乳腺癌组织Ezrin、VEGF表达变化及其与临床分期的关系

李运华，刘绍华，欧阳坚，胡兆鹏，梁卉

(1 萍乡市卫生学校，江西萍乡337000；2 萍乡市人民医院)

乳腺癌组织Ezrin、VEGF表达变化及其与临床分期的关系

李运华1，刘绍华1，欧阳坚1，胡兆鹏2，梁卉1

(1 萍乡市卫生学校，江西萍乡337000；2 萍乡市人民医院)

目的 探讨乳腺癌组织Ezrin、血管内皮生长因子(VEGF)表达变化及其与肿瘤临床分期的关系。方法 选择乳腺癌患者107例，手术切除乳腺癌组织标本为乳腺癌组、距肿瘤边缘>5 cm的癌旁正常乳腺组织标本作为癌旁正常组。采用Maxvision TM快捷免疫组化法检测两组Ezrin、VEGF表达(以条带光密度值表示)，分析二者表达与乳腺癌临床分期的关系，以及二者的相关性。结果 乳腺癌组织Ezrin、VEGF表达均较癌旁正常组织升高(P均<0.05)。随着临床分期增加，乳腺癌组织Ezrin、VEGF表达均逐渐升高(P均<0.05)。乳腺癌组织Ezrin、VEGF表达呈正相关(r=0.024，P<0.05)。结论 乳腺癌组织Ezrin、VEGF表达均上调，二者均参与乳腺癌的发生、发展。

乳腺癌；Ezrin蛋白；血管内皮生长因子

近年来乳腺癌的发病率和病死率逐年增加[1,2]。手术切除肿瘤结合术后放化疗是乳腺癌的主要治疗方法，但多数患者确诊时已处于临床中晚期，治疗效果及预后均不佳；肿瘤复发和转移的风险仍较高[3]。目前，临床仍缺乏特异性诊断和判断乳腺癌病情的标志物。Ezrin蛋白是细胞骨架与细胞膜之间的连接蛋白，主要表达于富含肌动蛋白的细胞表面，是连接膜蛋白和肌动蛋白细胞骨架结构和功能的关键蛋白[4]。已有证据显示，Ezrin蛋白参与了部分肿瘤细胞的增殖、分化、转移及凋亡过程[5]，但其与乳腺癌发生、发展的关系报道较少。血管内皮生长因子(VEGF)参与细胞的多种生理及病理过程，在多种肿瘤细胞中表达异常，参与多种肿瘤的发生、发展[6]。本研究探讨乳腺癌组织Ezrin、VEGF表达变化及其与乳腺癌临床分期的关系。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2011年1月～2015年11月萍乡市人民医院收治的乳腺癌患者107例，年龄57～75(64.7±7.6)岁；依据WHO乳腺癌肿瘤分期标准，Ⅰ期23例、Ⅱ期26例、Ⅲ期31例、Ⅳ期27例。107例患者均行手术切除肿瘤组织(乳腺癌组)，并留取距肿瘤边缘>5 cm的正常乳腺组织标本作为对照(正常组)。

1.2 Ezrin、VEGF表达检测 采用Maxvision TM快捷免疫组化法。取两组乳腺组织标本，石蜡包埋后4 μm厚连续切片。将切片平铺于用黏片剂处理过的载玻片上，60 ℃条件下烘干100 min；将烘干的切片放入二甲苯中脱蜡，采用57%、75%、95%及无水乙醇进行梯度脱水处理；将载玻片放入柠檬酸缓冲液中加热15 min；每张切片上滴一滴3%双氧水，室温孵育10 min；在载玻片上分别滴加一抗(兔抗Ezrin工作液浓度为1∶200，兔抗VEGF工作液浓度为1∶250)，室温孵育1 h，4 ℃孵育过夜；PBS冲洗3次，滴加二抗，室温孵育1 h；PBS冲洗3次，DAB试剂盒进行显色。具体步骤参照试剂盒说明书(Ezrin试剂盒购自Santa Cruz公司，VEGF检测试剂盒购自IBL公司)。选取7个典型视野，采用Pro-Plus6.0图像分析软件测量Ezrin、VEGF表达的光密度值(OD值)。分析Ezrin、VEGF表达与乳腺癌临床分期的关系。

2 结果

乳腺癌组Ezrin、VEGF表达均明显高于正常组(P均<0.05)，见表1；随着临床分期增加，乳腺癌组织Ezrin、VEGFF表达灰度值均逐渐升高(P均<0.05)，见表2。乳腺癌组织Ezrin、VEGF表达呈正相关(r=0.024，P<0.05)。

表1 两组VEGF、Ezrin表达灰度值比较

注：与正常组比较，*P<0.05。

表2 不同临床分期乳腺癌组织VEGF、Ezrin表达(OD值

3 讨论

Ezrin蛋白是细胞内维系膜蛋白及细胞骨架蛋白的关键分子，参与肿瘤细胞的大部分病理学过程[7,8]。研究发现，Ezrin蛋白在前列腺癌组织中表达亦明显增强，其表达水平越高、患者预后越差[9]；宫颈癌组织中Ezrin和E-cadherin蛋白均表达增强，且二者均与肿瘤细胞的增殖及转移过程相关[10]；Ezrin和MMP-9在食管鳞癌组织中均表达增强，二者是肿瘤细胞外基质发生重构和肿瘤细胞转移的主要参与蛋白[11]；Ezrin蛋白是结肠癌和胃癌等消化道恶性肿瘤细胞增殖、转移及凋亡的关键参与分子[12，13]。本研究结果显示，乳腺癌组织Ezrin表达水平明显高于癌旁正常组织，且随着临床分期增加，乳腺癌组织Ezrin表达均逐渐升高，说明Ezrin高表达可促进乳腺癌的发生及发展，检测乳腺癌组织Ezrin表达有助于乳腺癌的早期诊断和病情评估。

乳腺癌是血管依赖性肿瘤。在乳腺癌发生、发展过程中，新生血管生成发挥重要作用。在氧和营养充足的情况下，VEGF可以通过Wnt等信号途径促进正常非增殖期血管内皮细胞增生和血管网络形成[14]；但肿瘤局部一般为缺氧环境，缺氧导致肿瘤内皮细胞通过旁分泌或自分泌方式产生VEGF，以保证肿瘤组织血管生成和氧供，促进肿瘤组织发展[15]。VEGF还可通过调控一系列癌基因和抑癌基因的表达参与乳腺癌的发生发展过程[16]。本研究结果显示，乳腺癌组织VEGF表达水平明显高于癌旁正常组织，且随着临床分期增加，乳腺癌组织VEGF表达均逐渐升高，与上述文献报道相符，说明VEGF高表达可促进乳腺癌的发生及发展。

进一步研究发现，乳腺癌组织Ezrin、VEGF表达变化趋势相同，不同临床分期乳腺癌组织中Ezrin、VEGF表达变化趋势亦相同，二者表达呈正相关。推测乳腺癌组织中Ezrin、VEGF表达可能存在某种关联，但二者之间的具体联系方式及作用机制需今后研究证实。

综上所述，Ezrin、VEGF在乳腺癌组织中表达均上调，二者均参与了乳腺癌的发生、发展。

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2016-12-08)