紫外-可见分光光度法测定牛筋草总黄酮的含量

胡晓鸥

（浙江省湖州市南浔区中西医结合医院，浙江 湖州 313009）

紫外-可见分光光度法测定牛筋草总黄酮的含量

胡晓鸥

（浙江省湖州市南浔区中西医结合医院，浙江 湖州 313009）

目的 建立牛筋草中总黄酮的测定方法，为其质量评价提供理论依据。方法 采用紫外-可见分光光度（UV-VIS）法，检测波长507 nm。结果 牛筋草总黄酮在0.0042～0.0954 mg/ml范围内线性关系良好（Y=12.342X+0.0082，r=0.9998，n=6），平均回收率为99.51%，RSD为3.35%。结论 本方法简单、方便、专属性强，可为牛筋草药材的质量控制提供参考。

牛筋草；紫外-可见分光光度法；总黄酮

牛筋草为禾本科植物牛筋草Eleusine indica（L.）Gaertn.的干燥全草。又名牛顿草，千人拔，蟋蟀草，牛古草，牛皮草等。本品始载于《本草纲目拾遗》，主产于广东，湖南，江西，福建等省区，全国均有分布[1]。《中华本草》[2]中记载牛筋草可用于治疗小儿惊风；乙脑；流脑；黄疸；淋证；小便不利；痢疾；便血；疮疡肿痛；跌打损伤，其茎叶中含多种黄酮类成分。

牛筋草资源丰富，民间大多作为杂草对待，对牛筋草含量测定的药学研究鲜有报道，本文建立紫外-可见分光光度法测定牛筋草中总黄酮含量的方法，旨在为牛筋草的合理应用提供一定的科学依据；为牛筋草的进一步研究奠定基础。

1 仪器和试药

1.1 仪器

紫外检测器（日本岛津UV-1800）、超声波提取仪（昆山KQ-700DE）、万分之一天平（梅特勒-托利多）、十万分之一电子分析天平（瑞士Precisa）；超纯水系统：美国Millipore（密理博）公司

1.2 试药

10批牛筋草药材分别来自浙江、广东、福建、江西4个产区，经浙江省湖州市食品药品检验研究院鉴定为禾本科植物牛筋草Eleusine indica（L.）Gaertn.的干燥全草。芦丁（购于中国食品药品检定研究院，批号100080-201409）乙醇（分析纯），超纯水。

2 方法与结果

2.1 含量测定方法

取芦丁对照品制成一定浓度梯度的标准品溶液，照紫外－可见分光光度法（中国药典2015年版四部通则0401），全波长扫描确定最大吸收峰确定检测波长后在该波长作处测定吸光度并绘制标准曲线。另取供试品溶液，同法测定，计算即得。

2.2 供试品溶液的制备

精密称取牛筋草粉末2 g，置于具塞锥形瓶中，精密加入40 ml的50%乙醇，称定重量。加热回流，保持微沸1 h，放冷至室温后用50%乙醇补足减失的重量，过滤，精密吸取续滤液1ml置于10ml容量瓶中，用50%乙醇定容至刻度，摇匀，即得。

2.3 对照品溶液的制备

（1）取芦丁对照品104.13 mg，置100 ml容量瓶中，加95%乙醇适量，超声处理使溶解，放冷，加50%乙醇至刻度，摇匀，即得每1 ml含1.0413 mg的溶液。

（2）取芦丁对照品15.8941 mg，置20 ml容量瓶中，加95%乙醇适量，超声处理使溶解，放冷，加95%乙醇至刻度，摇匀，即得每1 ml含0.7947 mg的溶液。

2.4 空白溶液的制备

精密加入5%亚硝酸钠溶液1 ml，10%硝酸铝溶液1 ml，4%氢氧化钠溶液10 ml，用乙醇定容至25 ml容量瓶。

2.5 检测波长的选择

精密吸取供试品溶液、对照品溶液各1 ml于25 ml量瓶中，精密加入5%亚硝酸钠溶液1 ml，反应6 min后，精密加入10%硝酸铝溶液1 ml，反应6 min后，精密加入4%氢氧化钠溶液10 ml，用乙醇定容至刻度。15 min后，进行200～800 nm全波长扫描。结果：对照品与供试品在507 nm处均有最大吸收，选为测定波长，结果见图1。

