湘式挤压糕点中甜蜜素的气液相色谱分析方法的比较

□ 余莲芳 郑晶晶 朱明扬 岳阳市食品质量安全监督检验中心

湘式挤压糕点中甜蜜素的气液相色谱分析方法的比较

□ 余莲芳 郑晶晶 朱明扬 岳阳市食品质量安全监督检验中心

利用GB 5009.97-2016中气相色谱法（GC法）和高效液相色谱法（HPLC法）对“湘式挤压糕点”中的甜蜜素含量进行检测。GC法和HPLC法在所测定范围内线性良好，GC法的检出限和定量限分别为0.008 mg和0.024 mg，HPLC法的检出限和定量限分别为0.005 mg 和0.015 mg。添加水平在0.50~2.00 g/kg时,回收率分别为93.2%~107.2 %和90.1%~102.2%，相对标准偏差RSD(n=6)为2.8%~6.7%和2.2%~3.4%。两种分析方法检测结果比对差异不显著。结果表明，两种方法灵敏度好，回收率高，使用者可以根据自身情况进行选择。

湘式挤压糕点；气相色谱法；高效液相色谱法；甜蜜素

湘式挤压糕点是指以粮食为主要原料，辅以食用植物油、食用盐、白砂糖和辣椒干等辅料，经挤压熟化、拌料和包装等一系列工艺加工而成的休闲熟食[1]。此类产品具有商品名称奇特、色泽鲜艳、形状新奇、气味浓郁和价格低廉等特点，极受广大中小学学生喜爱。生产者为了迎合小朋友的口味以及降低成本，用甜蜜素（又名环己基氨基磺酸钠）替代食糖[2-3]。有些企业甜蜜素的含量通常是凭借经验和口感添加，甜蜜素检出率高且容易超标。有些企业盲目按照国标(GB2760)的规定添加，表面上看并没有超标，但由于各类添加剂的成分可能不纯正，结果往往会导致终端产品检测时某一项添加剂超标[4-7]。湖南省卫生厅专门发布了关于湘式挤压糕点的湖南省食品安全地方标准DBS43/002-2012，其中规定甜蜜素的最大使用量以环己基氨基磺酸计为1.6 g/kg[8]。目前很多实验室都不具备利用液相色谱-质谱/质谱仪检测甜蜜素的条件，因此本文对GB 5009.97-2016[9]中气相色谱法与液相色谱法测定湘式挤压糕点中甜蜜素进行系统比较，评价两种方法的可行性，不仅方便使用者根据自身情况进行选择，而且有利于同一实验室对检验结果进行仪器比对。

1 实验材料与仪器

1.1 实验材料

标准物质：甜蜜素；乙腈；正庚烷（色谱纯）；硫酸；次氯酸钠(有效氯含量≥6.0 %)；碳酸氢钠；亚硝酸钠；氯化钠；乙酸锌，亚铁氰化钾（分析纯）；实验用水均为超纯水；湘式挤压糕点（抽样于岳阳市几家食品公司）。

1.2 实验仪器

1.2.1 气相色谱仪及其条件

安捷伦7890B气相色谱仪：HP-5毛细管柱(30 m×0.32 mm×0.25 μm)；进样口： 230 ℃，进样量1 μL，分流比5∶1；柱箱升温程序：55 ℃，保持3 min，以10 ℃/min 升温至90 ℃,保持0.5 min，以20 ℃/min升温至200 ℃,保持3 min；FID检测器，260 ℃。

1.2.2 高效液相色谱仪及其条件

赛默飞U3000超高效液相色谱仪。：反相C18液相色谱柱：150 mm×4.6 mm×2.6 μm。；流动相:：乙腈＋水（68＋32）。；流速:：0.8 mL/min。；进样量:：10 μL。；柱温：30 ℃；。二极管阵列检测器，：检测波长314 nm。

1.3 样品制备

称取打碎、混匀的样品3.00 g左右于50 mL比色管中，加入30 mL水，振摇，超声提取40 min，混匀，加入2.5 mL亚铁氰化钾（106 g/L）溶液，混匀，再加入2.5 mL乙酸锌（220 g/L）溶液，混匀，再补加15 mL水，充分混匀，离心(3000 r/min) 10 min，过滤，滤液备用。GC法和HPLC法分别准确移取10.0 mL滤液于25 mL比色管中，其余步骤参照GB 5009.97-2016。

1.4 标准曲线制备

准确吸取2.00 mL甜蜜素标准溶液（10.00 mg/mL）于50 mL容量瓶中，用超纯水定容混匀，即得0.4 mg/mL甜蜜素标准使用液。分别吸取0.3、0.5、1.0、2.0、5.0 mL和10.0 mL甜蜜素标准使用液移至到25 mL比色管中，加水定容至10 mL，按GC样品处理方法进行处理。分别吸取0.3、0.4、0.5、1.0、2.0 mL和5.0 mL甜蜜素标准使用液移至25 mL比色管中，加水定容至10 mL，按HPLC样品处理方法进行处理。以测得的峰面积（Y）对甜蜜素含量（X）绘制标准曲线。

