弥漫大B细胞淋巴瘤中外周血的血清micro-RNA检测及临床意义
2017-07-05胡上高周建耀
胡上高 周建耀 李 葳
(福建医科大学附属三明第一医院血液科,福建 三明 365000)
弥漫大B细胞淋巴瘤中外周血的血清micro-RNA检测及临床意义
胡上高 周建耀 李 葳
(福建医科大学附属三明第一医院血液科,福建 三明 365000)
目的 研究弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)中外周血清microRNA-21表达,探讨DLBCL中外周血的血清micro-RNA-21检测及临床意义方法。方法 采用Real time.RT-PCR方法检测46例弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)同时,采用西门子全自动蛋白分析的散射比浊法检测46例DLBCL中的血清β2微球蛋白表达。结果 外周血清microRNA-21和血清β2微球蛋白在DLBCL中同时高表达,其高表达与DLBCL患者AnnArbor分期和国际预后指数(IPI)呈正相关。结论 外周血清microRNA-21过表达可能是DLBCL恶性度高的标志,其检测的意义可以帮助临床淋巴瘤诊断危险分组及治疗方案选择。
淋巴瘤;大B细胞;microRNA-21;RT-PCR
弥漫性大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma,DLBCL)是非霍奇金淋巴瘤中最常见的一种类型,占所有NHL的30%~40%,是一类在细胞遗传学、分子学、临床表现和对标准治疗反应及预后的异质性明显的疾病。约60%可治愈,但高危组及中枢神经系统及骨髓浸润预后差,均易复发难治。其预后与国际预后指数(IPI)、病理生发中心与非生发中心、是否遗传学双打击、蛋白水平双表达、髓外浸润(尤其骨髓及中枢神经系统)相关明显,除中心遗传学染色体核型影响相关,其表观遗传学亦影响其预后及治疗效果。微小RNA(microRNA,miRNA)是一类非编码小分子RNA,长度为21~23个核苷酸,不编码蛋白质,但能在转录后或者翻译水平上影响基因表达。Lawrie等[1-4]证实了microRNA-21在DLBCL中上调,提示我们microRNA-21在血液系统恶性肿瘤中也可能发挥癌基因的作用。然而外周血清中microRNA-21的表达与与DLBCL肿瘤发生、DLBCL患者Ann Arbor分期、血清β2微球蛋白、国际预后指数(IPI)之间联系尚未报道。血清microRNA作为肿瘤诊断和预后的标志物,可应用于早期肿瘤的检测,且检测损伤小、灵敏度高、稳定性好。新近在血清等体液中发现的循环miRNA还具有良好的稳定性、检测方便等优势,很可能作为新型生物标志物用于疾病诊断、预后评价、治疗反应性以及新药物和治疗方法的寻找。因此本研究完成检测46例弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL),同时西门子全自动蛋白分析的散射比浊法方法检测检测46例DLBCL中的血清β2微球蛋白表达,探讨外周血清microRNA-21中DLBCL的表达意义及与血清β2微球蛋白表达是否正相关,是否以帮助临床淋巴瘤诊断危险分组及治疗方案选择。
表1 血清β2微球蛋白检测结果
1 材料与方法
1.1 研究对象:收集福建医科大学附属三明第一医院血液科2012年4月至2016年4月DLBCL患者治疗前后外周血离心后采集血清,在-60°低温保存46例,A组:Ⅱ~Ⅲ期21例,IPI指数为0~2分,其中GCB型12例,非GCB型9例;B组:Ⅵ期25例,IPI指数为3~5分,其中GCB型10例,非GCB型15例;年龄46~78岁,中位年龄58岁,其中男性34例,女性11例,收集患者诊断均经淋巴结病理及免疫组化确诊。治疗前患者均未行放化疗及其他生物治疗。同时采集正常对照人血清46例。
1.2 治疗方案:A组:Ⅱ~Ⅲ期21例,IPI指数为0~2分,其中GCB型12例,非GCB型9例,予以CHOP或CHOPE方案化疗;B组:Ⅵ期25例,IPI指数为3~5分,其中GCB型10例,非GCB型15例,予以CHOP或Hyper-CVAD+MA方案化疗。
1.3 操作步骤:①核酸提取;试剂:TIANGEN miRcute miRNA提取分离试剂盒DP501,操作步骤:详见试剂盒说明书。②逆转录;试剂:TIANGEN miRcute miRNA第一链合成试剂盒KR201-01,操作步骤:详见试剂盒说明书。③荧光定量;仪器:PCR ABI 7500;试剂:TIANGEN miRcute miRNA荧光定量检测试剂盒FP401,操作步骤:详见试剂盒说明书。④实验数据进行内扩增。见表1。
