柑橘橘络提取物通便作用的实验研究

王亚雯，辛中豪，蒲玲玲，高蔚娜，石塔拉，韦京豫，邓致荣，郭长江#

(1军事医学科学院卫生学环境医学研究所，天津 300050； 2火箭军疾病预防控制中心，北京 100071)

柑橘橘络提取物通便作用的实验研究

王亚雯1*，辛中豪1*，蒲玲玲1，高蔚娜1，石塔拉1，韦京豫1，邓致荣2#，郭长江1#

(1军事医学科学院卫生学环境医学研究所，天津 300050；2火箭军疾病预防控制中心，北京 100071)

目的：研究富含柑橘多糖和黄酮的橘络提取物的润肠通便作用。方法：依据《保健食品检验与评价技术规范》(2003版)“通便作用检验方法”，将小鼠随机分为模型对照组、阴性对照组和三剂量实验组(低、中、高剂量组)，经口给予柑橘橘络提取物1w后，通过测定小肠墨汁推进率、首粒便排出时间和6h内排便粒数及重量，判断柑橘橘络提取物对小鼠肠道蠕动和排便功能的影响。结果：与模型对照组相比，低剂量和中剂量组提高小肠墨汁推进率分别为65.29%和62.90%；3个剂量组的小鼠排首粒便时间显著低于模型对照组，6h内排便数及重量明显增多。结论：柑橘橘络提取物具有良好的促进肠道蠕动功能和排便的作用，其中中剂量组效果较好。

橘络提取物；柑橘多糖；黄酮；通便作用

便秘是临床上常见的症状之一。随着人们的工作压力加大及不规律生活与饮食结构的变化，经加工精制的低纤维食品不断增多，导致了肠道蠕动减弱、直肠肌肉无力等，出现便秘[1-3]。长期的便秘会促使肠道细菌产生有毒有害物质，易导致肠粘膜上皮细胞变异增生，从而诱发结直肠癌等疾病[4]。

天然柑橘橘络富含柑橘多糖和黄酮，其中柑橘多糖来源于植物细胞壁，是一种通过α- 1，4糖苷键连接起来的聚半乳糖醛酸的长链多糖聚合物[5]，是一种纯天然膳食纤维，不能被人体内消化液中的酶类所分解，部分可在大肠内被微生物发酵分解，产酸产气，从而降低pH值，抑制肠道有害菌生长，促进有益菌增殖，增强肠道蠕动[6]。同时柑橘多糖具有强吸水性，大约吸收自身体积的2.5倍水分，使粪便变软而易于排出，排便排毒效果快速显著[7]。黄酮类物质具有抗氧化、抗血栓、抗肿瘤、抗菌消炎、抗病毒和排毒等多种作用，对物质代谢有调节作用[8-9]。本实验旨在探讨富含柑橘多糖和黄酮的柑橘橘络提取物改善小鼠胃肠道功能的作用，并确定其最佳灌胃剂量。为研制基于柑橘橘络提取物的功能性润肠通便制剂提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

柑橘橘络提取物，由杭州络通生物科技有限公司提供。该提取物是以柑橘橘络和内果皮为原料，利用低温浓缩、萃取和膜法分离技术进行分离和提纯，再经过巴氏灭菌等过程得到。成品为褐色悬浊液。经过化学测定，每100mL含柑橘多糖≥2 000mg、柑橘黄酮≥400mg、总固形物≥4 500mg。复方地芬诺酯片，由常州康普药业制药责任公司提供(批号：1604014)，用于急慢性功能性腹泻及慢性肠炎，过量摄入可致便秘。

1.2 动物与分组

SPF级成年昆明小白鼠150只，雄性，体重22～25g，由军事医学科学院实验动物中心提供。采用随机数字法将实验动物分为低、中、高剂量实验组(0.2、0.4、0.8 mL/(25g·bw)，分别相当于人体推荐量的5、10、20倍)，同时设便秘模型对照组和阴性对照组[10]，每组15只，按0.8mL/(只·d)经口给予等量的蒸馏水，每日1次，连续7d灌胃。

