抑癌基因p53、PTEN与子宫内膜癌预后相关性分析

王文翔，钟 兰，杨开选，彭芝兰

抑癌基因p53、PTEN与子宫内膜癌预后相关性分析

王文翔1，钟 兰2，杨开选3，彭芝兰2

目的 探讨抑癌基因p53、PTEN与子宫内膜癌临床病理特点及预后的相关性。方法 回顾性分析99例子宫内膜癌患者的临床病理资料，按照影响预后的高危因素分组。采用免疫组化法检测其组织中p53、PTEN的表达，分析其与临床病理特征、生存率的相关性。结果 p53蛋白过度表达在子宫内膜癌手术病理分期中差异有统计学意义(P=0.028)，同时与Ⅰ型、G1+G2级、Ⅰ+Ⅱ期、无淋巴结转移差异有统计学意义。单因素分析Log-rank检验显示组织学分型及分级、手术病理分期、淋巴结转移与生存率相关，p53蛋白过度表达阳性者生存率低。Cox′s比例风险回归模型进行多因素分析，病理分期和p53蛋白过度表达是内膜癌独立预后影响因素。PTEN表达缺失在分期越晚、分级越高的病例中更多，同时PTEN 表达缺失与p53蛋白过度表达无关。PTEN表达缺失与组织学分级、期别、淋巴结转移有无等与子宫内膜癌生存率无相关性(P>0.05)。结论 p53过度表达是子宫内膜癌独立的预后影响因素，对Ⅰ型子宫内膜癌、G1+G2级、Ⅰ+Ⅱ期、无淋巴结转移的病例，p53过度表达阳性者生存率低。PTEN在分化越差和分期越晚的病例中表达缺失越多；PTEN表达缺失和子宫内膜癌患者的生存率无相关性。

子宫内膜癌；p53；PTEN；免疫组化；预后

子宫内膜癌为女性生殖道常见恶性肿瘤之一，分为雌激素依赖型(Ⅰ型)和非雌激素依赖型(Ⅱ型)。内膜癌的预后与分期、病理类型、组织学分级、淋巴结有无转移、浸润深度等相关，但尚缺乏有效的子宫内膜癌的预后标记物，以避免对低危患者予以过度治疗，并确保对具有侵袭性的病例给予恰当的进一步治疗。本研究选择抑癌基因p53和PTEN(phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten,PTEN)的表达作为内膜癌预后因素进行探讨，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 收集四川大学华西第二附属医院病理科2007年至2016年住院的首次手术患者切除组织的石蜡包埋标本。纳入标准：①术前未接受放化疗，术后病理确诊为原发性子宫内膜癌，术后根据高危因素进行辅助治疗。②临床和病理资料齐全。③纳入所有Ⅱ型子宫内膜癌和Ⅰ型子宫内膜癌G3级，依据病例对照研究的原理在Ⅰ型子宫内膜癌G1+G2已死亡的病例中随机纳入5例，余G1+G2随机纳入。排除标准：①双癌；②有严重术后并发症或合并症。

1.2 方法 用免疫组织化学SP法(p53和PTEN试剂盒为默沙克生物科技有限公司生产)检测子宫内膜癌中p53过度表达和PTEN表达缺失，由两名病理科医师阅片。

1.3 结果判读 p53蛋白过度表达判断标准：细胞核染为颗粒状棕黄色或棕褐色。随机选取10个高倍镜视野计算阳性细胞数：阴性0分，<10%为1分，10%～50%为2分，>50%为3分；同时设定染色阴性0分，淡黄色1分，棕黄色2分，棕褐色3分。两组相乘结果：0分、1～3分判定为P53蛋白过度表达阴性，4～6分、7～9分为p53过度表达阳性。PTEN表达缺失判断标准：细胞核染为颗粒状棕黄色或棕褐色，随机选取10个高倍镜视野计算表达缺失细胞数：阴性0分，<10%为1分，10%～40%为2分，>40%为3分；同时设定染色阴性0分，淡黄色1分，棕黄色2分，棕褐色3分。两组相加结果：0分、1～2分判定为PTEN表达缺失阳性，3～4分、5～6分为PTEN表达缺失阴性。

1.4 统计学处理 采用SPSS 17.0统计软件进行数据处理，生存率计算采用Kaplan-Meier 法，与生存相关的单因素分析采用log-rank检验，多因素分析采用Cox回归分析，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 临床病理特征 99例患者临床病理特征分布情况：Ⅰ型子宫内膜癌73例(73.74%)，Ⅱ型子宫内膜癌26例(26.26%)；手术病理分期：Ⅰ期50例(50.51%)，Ⅱ期9例(9.09%)，Ⅲ期33例(33.33%)，Ⅳ期7例(7.07%)；组织学分级：G1级25例(25.25%)，G2级7例(7.07%)，G3级41例(41.41%)；99例中18例未清扫淋巴结，81例清扫了淋巴结的病例中29例有淋巴结转移，52例未查见淋巴结转移；35例死亡，57例存活，存活病例中无复发病例。

