高效液相色谱法测定人参超微粉中人参皂苷的含量

王宝春++孙萍++丁桃红++殷海霞

【摘要】皂苷类是人参的主要成分和药效成分，采用高效液相色谱法可准确测定人参中各皂苷类成分，本文主要介绍采用液相色谱测定在超微粉碎技术下得到不同粒度的粉末中人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1的含量。

【关键词】高效液相色谱法，人参，人参皂昔

【中图分类号】R284 【文献标识码】B 【文章编号】ISSN.2095-6681.2016.36..02

本品为五加科植物人参Pana：c ginseng C.A.Mey.的干燥根和根茎。它具有大补元气，补脾益肺，生津养血，安神益智等之功效。临床用于体虚欲脱，肺虚气喘，肢冷脉微，脾虚食少，口渴少津，内热消渴，气血不足等[1]。皂苷类成分是人参的主要活性物质和药效成分，因此提高它的提取率就可增强其生物利用率，以下将介绍同一批次的人参，在样品经过振动磨型超微粉碎机粉碎后得到不同粒度的粉体的皂苷含量进行测量[2]。

1 实验仪器与材料

1.1 实验仪器

AEL-200电子天平（沈阳龙腾电子称量仪器有限公司），AB204-N精密分析天平（METTLER TOLEDO），Agilent 1260型HPLC（Agilent Technologies），TKCD-1006超声波清洗仪（南昌科昌达超声波设备厂），Heal Force final Filter超纯水機（上海浦东分析仪器设备厂），HH-4数显恒温水浴锅（常州国华电器有限公司），SQW-25系列超微粉碎机（山东济南三清易辰）。

1.2 实验材料

人参皂苷标准品Rb1，Re，Rg1：中国药品生物制品检定所；乙腈（HPLC）。

1.3 样品制备

同一批次人参（吉林省长白山）：人参粗粉（过40目筛）；人参样品经过超微振动磨型得到粒径分别为76.006～86.348 μm、29.963～30.025 μm、25.088～25.488 μm、22.163 μm。

1.4 对照品溶液的制备

取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Rg1对照品适量，精密称定，加甲醇定容；分别精密量取上述对照品溶液各1 mL，置于同一10 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。每1 mL各含0.2 mg的混合溶液。

1.5 供试品溶液的制备

称取5种人参样品各约1 g，精密称定，置索氏提取器中，精密加50 mL三氯甲烷置于磨口锥形瓶内，于水浴加热80℃回流3 h，倒掉三氯甲烷液，药渣挥干溶剂，将滤纸筒一并移入100 mL锥形瓶中，加50 mL水饱和正丁醇，密塞，放置过夜，经过30 min超声处理（功率250 W，频率50 kHz），滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液25mL，置蒸发皿中蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至5 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

1.6 色谱条件

色谱条件：色谱柱为以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相C设为乙腈，流动相D设为水，按下表规定进行梯度洗脱；检测波长为203 nm，柱温为30°C，流速1 ml/min。理论塔板数按人参皂苷Rg1峰计算应不低于6000。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 uL，注入液相色谱仪，测定，即得，结果见各图。

2 方法学考察

2.1 线性关系

分别精密吸取“1.4”项下对照品储备液0.2 ml、0.4 ml、0.6 ml、0.8 ml、1.0 ml、1.2 ml置于10ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度。在上述“1.6”色谱条件下对对照品溶液进行液相分析和测定，记录高效液相色谱图并记录各对照品峰面积，以对照品浓度（ug/ml）为横坐标（x），以对照品峰面积为纵坐标（y），绘制对照品的标准曲线，并计算回归方程。人参皂苷Rg1：y=5.8176x-26.169，R2=0.9995，、人参皂苷Rg1：y=6.2582x-20.610 ，R2=0.9996和人参皂苷Rg1：y=12.435x+10.380，R2=0.9998。结果表明范围内浓度与峰面积具有良好的线性关系。

2.2 精密度试验

选取同一浓度的混合对照品溶液，在“1.6”色谱条件下连续进样6次，记录峰面积，并分别计算峰面积的相对标准偏差RSD%值，结果如下：样品中人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1相对标准偏差RSD值分别为0.94%，0.57%，1.57%，，表明该方法稳定性良好。

2.3 稳定性实验

取同一批人参供试品溶液1ml，精密量取，按“1.5”供试品制备方法制备样品，分别于0、2、4、8、12、24h在“1.6”色谱条件下对供试品进行液相分析，记录峰面积，并分别计算峰面积的相对标准偏差RSD%值，结果如下：0.23%，1.14%，0.59%说明供试品溶液在24h 内其化学性质有较好的的稳定性。

2.4 重复性实验

取同一批人参供试品溶液1ml，精密量取，按“1.5”供试品制备方法制备6份样品，按上述方法测定，以峰面积计算人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1的含量，并分别计算含量相对标准偏差RSD%值，结果如下：人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1相对标准偏差RSD值分别为：0.48%，0.53%，1.28%，表明该方法重复性良好。

2.5 回收率试验

称取0.5 g人参粗粉置于50 mL容量瓶中，加入“1.4”节中所配溶液1.0 mL，将其混匀后按“1.5”节所述处理方法进行提取。进样测定Rg1，Re和Rb1，回收率分别为100.1%，98.3%，96.5%；RSD分别为1.32%，0.95%，1.26%，表明该方法回收率良好，方法可行。

3 样品含测

按供试品溶液制备方法操作，对人参粗粉（过40目筛），超微粉碎粒径分别为76.006～86.348 μm、29.963～30.025 μm、25.088～25.488 μm、22.163 μm的微粉进行人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1含量进行测定。结果如下。

3 小 结

超微粉碎在中药范畴的应用初步已经具有规模，在单味药生产中已经应用十分广泛。因此超微技术在人参中的应用会越来越多，经试验证明不同粒径的人参微粉中，随着粉体的粒径越小，人参中皂苷的测定量明显增大，本文中超微粉碎粒径为22.163 μm的微粉中人参皂苷总含量为最高，比粗粉中皂苷测定量高出55%。超微粉碎粒径为22.163 μm时，皂苷的测定量与粗粉相近，继续减小粒径，皂苷的溶出率又增加。超微粉碎粒径为25.088～25.488 μm与超微粉碎粒径为22.163 μm的微粉中皂苷的测定量增长不大，因此，出于节约时间节省物料考虑，超微粉碎粒径为25.088～25.488μm的微粉是最佳。

参考文献

[1] 中华人民共和国药典委员会. 中华人民共和国药典（一部）[M].北京：中国医药科技出版社，2015：8-9.

[2] 张 晶.超微粉碎对人参中皂苷测定量的影响[J].食品科学. 2009，30（18）： 96-97.

[3] 何 翌，郭 琪，杜晓敏.中药细胞级微粉碎对体内吸收的影响[J].中成药，1999，21（11）：601-602.

本文编辑：李 豆