日粮；第2组为阳性对照组，饲喂霉变饲料；第3～5组为试验组，在霉变饲料中分别添加0.05%、0.1%和0.2%的EGM，第6组为标准对照组，在霉变饲料中添加0.1%霉可吸。试验期为30 d。

1.2基础日粮和霉变饲料基础日粮（肉小鸡配合饲料-510和肉中鸡配合饲料-511）购自山东某饲料公司。霉变饲料由基础日粮霉变而成。饲料中霉菌毒素含量见表1。

表1 饲料中霉菌毒素的含量μg/kg

1.3饲养管理试验肉鸡均自由采食、饮水，笼养，舍内通风良好，温度和湿度按照饲养规程进行控制，并做好卫生消毒工作。

1.4试验仪器设备和试剂

1.4.1仪器设备MK3型酶标仪（赛默飞世尔公司）、TDL-5型台式离心机、AR2140型电子分析天平。

1.4.2药品和试剂EGM（植物源）为青岛农业大学动物营养代谢病与中毒病实验室合成；霉可吸购自北京奥特奇生物制品有限公司；检测AFB1、ZEN和DON的ELISA试剂盒，购自江苏省苏微微生物研究公司。

1.5检测指标及方法

1.5.1肝脏中毒素含量的测定试验第15天和30天时，每组随机抽取3羽鸡，扑杀后迅速取肝脏1 g左右制成匀浆，用ELISA试剂盒检测AFB1、ZEN和DON等毒素的含量。

1.5.2免疫功能的检测

1.5.2.1外周血淋巴细胞转化率的检测试验第15天和30天时，翅静脉采血1 mL，肝素钠抗凝。用MTT法（四甲基偶氮唑盐）测定外周血淋巴细胞转化率。

1.5.2.2血浆中抗体水平的检测试验第15天和30天时，心脏采血10 mL，离心取血清，按照抗体检测试剂盒上的步骤采用ELISA法检测血浆中新城疫（NDV）抗体和传染性法氏囊病（IBDV）抗体的水平。

1.5.2.3免疫器官指数的检测试验第15天和30天时，从各组中随即扑杀3羽鸡，准确称量体重，迅速解剖，取胸腺、脾脏和法氏囊，剔除附着组织，称其鲜重，并计算其指数。

计算公式：免疫器官指数=免疫器官鲜重（g）/体重（kg）。

1.6数据统计分析试验数据采用SPSS 13.0进行单因素方差分析，试验数据用“平均值±标准差”表示。

2结果

2.1霉变饲料中添加EGM对肉鸡肝脏中霉菌毒素含量的影响

2.1.1霉变饲料中添加EGM对肉鸡肝脏中AFB1含量的影响由表2可以看出，试验至15 d，对照组和第3～6组肉鸡肝脏中AFB1含量比第2组分别降低了87.43%、8.78%、57.31%、86.21%和53.65%（P＜0.05），对照组和第4～6组显著低于第3组（P＜0.05），对照组和第5组显著低于第4组和第6组（P＜0.05）。试验至30 d，对照组和第3～6组肉鸡肝脏中AFB1含量比第2组分别降低了80.83%、23.77%、62.02%、79.44%和57.27%（P＜0.05），对照组和第4～6组显著低于第3组（P＜0.05），对照组和第5组显著低于第4组和第6组（P＜0.05），对照组和第5组差异不显著（P＞0.05）。2.1.2霉变饲料中添加EGM对肉鸡肝脏中ZEN含量的影响由表3可以看出，试验至15 d，对照组和第3～6组肉鸡肝脏中ZEN含量分别比第2组降低了91.71%、34.42%、66.33%、70.72%和52.01%（P＜0.05）。对照组、第4～6组显著低于第3组（P＜0.05），对照组、第4组和第5组显著低于第6组（P＜0.05），对照组显著低于第4组和第5组（P＜0.05）。试验至30 d，对照组和第3～6组肉鸡肝脏中ZEN含量分别比第2组降低了87.59%、8.37%、49.70%、69.80%和58.44%（P＜0.05）。对照组显著低于第4组和第6组（P＜0.05）。

表2 霉变饲料中添加EGM对肉鸡肝脏中AFB1含量的影响pg/g

表3 霉变饲料中添加EGM对肉鸡肝脏中ZEN含量的影响pg/g

2.1.3霉变饲料中添加EGM对肉鸡肝脏中DON含量的影响由表4可以看出，试验至15 d，对照组和第3～6组肉鸡肝脏中DON含量分别比第2组降低了91.74%、38.18%、55.72%、81.33%和81.05%（P＜0.05）。对照组、第4～6组显著低于第3组（P＜0.05），对照组、第5组和第6组显著低于第4组（P＜0.05）。试验至30 d，对照组和第3～6组肉鸡肝脏中DON含量分别比第2组降低了88.89%、31.21%、55.72%、55.31%和51.96%（P＜0.05）。对照组、第5组和第6组显著低于第3组（P＜0.05），对照组显著低于第5组和第6组（P＜0.05）。