1.4 统计学分析:采用SPSS20统计软件包进行统计分析,计数资料采用单因素方差检验进行分析。各组之间表达采用Mann Whitney U检验和配对样本t检验,P<0.05差异具有统计学意义。
表2 弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)患者外周血清microRNA-21和血清β2微球蛋白水平变化(x-±s)
表3 两组患者采用Mann-Whitney U、Wilcoxon W检验结果(x-±s)
表4 Mann-Whitney U检验结果
表5 成对样本相关系数
2 结 果
弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)患者外周血清microRNA-21和血清β2微球蛋白水平变化。见表2。两组患者采用Mann-Whitney U、Wilcoxon W检验结果,见表3。Mann-Whitney U检验结果,见表4。成对样本相关系数,见表5。
采用配对样本t检验,结果相关系数等于0.494>0说明血清β2微球蛋白与外周血清microRNA-21存在正相关,sig=0.000<0.05说明相关系数有统计学意义,变量间的确存在正相关。
外周血清microRNA-21和血清β2微球蛋白在A组与B组类别上具统计学意义,在GCB与非GCB类别上无统计学意义;在治疗前与治疗后有统计学差异,说明治疗效果显著。外周血清microRNA-21中DLBCL的表达意义及与血清β2微球蛋白表达是正相关。
3 讨 论
弥漫性大B细胞淋巴瘤发病与细胞遗传学、分子学相关,同时可能治疗前后存在表观遗传学影响。miRNA与肿瘤的关系密切,且在表观遗传学研究中,miRNA与表观遗传之间可能存在一定的相互作用。miRNA可同时调控多个靶基因,如果靶基因是癌基因,那么microRNA-21表达增加时,靶基因表达增加就可能导致肿瘤发生。microRNA-21的检测为恶性淋巴瘤发生发展提供一种新的思路,为预后评价、治疗反应性以及新药物和治疗方法的寻找提供依据。经前检测发现microRNA-21在DLBCL血浆表达较正常人血浆增高,microRNA-21表达与血清β2微球蛋白表达成正比,GCB型与非GCB型microRNA-21之间表达没有明显差异,产生不同结果可能与DLBCL的发生部位不同、临床分期不同、患者是否接受化疗等相关,同时也反映了DLBCL的异质性。结果提示:外周血清microRNA-21中DLBCL的表达意义及与血清β2微球蛋白表达是正相关,提示外周血清microRNA-21过表达可能是DLBCL恶性度高的标志,microRNA-21在DLBCL中高表达,且与临床分期、IPI、治疗前后等相关,提示预后、治疗效果,其检测的意义可以帮助临床淋巴瘤诊断危险分组及治疗方案选择。为DLBCL的治疗前后观察mirco-RNA表达变化,作为新的切入点,为提高DLBCL的诊断与治疗水平开辟了新途径,但由于病例数少,无法大数据检测,存在局限性,如果同时检测患者是否合并遗传学双打击或蛋白水平双表达,再进行多参数分析,可能可以提高检测外周血清microRNA-21中DLBCL的表达意义价值。
[1] Fulci V,chiaretti S,Goldoni M,et al.Quantitative technologies establish a novel microRNA profile of chronic lymphocytic leukemia [J].Blood,2007,109(11):4944-4951.
[2] Jongen-Lavrencic M,Sum SM,Dijkstra MK,et al.M icroRNA expression profiling in relation to the genetic heterogeneity of acute myeloid leukemia[J].Blood,2008,111(10):5078-5085
[3] Navarro A,Gaya A,Martinez A,et al.MicroRNA expression profiling in classic Hodgk in lymphoma[J].Blood,2008,111(5):2825-2832.
[4] Lawrie CH,Soneji S,Marafioti T,et al.MicroRNA expression distinguishes between geminal center B cell-like(GCB) and activated B cell-like(ABC) subtypes of diffuse large B cell lymphoma[J].Int J Cancer,2007,121(5):1156-1161.
R733.1
B
1671-8194(2017)13-0115-03