2.2 随访结果 以信访、电话访和家访结合的形式进行随访，起始时间为手术时间，终止时间为2015年6月30日，失访7例(7.07%)，35例死亡，57例存活，存活病例中无复发病例。随访时间3～130个月，3 a生存率61.95%。Ⅰ型子宫内膜癌死亡21例，Ⅱ型子宫内膜癌死亡14例。

2.3 p53、PTEN表达与临床病理特征相关性 p53表达与临床病理类型、手术病理分期、组织学分级、淋巴结转移分别对应的P值为0.083、0.028、0.068、0.186。在手术病理分期中差异有统计学意义。PTEN表达缺失在分期越晚、分级越高的病例中越多，差异有统计学意义。PTEN表达缺失与病理类型、淋巴结转移表达无关。同时PTEN 表达缺失与p53蛋白过度表达无关(P=0.965)，见表1。

2.4 p53、PTEN表达与生存率的相关性 p53过度表达与Ⅰ型子宫内膜癌、G1+G2级、Ⅰ+Ⅱ期、无淋巴结转移患者生存率差异有统计学意义。单因素分析Log-rank检验结果显示组织学分型、手术病理分期、组织学分级、淋巴结是否有转移与子宫内膜癌生存率相关，差异均有统计学意义。将组织学分型、手术病理分期(P=0.021)、组织学分级、淋巴结是否有转移、p53过度表达用Cox’s比例风险回归模型进行多因素分析，结果显示手术病理分期和p53过度表达是子宫内膜癌独立的预后影响因素。PTEN表达缺失率49.5%，PTEN表达缺失与组织学分级、期别、淋巴结转移等进行相关性分析，Log-rank检验P>0.05，均无统计学意义。

表1 p53、PTEN表达与临床病理特征相关性分析例 (%)

3 讨论

子宫内膜癌生存率与组织学分型、手术病理分期、组织学分级、淋巴结是否有转移相关，本研究也证实此相关性。近年来关于分子标记与子宫内膜癌预后相关因素不断报道，如p53、PTEN、bcl-2、MDM2、beta-catenin、环氧化酶-2(Cyclooxygenase-2，COX-2) 等。

p53属于抑癌基因，在DNA受损时，p53可诱导细胞凋亡或阻止细胞分裂，从而发挥抑癌作用。50%～60%的人类各系统肿瘤中发现有p53基因突变，约20%～30%子宫内膜癌中发现有p53基因突变。研究发现p53基因突变是多种恶性肿瘤的预后因素，如乳腺癌、卵巢癌、结肠癌、皮肤癌等[1-2]。有学者报道，p53的过度表达是子宫内膜癌发生的早期标记物之一[3], 在子宫内膜癌中p53过度表达与肿瘤侵袭性和肿瘤分级相关。当p53基因发生突变时，p53蛋白半衰期延长并在细胞核中积聚，可通过免疫组织化学进行检测。

国内外文献中关于p53过度表达和PTEN表达缺失对子宫内膜癌预后的影响存在分歧[4-5]，多数学者认为p53过度表达和子宫内膜癌预后不良相关，而与Ⅰ型子宫内膜癌G3级和Ⅱ型子宫内膜癌预后无相关性。本研究通过单因素分析显示：在Ⅰ型子宫内膜癌、Ⅰ+Ⅱ期、G1+G2级、无淋巴结转移中，p53表达阳性较阴性者生存率低。在G3级、Ⅱ型子宫内膜癌、Ⅲ+Ⅳ期、有淋巴结转移者中，p53表达阳性和阴性两者间的生存率差异无统计学意义。本研究结果显示p53表达是独立于FIGO分期、分级、病理类型、淋巴结转移的子宫内膜癌独立预后因素。 要进一步证明p53表达与子宫内膜癌预后的相关性，还需进一步研究以及得出临界值和一抗的统一标准。以前的研究中，有取阳性率5%为临界值，也有取10%和80%的，有研究对200例Ⅰ型子宫内膜癌病例进行预后研究，结果显示阳性率≥50%组较5%～50%组、≤5%组预后差(P=0.0001)，后两组与预后无相关性[6]。本研究结果显示Ⅱ型子宫内膜癌p53蛋白过度表达阳性率为27%，远低于以往文献报道的68%～100%，可能由于本研究取的临界值(cut-off)较以往取的0%、5%、10%高，使阳性率相应降低所致。

PTEN基因于1997年被发现，是迄今为止发现的第一个具有磷酸酶活性的抑癌基因，同时也极易发生突变[7]。近年来研究发现前列腺癌、乳腺癌、肺癌、胶质母细胞瘤、黑色素瘤和子宫内膜癌中有PTEN基因突变，Ⅰ型子宫内膜癌33%～83%有PTEN基因异常[8]，国内学者通过组织芯片技术发现PTEN的表达缺失与Ⅰ型子宫内膜癌的形成和发展有关[9]。本研究结果显示PTEN表达缺失和病理分型、淋巴结转移无关，分化越差的病例中PTEN表达缺失越多，在越晚期的病例中表达缺失越多。当PTEN表达缺失率继续增高时，抑癌作用减弱，肿瘤侵袭性迅速增加，这和PTEN作为抑癌基因的作用相符。但Lacey研究发现，在子宫内膜癌的持续进展中，与PTEN的缺失表达无关，同时也无敏感性和特异性[10]。