表4 霉变饲料中添加EGM对肉鸡肝脏中DON含量的影响pg/g

2.2霉变饲料中添加EGM对肉鸡免疫功能的影响

2.2.1霉变饲料中添加EGM对肉鸡血液抗体水平的影响

2.2.1.1霉变饲料中添加EGM对肉鸡血液中NDV抗体水平的影响由表5可以看出，试验至15 d，对照组、第4～6组肉鸡血液中NDV抗体水平显著高于第2组和第3组（P＜0.05），对照组和第5组显著高于第4组（P＜0.05），对照组显著高于第6组（P＜0.05），第5组和对照组差异不显著（P＞0.05）。试验至30 d，对照组和第3～6组肉鸡血液中NDV抗体水平分别比第2组提高了77.64%、27.84%、36.86%、66.27%和52.94%（P＜0.05），对照组、第5组和第6组显著高于第3组和第4组（P＜0.05），对照组显著高于第6组（P＜0.05），对照组和第5组差异不显著（P＞0.05）。

表5 霉变饲料中添加EGM对肉鸡血液NDV抗体水平的影响

2.2.1.2霉变饲料中添加EGM对肉鸡血液中IBDV抗体水平的影响由表6可以看出，试验至15 d，对照组和第3～6组肉鸡血液中IBDV抗体水平显著高于第2组（P＜0.05），对照组、第5组和第6组显著高于第3组（P＜0.05），对照组和第5组差异不显著（P＞0.05）。试验至30d，对照组和第3～6组肉鸡血液中IBDV抗体水平比第2组分别提高了49.09%、20.45%、26.81%、46.81%和32.72%（P＜0.05），对照组和第5组显著高于第3组、第4组和第6组（P＜0.05），对照组和第5组差异不显著（P＞0.05）。

表6 霉变饲料中添加EGM对肉鸡血液IBDV抗体水平的影响

2.2.2霉变饲料中添加EGM对肉鸡外周血液LTR的影响由表7可以看出，试验至15 d，对照组和第3～6组肉鸡外周血液LTR显著高于第2组（P＜0.05），第3组显著高于第2组（P＜0.05）。试验至30 d，对照组和第3～6组肉鸡外周血液LTR比第2组分别提高了14.92%、10.11%、13.22%、14.83%和13.31%（P＜0.05），对照组和第5组显著高于第3组、第4组和第6组（P＜0.05），对照组和第5组差异不显著（P＞0.05）。

表7 霉变饲料中添加EGM对肉鸡LTR的影响%

2.2.3霉变饲料中添加EGM对肉鸡免疫器官指数的影响

2.2.3.1霉变饲料中添加EGM对肉鸡胸腺指数的影响由表8可以看出，试验至30 d，第2组、第3组和第4组肉鸡的胸腺指数显著低于对照组、第5组和第6组（P＜0.05），对照组、第5组和第6组之间差异不显著（P＞0.05）。

2.2.3.2霉变饲料中添加EGM对肉鸡脾脏指数的影响由表9可以看出，试验至15 d和30 d，各组间肉鸡脾脏指数差异不显著（P＞0.05）。

2.2.3.3霉变饲料中添加EGM对肉鸡法氏囊指数的影响由表10可以看出，试验至15 d，第2组、第3组和第4组肉鸡的法氏囊指数显著低于对照组（P＜0.05），对照组、第5组、第6组间差异不显著（P＞0.05）。试验至30 d，第2组肉鸡的法氏囊指数显著低于对照组、第4组和第5组（P＜0.05），对照组、第4组和第5组间差异不显著（P＞0.05）。

表8 霉变饲料中添加EGM对肉鸡胸腺指数的影响g/kg

表9 霉变饲料中添加EGM对肉鸡脾脏指数的影响g/kg

表10 霉变饲料中添加EGM对肉鸡法氏囊指数的影响g/kg

3讨论

3.1霉变饲料中添加EGM对肉鸡肝脏中霉菌毒素含量的影响AFB1在消化道吸收后主要分布于肝脏，有“肝脏毒”之称。刘艳丽等（2007）报道，给7日龄樱桃谷鸭饲喂含150 μg/kg AFB1的全价饲料，7 d后检测肝脏中毒素含量达到53.4 ng/g。Banlunara（1998）等研究表明，向受霉菌毒素污染的小鸭饲料中添加EGM可有效减轻AFB1引起的肝脏损伤。本试验结果显示，霉变饲料中添加0.1%的EGM和0.1%霉可吸组，肝脏中AFB1的含量差异不显著，说明植物源和微生物来源的EGM对于AFB1的吸附作用是相当的。霉变饲料中添加0.2%EGM组肉鸡肝脏中AFB1的含量与对照组差异不显著，并且这两组肉鸡肝脏AFB1含量显著低于其余各组，表明在霉变的饲料中添加0.2%EGM对于AFB1的吸附效果最好。

