干扰素—γ诱导蛋白10在子痫前期孕妇血清和胎盘组织中的表达及意义

章彩萍+朱敏+傅苏仙

[摘要] 目的 探讨干扰素-γ诱导蛋白10（IP-10）在子痫前期（PE）孕妇血清和胎盘组织中的表达及意义。 方法 选择2015年1月～2017年2月61例PE孕妇，按照严重程度分为轻度PE组（33例）与重度PE组（28例）；按照发病时间分为早发型PE组（24例）与晚发型PE组（37例），同期30例正常妊娠者为正常对照组，比较组间血清和胎盘组织中IP-10的表达情况。 结果 与正常对照组比较，轻度与重度PE组孕妇的血清IP-10水平、胎盘组织IP-10 蛋白表达量均明显升高（P均<0.05），且重度PE组均明显高于轻度PE组（P均<0.05），但早发型与晚发型PE组之间比较均无明显差异（P均>0.05）。 结论 PE孕妇血清和胎盘组织中IP-10的表达过度，可能通过介导炎症反应及抑制血管新生参与疾病的发生。

[关键词] 子痫前期；干扰素-γ诱导蛋白10；血清；胎盘

[中图分类号] R714.244 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2017）15-0012-03

[Abstract] Objective To investigate the expression and significance of interferon-γ inducible protein 10 in serum and placenta of pregnant women with preeclampsia. Methods 61 pregnant women with PE from Jan.2015 to Feb. 2017 were selected according to the severity， the patients were divided into mild PE group（33 cases） and severe PE group（n=28）. According to the time of onset， the patients were divided into early onset PE group（n=24） and late onset PE group（n=37），and the normal control group was normal pregnancy with 30 cases. The expression of IP-10 in serum and placenta tissue was compared between groups. Results Compared with the normal control group， the levels of IP-10 in serum and placenta of the mild and severe PE group were significantly higher（P<0.05），and of the severe PE group were significantly higher than those of the mild PE group（P<0.05），while there were no significant difference between early onset and late onset PE group（P>0.05）. Conclusion IP-10 in serum and placenta of pregnant women with PE are Overexpressed， which may be involved in the occurrence of disease by mediating inflammation and inhibiting angiogenesis.

[Key words] Reeclampsia； Interferon-γ inducible protein 10； Serum； Placenta

子癇前期（preeclampsia，PE）为妊娠期特有疾病，临床上表现为母体综合征可伴胎儿综合征，如蛋白尿、高血压脑病或伴多系统器官损伤等，或胎盘早剥、宫内窘迫等，尤其是重度子痫前期危害更甚，是导致我国孕产妇死亡的第2大原因[1，2]。PE的病因及发病机制比较复杂，目前认为可能的致病因素有螺旋动脉异常变形、上皮细胞功能失常、血管新生抑制、慢性子宫胎盘缺血、Th 1/Th 2型细胞因子紊乱、血管内炎症等[3]。干扰素-γ诱导蛋白10（interferon-γ inducible protein 10，IP-10）是新近发现的由干扰素-γ诱导产生的一种趋化因子，既往研究已证明，IP-10能通过介导 Th1 型炎症反应参与病毒性肝炎、系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、肺结核、动脉粥样硬化等疾病，此外IP-10也是一种血管新生抑制因子[4，5]。动物实验发现，PE孕鼠肝肾、子宫等组织中 IP-10的表达增高[6]，引起了学者的关注。本研究分析IP-10在PE孕妇血清和胎盘组织中的表达变化，为 IP-10在PE发病中的作用机制提供参考。

1资料与方法

1.1一般资料

抽取2015年1月～2017年2月61例PE孕妇，年龄22～33岁，平均（26.56±2.38）岁，其中轻度33例，重度28例；早发型（发病孕周<34周）24例，晚发型（发病孕周>34周）37例。选择同期正常妊娠者30例，年龄21～30岁，平均（25.98±3.12）岁。入院时采集清晨空腹静脉血2 mL分离血清，分娩后即刻留取胎盘母体面组织，保存待检，两组间基本资料间比较差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。

纳入标准：①患者诊断标准符合《妇产科学》（第 7 版）[7]；②可以收集到患者完整检查和治疗以及病史资料等；③研究经过医院伦理委员会批准，患者知情同意等；排除标准：①入选对象均为单胎妊娠；②伴有其他妊娠合并症及并发症者；③患有意识障碍性疾病，无法配合研究者；④依从性差，或拒绝参加研究者。

1.2 方法

1.2.1 血清IP-10水平的检测 采取双抗体夹心 ELISA法，按试剂盒（美国 R&D 公司）说明书进行操作，用Elx800型全自动酶标仪（美国 VARIOSKAN FLASH Thermo 公司）检测获得OD 450 值，根据标准曲线算出水平。

1.2.2 胎盘组织IP-10蛋白表达量的检测 采取Western blot法，在提取胎盘组织总蛋白后，用 Bradford 法测定其浓度，并将各标本调整到相同蛋白浓度。用SDS-PAGE 电泳蛋白，电转移到PVDF 膜（北京中杉金桥生物技术有限公司），4℃封闭过夜。以 1∶2500的比例稀释多克隆抗体（北京冬歌生物），4℃孵育过夜，用TBST 缓冲液洗膜 3 次。将漂洗好的膜放置在1∶2000稀释的二抗HRP-羊抗兔 IgG（北京冬歌生物）中，在37℃下孵育2 h，ECL显色试剂盒（美国 Abcam 公司）显示胶片感光显影。用 Image J 软件扫描胶片上的图像，获得灰度值，用积分光密度法统计Western blot结果，然后与内参Actin 光密度值相比，即为IP-10蛋白相对表达量。