2 结果与讨论

2.1 前处理方法的比较及注意事项

由于湘式挤压糕点自身性状特殊，具有多油、有韧性、结构紧实等特点。用一般固体样品的前处理方法处理会不够理想，需要打碎、混匀再称样，延长超声时间或者浸泡过夜，加沉淀剂除去脂肪和蛋白，最终得到的样液可以同时供气相和液相检测用。GC法衍生反应的时间要控制好，样液与标液的涡旋或振摇时间和力度应一致以减少误差。若产生乳化，可加少许氯化钠，尽量不要加到水相中，以免产生大量气泡，轻轻搅拌正庚烷相，再吸取澄清的正庚烷相上层液体。定量时，衍生物和衍生副产物应一同计入。HPLC法需注意次氯酸钠有效氯的含量应达到要求，市售产品需及时标定，临用时配制，避光保存。用碳酸氢钠溶液洗涤有机相时应充分。HPLC法与GC法的前处理相比简单、耗时短、不需要冰水控温，而且在12 h内衍生产物基本无变化。HPLC法还可以利用光谱结合保留时间定性。

2.2 线性关系与检出限的比较

GC法和HPLC法在所测定范围内线性良好，GC法线性方程为Y1=184.473 059X1+4.556 387 6(r1=0.99982),Y2=185.390 629X2+0.853 846 1(r2=0.99978)，HPLC法线性方程为Y=3.116 4X-0.024 6（r=0.999 94）。以3倍信噪比计算检出限（LOD），以10倍信噪比计算定量限（LOQ），GC法的检出限和定量限分别为0.008 mg和0.024 mg，HPLC法为0.005 mg和0.015 mg。HPLC法检出限和定量限略低于GC法，但均达到常规检测要求。

2.3 准确度与精密度的比较

先测定样品本底值，按样品中测得的甜蜜素含量由低到高取3份样品进行加标回收试验。每份加标进行6次平行实验，结果见表1。两种方法测定的准确度和精密度良好，均符合实验要求，但HPLC法测定结果的精密度要好于GC法。

2.4 样品测定结果的比较

本实验对10种湘式挤压糕点样品进行检测，每份样品进行3次平行测定，结果取平均值，样品1和样品2检测结果大于1.6 g/kg（以环己基氨基磺酸计）的最大允许值。当自由度df=9,对于给定的显著性水平a=0.05，查t分布表得t0.025（9）=2.262，所以︱t︱

表1 准确度和精密度实验结果（n=6）

表2 GC法与HPLC法含量测定结果分析

3 结论

本文利用GB 5009.97-2016中第一法气相色谱法和第二法高效液相色谱法对湖南省地方特色休闲熟食“湘式挤压糕点”中的甜蜜素含量进行检测，对两种方法进行了系统的比较与分析，总结与归纳了实验过程中影响结果准确性的注意事项。液相色谱法与气相色谱法的前处理相比简单、耗时短、不需要冰水控温，而且衍生反应产物具有较好的稳定性。经过比较，两种方法均显示出灵敏度高，选择性好，回收率高等特点，且检测结果无明显差异，因此均可对湘式挤压糕点中甜蜜素准确定性定量分析。方便使用者根据自身情况进行选择，而且有利于同一实验室对检验结果进行仪器比对，以复查结果的准确性。

[1]湖南省卫生厅.DBS43/002-2012湖南省食品安全地方标准 湘式挤压糕点[S].湖南,2012.

[2]刘超,罗红霞,句荣辉,等.分光光度法间接测定调味面制品中甜蜜素的含量[J].中国食品添加剂,2013(1):222-226.

[3]夏雪萍.调味面制品中甜蜜素的测定[J].食品安全质量检测学报,2012,2(3):98-100.

[4]李宁.国内外甜蜜素限量标准及使用现状分析[J].中国食品卫生杂志,2007,5(19):455-457.

[5]周华.毛细管柱气相色谱法测定食品中的甜蜜素[J].中国卫生检验杂志,2007,4(17):649,686.

[6]施逸岚,杨清华.南通市2010－2012年食品中甜蜜素检测结果[J].江苏预防医学, 2014,6(25):76-77.

[7]郭爱华，袁佗，王玮，等.气相色谱法和离子色谱法测定饮料中甜蜜素的

方法比较[J]. 现代预防医学,2015,11(42):1975-1978.

[8]中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会.食品安全国家标准 食品添加剂使用标准 GB 2760-2014[S].北京:中国标准出版社,2014.

[9]中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会. 食品安全国家标准 食品中环己基氨基磺酸钠的测定GB5009.97-2016[S[.北京:中国标准出版社,2016.

[10] 李云雁,胡传荣.试验设计与数据处理［M］.第2版,北京:化学工业出版社,2008:12-15.