1.3 方法

参考《保健食品检验与评价技术规范》(2003年版)中“通便功能检验方法”小肠运动实验和排便实验，具体方法如下：

1.3.1 小肠运动实验 各实验组按 1 mL/(只·d)经口给予受试物，空白和模型对照组给予等量的蒸馏水，每天灌胃 1 次连续给与受试物 7 d。末次给样的当天下午，各组动物禁食不禁水16h后，对模型对照组和3个实验组给予剂量为5mg/(kg·bw)的复方地芬诺酯溶液，灌胃量为0.2mL/(10g·bw)，阴性对照组给予等量蒸馏水。经30min后实验组给予用柑橘橘络受试物替代蒸馏水配置成的含2%墨汁的溶液(取印度墨水1 mL，加入49 mL蒸馏水配制成2%墨汁，灌胃剂量为0.1mL/(10g·bw)。用墨汁与灌胃液勾兑，灌胃总量保持 1 mL)，模型对照组和阴性对照组给2%墨汁灌胃。再过25 min后颈椎脱臼处死动物，立即取出自幽门至回盲部的肠管，轻将小肠平铺拉成直线进行测量。测量小肠总长度及从幽门至墨汁前沿的推进距离，即为“墨汁推进长度”。按式(1)计算墨汁推进率(P)，并进行数据转换(Х)后再统计分析。

(1)

1.3.2 排便实验 动物给受试物方法同小肠运动实验，连续灌胃7d后，末次给样的当天下午，各组动物禁食不禁水。16h后，模型对照组和3个实验组给予剂量为10mg/(kg·bw)的复方地芬诺酯溶液，灌胃量为0.2mL/(10g·bw)，阴性对照组给予等量蒸馏水。30min后实验组给予含相应受试物的2%洋红溶液(取洋红粉末1g，加入49mL二级蒸馏水配制成2%洋红溶液，灌胃剂量为0.1mL/(10g·bw)。用洋红溶液与灌胃液勾兑成混合液，小鼠灌胃总量保持1mL，模型对照组和阴性对照组给予2%洋红，同时开始计时。从灌胃洋红开始，观察记录每只动物首次排红便所需时间、6h排便粒数并称重。实验中动物单笼喂养，正常饮水进食。

1.3.3 统计学处理 采用SPSS 20.0进行方差分析及两两t检验。若实验数据方差不齐，则改用秩和检验统计分析。P<0.05，表示差别有统计学意义。

2 结果

2.1 柑橘橘络提取物对小鼠体重的影响

从表1、表2结果可知，2个实验前后各剂量组小鼠的体重与阴性对照组及模型对照组相比，均不存在统计学差异(P>0.05)，表明柑橘橘络提取物对小鼠体重无明显影响。

表1 小鼠小肠运动实验前后体重比较

注：各剂量组与阴性对照组和模型对照组比较，P>0.05。

表2 小鼠排便实验前后体重比较

注：各剂量组与阴性对照组和模型对照组比较，P>0.05。

2.2 柑橘橘络提取物对小鼠小肠运动的影响

由表3结果可知，与阴性对照组相比，便秘模型对照组小鼠的墨汁推进率明显降低(P<0.05)，表示成功建立便秘模型。与模型对照组相比，低剂量组和中剂量组提高小肠墨汁推进率分别为65.29%和62.90%(P<0.05)，经数据转换及统计分析，5倍、10倍剂量组与便秘模型对照组的差异有显著性(P<0.05)，其中10倍剂量组的转换值X高于5倍组，以上结果表明，柑橘橘络提取物对小鼠的小肠运动具有促进作用。