图1 紫外可见吸收图谱注：1.芦丁对照品溶液；2.供试品溶液

2.6 标准曲线的绘制

精密吸取2.3.1项下芦丁对照品溶液（1.0413 mg/ml）溶液0.1、0.5、1.0 ml，2.3.2项下芦丁对照品溶液（0.7947 mg/ml）溶液0.5、2.0、3.0ml分别加1 ml5%亚硝酸钠溶液，放置6 min，1 ml5%硝酸铝溶液，放置6 min，加10 ml4%氢氧化钠溶液，放置15 min加95%乙醇溶液定容至25 ml，使其浓度分别为0.0042、0.0159、0.0208、0.0417、0.0636、0.0954 mg/ml。于507 nm波长出测定吸光度。以对照品浓度（C，mg/ml）为横坐标，吸光度（A）为纵坐标绘制标准曲线，得到回归方程为Y=12.342X+0.0082（r=0.9998，n=6），结果表明，总黄酮浓度在0.0042～0.0954 mg/ml范围内与吸光度呈良好的线性关系。

2.7 精密度考察

取对照品一份，按2.3.1项下制备对照品溶液，按2.1项下方法连续6次测定吸光度，RSD=0.8%，表明精密度良好。

2.8 重现性考察

称取供试品6份，按2.2项下制备供试品溶液后，平行制备6份。按2.1项下方法分别测定吸光度，RSD=0.6%，表明重现性良好。

2.9 显色稳定性考察

取供试品1份，按2.2项下操作制备供试品溶液，按2.1项下方法操作，每隔10 min测定一次吸光度，结果表明：RSD=1.1%，表明在2 h内显色稳定性良好。

2.10 加样回收试验

取凉粉草（广州清平药材市场，20151023）粉末0.5 g（总黄酮按干燥品计算含量为86.63 mg/g），精密称定，置具塞锥形瓶中，加入适量芦丁，精密称定，精密加入50%乙醇20 ml，称定重量，加热回流保持微沸1 h，放冷至室温后用50%乙醇补足减失的重量，过滤，精密吸取续滤液1 ml置于10 ml容量瓶中，用50%乙醇定容至刻度，摇匀，以2.4制备空白对照，在507 nm处测定吸光度。结果显示平均加样回收率为99.51%，RSD值为3.35%，表明该实验方案有效可行。结果见表1。

2.11 样品测定

取不同批号的牛筋草按材料与方法4项下操作制备成供试品溶液后，按材料与方法1项下操作对样品进行含量测定。结果见表2。

表1 加样回收率试验结果（n=6）

表2 凉粉草样品的总黄酮测定

3 讨 论

牛筋草为世界十大恶性杂草之一[3]，已在60多个国家和地区46种作物田间发现其危害，目前对牛津草的研究多集中于农药除草剂方面。中医认为牛筋草能清热利湿，用于治疗黄疸、乙型脑炎、乳腺炎等疾病有良好的疗效，具有较高的药用价值[2]。对其进行药学研究，有助于人们进一步认识牛筋草，为其综合利用提供科学依据。

本研究还对提取方法、提取溶剂和料液比进行了考察，结果发现加热回流的提取方法比超声提取效率高。50%的乙醇提取作为提取溶剂对于黄酮类物质最优，以20：1的料液比最为适宜。

黄酮类化合物具有抗氧化、抗炎、镇痛调节免疫、抗衰老等药理作用[4]。本文建立测定牛筋草总黄酮的含量的方法，样品制备方法简单，检测结果准确，回收率、线性、精密度均符合《中国药典》对于中药分析的要求，且方法简单，快速准确灵敏，为以后开发牛筋草的药物制剂奠定了基础，可作为牛筋草的质量控制标准。

[1] 广东省食品药品监督管理局.广东省中药材标准(第一册)[M].广州:广东科技出版社,50-51.

[2] 国家中医药管理局.中华本草(第八册)[M].上海:上海科学技术出版社,345.

[3] 王新玲,马小艳,姜伟丽,等.不同棉区牛筋草对草甘膦的抗药性比较[J].中国棉花,2016,43(2):27-31.

[4] 马 锐,吴胜本.中药黄酮类化合物药理及作用机制研究进展[J].中国药物警戒,2013,10(5):286-290.

本文编辑：吴 卫

Total Flavonoids content in Eleusine indica(L.)Gaertn. with Ultraviolet-Visible Spectrophotometry

HU Xiao-ou

(Nanxun Integrative Medicine Hospital, Zhejiang Huzhou 313009, China)

Objective Ultraviolet-Visible Spectrophotometry was established to determine the total flavonoids content in Eleusine indica(L.)Gaertn. Methods Reference standard method (λ-507nm) was used to determine the content of total flavonoids in Eleusine indica(L.)Gaertn. Results The test of Soluble protein in Eleusine indica(L.)Gaertn. was linear within the range of 0.0042～0.0954 mg·ml-1(Y=12.342X+0.0082, r=0.9998, n=6).The average recovery was 99.51%,RSD=3.35%. Conclusion The methods were simple and accurate.

Eleusine indica(L.)Gaertn.; Ultraviolet-Visible Spectrophotometry; Total flavonoids

R284.1

A

ISSN.2095-8242.2017.017.3176.03