ZEN主要在肝脏中进行分解代谢，肝脏也是ZEN主要损伤的靶器官之一。本试验结果表明，在霉变饲料中添加0.1%、0.2%EGM和0.1%霉可吸与霉变饲料组相比，可以显著降低肝脏中ZEN的含量。对照组肉鸡肝脏ZEN含量显著低于0.1%EGM组和0.1%霉可吸组。对照组与添加0.2%EGM组相比，肉鸡肝脏ZEN含量差异不显著。表明在霉变饲料中添加0.2%EGM对ZEN的吸附效果更好。

DON随饲料被消化吸收后，分布于机体各个脏器和组织，其中以肝脏中含量最高，对肝脏造成的损伤较严重。本试验结果表明，在霉变饲料中添加吸附剂可以显著降低肉鸡肝脏中DON的含量，添加0.2%EGM和0.1%霉可吸效果比较好，但是这两组肉鸡肝脏毒素含量仍然显著高于对照组，这可能与EGM对DON吸附能力相对较弱有关。Murthy等（2002）报道，EGM能吸附肉鸡肠道中黄曲霉毒素高达75%～90%，T-2毒素仅为30%～35%。可见，EGM对不同种类霉菌毒素的吸附能力有明显差异。

综上所述，EGM对霉菌毒素的吸附效果与霉可吸相当。在霉变饲料中添加植物源EGM可以降低肉鸡肝脏中AFB1、ZEN和DON的含量，最佳添加剂量为0.2%。

3.2霉变饲料中添加EGM对肉鸡免疫功能的影响黄凯等（2015）体外试验发现，DON能降低脾脏淋巴细胞转化率、以及基质中IL-2、IL-4、IL-6、IL-12和INF-γ水平。黄凯等（2016）给肉鸡腹腔注射含50、100 μg/mL DON溶液1 mL，肉鸡血液IL-4、IL-6、Ig A、Ig M、NDV抗体和IBDV抗体水平显著降低。Vlata等（2006）发现，高浓度的ZEN（30 μg/mL）能够抑制T和B淋巴细胞的增殖。Basmacioglu等（2005）在黄曲霉毒素污染的饲料中添加0.1%EGM发现，可以扭转其降低血液总蛋白和淋巴细胞数的不利影响。本试验结果表明，与对照组相比，饲喂霉变饲料组肉鸡法氏囊指数、胸腺指数、淋巴细胞转化率以及血液NDV抗体和IBDV抗体水平降低。霉变饲料中添加EGM和霉可吸组，肉鸡淋巴细胞转化率、胸腺指数、法氏囊指数以及血液中NDV抗体、IBDV抗体水平均显著提高，说明添加吸附剂可以减轻霉菌毒素对免疫器官的损害。添加0.1%EGM与添加0.1%霉可吸组相比，肉鸡法氏囊指数显著提高，肉鸡胸腺指数以及NDV抗体、IBDV抗体水平显著降低，脾脏指数、淋巴细胞转化率没有明显差异，EGM和霉可吸吸附霉菌毒素的能力相仿。添加0.2%EGM组的肉鸡淋巴细胞转化率以及血液中NDV抗体和IBDV抗体水平显著高于其余各组。添加0.2%EGM组和0.1%霉可吸组肉鸡胸腺指数与对照组差异不显著。表明霉变饲料中添加0.2%EGM可更有效吸附霉菌毒素，降低霉菌毒素对肉鸡体液免疫和细胞免疫的不利影响。

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This experiment was to study the effect of esterified glucomannan（EGM）added in the moldy feed on the content of toxin in liver and the immune function of the broiler chickens.A total of 108 one-old-day AA broiler chickens were randomly divided into 6 groups.The first group was fed with basal diet，the second group was fed with the moldy feed，the third，the forth and the fifth groups were fed the moldy feed added with 0.05%，0.1%and 0.2%EGM respectively，the sixth group was fed the moldy feed added with 0.1%mycosorb.The results showed that：Compared with feeding moldy feed group，the content of aflatoxin B1（AFB1）in liver of broiler chickens of the group which fed moldy feed added with 0.1%EGM，0.2%EGM and 0.1%mycosorb was reduced by 62.02%，79.44%and 57.27%；the content of zearalenone（ZEN）was reduced by 66.33%，70.72%and 52.01%；the content of deoxynivalenol（DON）was reduced by 55.72%，81.33%and 81.05%（P＜0.05）；the level of newcastle disease virus（NDV）antibody was increased by 36.86%，66.27% and 52.94%；the level of infectious bursal disease virus（IBDV）antibody was increased by 26.81%，46.81%and 32.72%，and the lymphocyte transformation rate was increased by 13.22%，14.83%and 13.31%（P＜0.05）.The content of AFB1and ZEN of liver，and the level of NDV antibody and IBDV antibody of broiler chickens in the fifth group was not significantly difference compered with the basal diet group（P＞0.05）.It can be seen that EGM can effectively adsorb AFB1，ZEN and DON，and adding with 0.2%EGM in moldy feed is appropriate.

broiler chickens；esterified glucomannan；mycotoxins；liver；immune function

S816.7

A

1004-3314（2017）12-0032-05

10.15906/j.cnki.cn11-2975/s.20171209

山东省现代农业产业技术体系家禽产业创新团队（SDAIT-11-17，SDAIT-13-011-07）

*通讯作者