1.3 观察指标

比较轻度组、重度PE组、正常对照组和早发型PE组及晚发型PE组IP-10水平和胎盘组织IP-10 蛋白。

1.4 统计学方法

采用SPSS13.0统计学软件分析，计量资料以（x±s）表示，两组间比较采用独立样本t检验，三组间比较采用单因素方差分析（one-way ANOVA，F检验），对于有意义采用SNK-q检验进行两两比较，计数资料以百分比（%）表示，组间采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 血清IP-10水平分析

轻度与重度PE组孕妇血清IP-10水平分别为（115.23±20.51）pg/mL、（147.16±31.47）pg/mL，高于正常对照组（84.72±11.38）pg/mL（P<0.05），重度PE组明显高于轻度PE组（P<0.05）；早发型PE组IP-10水平（141.96±22.38）pg/mL低于晚发型PE组（158.16±25.66）pg/mL，但差异无统计学意义（P>0.05），见表1，2。

2.2 胎盘组织IP-10蛋白表达

轻度与重度PE组胎盘组织IP-10蛋白表达量分别为（0.919±0.054）、（1.638±0.079），明显高于正常对照组的（0.777±0.089）（P<0.05），重度PE组明显高于轻度PE组（P<0.05）；早发型PE组IP-10蛋白表達量（1.081±0.029）高于晚发型PE组（1.074±0.053），但差异无统计学意义（P>0.05），见表3、4。

3讨论

迄今对PE的病因和发病机制尚未完全明了，多认为其是一种母体系统性的过度性炎症反应[8]。前期动物实验提示IP-10与PE的发病有关系，可能涉及母体、胎盘和胎儿等多种因素，包括有滋养细胞侵袭异常、免疫调节功能异常、内皮细胞损伤、遗传因素和营养因素，但是没有任何一种单一因素能够解释所有子痫前期发病的病因和机制，与子痫前期发病相关的重要机制包括血管痉挛、内皮细胞激活、升压反应增加、前列腺素、一氧化氮、内皮素和血管生成和抗血管生成的蛋白质[9，10]。

IP-10为趋化因子CXC家族成员，又可称为CXCL10。目前已发现多达30种的细胞可表达 IP-10，包括活化的成纤维细胞、NK细胞、T细胞、单核/巨噬细胞等，由于IP-10能趋化NK细胞、T 淋巴细胞、单核细胞等多种炎症细胞，因而生物学功能十分丰富重要[11，12]。IP-10的受体只有CXCR3，IP-10可特异性结合靶细胞上的CXCR3，经信号转导途径介导免疫细胞迁移、活化，具有促炎症反应的特性。Th1/Th2 型细胞因子紊乱是PE的主要学说之一[7]，而IP-10可选择性趋化 Th1细胞，推进具有免疫杀伤作用的Th1反应，破坏Th2反应[13]。此外，IP-10还具有调节血管生成的特性，体内、体外研究均证明 IP-10能有效抑制血管新生[14]。有研究认为[15]，促血管生成因子/抗血管生成因子失衡造成了PE的病理生理改变。

本研究结果显示，无论是轻度抑或重度PE的血清、胎盘组织中IP-10的表达均明显高于正常妊娠，与既往研究一致，而且病情越重，PE表达升高越明显，但早发型与晚发型PE不存在明显差异。正常妊娠过程中出现全身性血管炎症反应，特别是在妊娠初期，一些炎性刺激物的生成会增加，而PE患者体内的IFN-γ、IP-10等因子更会不受抑制地增加，从而表现出过度的血管炎症反应[16]。IFN-γ可诱导吲哚胺2，3-双加氧酶的合成，使色氨酸转变为犬尿氨酸，使血液中色氨酸的水平下降，可能与出现神经系统症状有关，IFN-γ诱导巨噬细胞可诱导一氧化氮合酶产生，促进NO的合成，可诱导小胶质细胞星形细胞的iNOS产生，可能与中枢神经系统的某些疾病的发生或保护作用有关[17，18]。IP-10作为一种血管新生抑制因子，属趋化因子CXC亚家族，由单核细胞、内皮细胞等在γ干扰素和肿瘤坏死因子诱导下表达，可趋化活化T细胞和单核细胞，参与迟发型超敏反应和造血调控，受体为CXCR3，促进滋养层细胞黏附、迁移及浸润，削弱造血干细胞功能，抗血管生成，参与血管重铸，而使其在PE患者血清和胎盘中的表达过度，由此可推测IP-10可能通过介导全身性血管炎症反应及抑制血管新生参与PE的发生[19，20]。

IP-10 表达过度能够反映出PE患者机体处于血管炎症状态和抗血管生成状态，其与PE的发病有密切关系，但对其在PE病理生理过程中的具体作用、信号转导机制及其在广泛的免疫网络中所发挥的功能仍需进一步阐明。

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