表3 柑橘橘络提取物对小鼠小肠运动的影响

注：aP<0.05，表示各组墨汁推进率与便秘模型对照组比较有显著性差异；bP<0.05，表示各组墨汁推进率转换值Х与便秘模型对照组比较有显著性差异。

2.3 柑橘橘络提取物对小鼠排便时间、排便频率和排便量的影响

由表4结果可知，与阴性对照组相比，便秘模型对照组小鼠首便时间明显延长(P<0.01)，而粪便的粒数及重量极显著低于阴性对照组(P<0.01)。与模型对照组相比，5倍、10倍剂量组首便时间极显著性缩短(P<0.01)，20倍组也具有统计学意义(P<0.05)；与模型对照组相比，5倍、10倍组的粪便粒数有极显著性意义(P<0.01)，20倍组的明显增多(P<0.05)；各剂量组粪便重量均大于便秘模型对照组，并有极显著性差异(P<0.01)。以上结果表明，3个剂量组柑橘橘络提取物能明显缩短便秘小鼠的首便时间，并增加其所排便数量及重量，能够增强肠道蠕动，促进排便。

表4 受试物对小鼠排便时间、排便频率和排便量的影响

注：其他各组的首便时间与便秘模型对照组的相比，*P<0.05、**P<0.01；其他各组的粪便粒数与便秘模型对照组的相比，ΔP<0.05、ΔΔP<0.01；其他各组的粪便重量与便秘模型对照组的相比，#P<0.05、##P<0.01。

3 讨论

本研究结果显示，柑橘橘络提取物具有较好的润肠通便作用，尤其是在低、中剂量水平。柑橘橘络提取物的主要组成部分是柑橘多糖，其富含鼠李半乳糖醛酸聚糖和半乳糖醛酸聚糖等结构元素，具有高持水和高粘度的特性[11]，可以软化粪便增大体积，促进肠道蠕动，易于排便；另外，有研究显示多糖可明显增加肠道有益菌的含量，提高益生菌的生存能力，改善肠道菌群内环境，有效的预防结肠癌[12-13]。一些黄酮类物质也被证实具有调节肠道菌群和抑制肿瘤生长的作用[14-15]。虽然柑橘橘络提取物富含柑橘多糖和黄酮类物质，但是否也具有改善肠道菌群、预防结肠癌的作用尚有待于进一步研究证实。值得注意的是，柑橘橘络提取物在小肠运动和排便实验中均未表现出明显的剂量依赖作用，尤其是20倍剂量组在小肠运动实验中未见明显效果。可能的原因之一是一些黄酮类提取物在高剂量水平上可能对肠道蠕动功能具有一定抑制作用[16]，因此，柑橘橘络提取物适宜的服用剂量尚需进一步探讨。此外，其次本次实验选择小鼠作为实验对象，初步得出了有效的结果，但如需应用于便秘人群，尚应开展必要的人群观察试验，并对提取物中的有效成分开展进一步研究。

综上所述，本研究结果提示柑橘橘络提取物具有较好的通便作用，为研发富含柑橘橘络提取物的保健食品提供了科学依据，也为长期便秘的人群提供可行性参考。◇

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(责任编辑 李婷婷)

Experimental Study on Facilitating Bowel Movement by Citrus Net Extract

WANG Ya-wen1，XIN Zhong-hao1，PU Ling-ling1，GAO Wei-na1，SHI Ta-la1，WEI Jing-yu1，DENG Zhi-rong2，GUO Chang-jiang1

(1Institute of Health and Environmental Medicine，Tianjin 300050，China；2Centers for Disease Control and Prevention，Rocket Forces，Beijing 100071，China)

citrus net extract；pectin flavonoids；facilitating bowel movement

军队科技重大项目(项目编号：AWS16J004)。

*共同第一作者:王亚雯(1992— )，女，硕士，研究方向：营养与食品卫生学；辛中豪(1990— )，男，硕士，研究方向：营养与食品卫生学。

#共同通信作者：郭长江(1963— )，男，博士，研究员，研究方向：营养与食品卫生学；邓致荣(1962— )，男，队长，研究方向：军事预防医学。