综上，本研究提示p53蛋白过度表达是子宫内膜癌独立的预后影响因素，对Ⅰ型子宫内膜癌、G1+G2级、Ⅰ+Ⅱ期、无淋巴结转移的病例，p53过度表达阳性者较阴性者生存率低。p53过度表达与Ⅰ型子宫内膜癌G3级和Ⅱ型子宫内膜癌生存率无相关性。PTEN在分化越差和分期越晚的病例中表达缺失越多，PTEN表达缺失和子宫内膜癌患者的生存率无关。

[1]Coleman DJ,Chagani S,Hyter S,et al.Loss of keratinocytic RXRα combined with activated CDK4 or oncogenic NRAS generates UVB-induced melanomas via loss of p53 and PTEN in the tumor microenvironment[J].Mol Cancer Res,2015,13(1):186-196.

[2] Mutuiri AP,Nzioka A,Busaria SV,et al.Expression of p53 and HER2/Neu in Kenyan women with primary ovarian carcinoma[J].Int J Gynecol Pathol,2016,35(6):537-543.

[3] Nquyen TT,Hachisuqa T,Urabe R,et al.Significance of p53 expression in background endometrium in endometrial carcinoma[J].Virchows Arch,2015,466(6):695-702.

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[5] 欧阳艳红.p53和PTEN在子宫内膜癌的表达及其意义[J].西南军医,2010,12(3):421-422.

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[8] Li L,Ross AH.Why is PTEN an important tumor suppressor[J].Cell Biochem,2007,102(6):1368-1374.

[9] 张桂香,庄新荣,赵学东.组织芯片技术检测PTEN、p53及hTERT在Ⅰ型子宫内膜癌中的表达特征[J].中国妇幼保健,2014,29(28):4618-4620.

[10]Lacey JV Jr,Mutter GL,Ronnett BM,et al.PTEN expression in endometrial biopsies as a marker of progression to endometrial carcinoma[J].Cancer Res,2008,68(14):6014-6020.

Correlation Analysis between P53, PTEN and Endometrial Carcinoma Prognosis Factors

WANG Wen-xiang1, ZHONG Lan2, YANG Kai-xuan3, PENG Zhi-lan2

(1.Department of Gynecology and Gynecology Oncology, Central Hospital of Xinxiang, Xinxiang 453000,China; 2. Department of Gynecology, West China Second Hospital, Chengdu 640001,China; 3. Department of Pathology, West China Second Hospital, Chengdu 640001,China)

ObjectiveTo study the relationship between p53 and PTEN and clinicopathological characteristics and prognosis of endometrial carcinoma.MethodsThe clinical and pathological data of 99 patients with endometrial carcinoma were retrospectively analyzed, and the risk factors were classified according to the prognostic factors. The expression of p53 and PTEN in tissues was detected by immunohistochemistry, and the correlation between the expression of p53, PTEN and clinicopathological features and survival rate was analyzed.ResultsThere was significant difference in the overexpression of p53 protein in surgical-pathologic staging (P=0.028). The overexpression of p53 protein was associated with the survival rate on type I endometrial carcinoma, G1+ G2 grade, Ⅰ+ Ⅱ stage, and no metastatic patients. Univariate analysis Log-rank test results showed that histological type and grade, surgical-pathologic stage, lymph node metastasis were associated with survival rate, p53 protein positive overexpression has low survival rate. Pathological staging and p53 protein overexpression were independent prognostic factors of en-dometrial cancer by Cox′s proportional hazard regression model. The expression of PTEN was absent in the later stage and higher grade, and the expression of PTEN was not correlated with histological grade and stage,pathological type and lymph node metastasis. While the loss of PTEN expression was not associated with overexpression of p53 protein(P>0.05).Conclusionp53 protein overexpression was an independent prognostic factor of endometrial carcinoma. The typeⅠendometrial carcinoma, G1+ G2 grade, Ⅰ+ Ⅱ stage, no lymph node metastasis with p53 protein overexpression had lower survival rate. PTEN expression was absent in the worse differentiation and clinical staging, and it was not related to the survival rate in the patients.

endometrial carcinoma；p53；PTEN gene；immunohistochemistry；prognosis

1672-688X(2017)02-0088-04

10.15926/j.cnki.issn1672-688x.2017.02.003

2016-12-09

1. 新乡市中心医院妇瘤一科，河南新乡 453000 2. 四川大学华西第二医院妇产科，四川成都 640001 3. 四川大学华西第二医院病理科，四川成都 640001

王文翔(1987—)，女，山西孝义人，主治医师，从事妇科肿瘤的临床及基础研究。

彭芝兰，女，主任医师，博士研究生导师，E-mail：pengzhiled@163.com

R711.74

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