TPPA、TP-ELISA和TRUST检测梅毒临床价值对比研究*

何思杰 黄翠芳 冼洁能 曾庆洋

TPPA、TP-ELISA和TRUST检测梅毒临床价值对比研究*

何思杰①黄翠芳①冼洁能①曾庆洋①

目的：比较颗粒凝集试验（TPPA）、酶联免疫吸附试验（TP-ELISA）和甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）对梅毒检测的临床应用价值。方法：选取2015年7月-2016年7月来本院就诊的1618例患者（包括皮肤性病科门诊患者、其他科室的住院患者、术前患者、产前检查孕妇及HIV自愿检测者）的标本，采用TPPA、TP-ELISA和TRUST进行检测，比较三种检测方法的检出率、敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值、Youden指数。结果：TPPA、TP-ELISA及TRUST检测梅毒抗体的阳性率分别为20.1%、19.8%和17.3%。以TPPA为对照，TP-ELISA的阳性符合率为97.5%，敏感性、特异性、准确率分别为96.0%、99.4%，98.7%。TRUST的阳性符合率为98.2%，敏感性、特异性、准确率分别为84.6%、99.6%、96.6%。TP-ELISA的敏感性、准确率与TRUST比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论：TPPA、TP-ELISA和TRUST都可以用来检测梅毒，但三种方法的准确率、敏感性、特异性各有千秋，临床上应采用多种方法联合检测的方法结合临床症状诊断梅毒，从而更好地提供诊断参考依据。

颗粒凝集试验； 酶联免疫吸附试验； 甲苯胺红不加热血清试验； 梅毒； 临床价值

性传播感染可引起严重的胎儿和新生儿的损伤、生殖器肿瘤和不育[1]。梅毒（syphilis）是一种由苍白螺旋体，也叫做梅毒螺旋体引起的性传播疾病[2]。目前有许多的诊断方法和检验指标用于检测个体感染，以便确诊[3]。梅毒在近些年来患病率与发病率均呈现增高趋势，由于梅毒可以通过性传播、血液传播、母婴传播途径传播，对社会及人体健康造成危害，所以早期诊断梅毒并进行合理的干预治疗是有效的治疗策略[4-8]。临床上常用的检测梅毒抗体的方法主要有颗粒凝集试验（TPPA）、酶联免疫吸附试验（TP-ELISA）和甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）[9-10]。本研究以2015年7月-2016年7月来本院就诊的1618例患者作为研究对象，通过不同的检测手段评判三种梅毒检测手段的临床应用价值。现将研究结果报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2015年7月-2016年7月来本院就诊的皮肤性病科门诊患者、其他科室的住院患者、术前患者、产前检查孕妇及HIV自愿检测者，共1618例患者作为研究对象。所有患者均确诊患有梅毒，且诊断符合GB 15974-1995梅毒诊断标准。晨起采集空腹血样，室温静置，取上层血清进行检测，以TPPA检测法确诊梅毒阳性作为金标准。用TP-ELISA和TRUST再次检测，同TPPA的检测结果进行比较。TPPA法确证梅毒患者325例，其中男208例，女117例，年龄1～63岁，平均（37.4±5.2）岁。1293例未患梅毒的患者中，男630例，女663例，年龄1～58岁，平均（40.6±7.7）岁。未患梅毒的和患有梅毒的患者的一般资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。此研究已通过佛山市南海区第三人民医院伦理学委员会批准，所有患者均已签署了知情同意书。

1.2 排除标准 根据患者的病史、实验室检查及个体情况指定排除标准如下：（1）采血后需要手术者除外；（2）采血后需要输血治疗的患者除外；（3）患有类风湿关节炎、系统性红斑狼疮、急慢性感染、妊娠、高丙种球蛋白血症患者，进行梅毒检查显示阳性，需结合其他诊断疾病的实验室检查指标后，进行排除。

1.3 方法 样本分别采用颗粒凝集试验（TPPA）、酶联免疫吸附试验（TP-ELISA）和甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）进行检测，按照说明书进行操作。试验采用TPPA试剂盒（日本瑞士必欧赛乐迪亚TPPA，国食药监械（进）字2009第3402834号，20个测试/瓶×5）、TP-ELISA试剂盒（上海酶联生物科技有限公司，货号：ml023454）、TRUST试剂盒（上海荣盛生物药业有限公司，国药准字S10940058，规格：120人份）。

1.3.1 TRUST 实验步骤 （1）检测前将试剂盒置室温预温30 min。（2）加标本：吸取50 μL血清（浆）置试验卡片圈中，并均匀地涂布在整个卡圈内，不能将标本溢出环圈外面。（3）加抗原：将抗原轻轻摇匀，在每个标本圈中，用专用滴管针头垂直滴加1滴[（60±1）滴/mL，约17 μL/滴）]抗原，不需要手工混匀。（4）反应：将卡片置水平旋转仪上，罩上保湿盖，（100±2）r/min，旋转8 min。（5）从旋转仪中取出卡片后立即在亮光下用肉眼观察结果。用手轻微的旋转或倾斜卡片可有助于弱阳性和阴性标本。结果判读：（1）阳性反应：圆圈内出现中或大的红色絮状物，液体清亮。（2）弱阳性反应：圆圈内出现小的红色絮状物，液体混浊。（3）阴性反应：圆圈内仅见炭颗粒集中于中央一点或均匀分散。

1.3.2 TPPA实验步骤 （1）试剂准备：试验前30 min将待检标本和试剂从冰箱中取出，恢复至室温。（2）加稀释液：每份样本作4孔，用移液器将血清稀释液滴入微量反应板第1孔（100 μL），从第2孔至第4孔各滴25 μL。（3）样本稀释：用移液器取待检血清25 μL置第1孔中，然后以2n的方式从第1孔稀释至第4孔。（4）加对照液：用移液器在第3孔滴入25 μL未致敏粒子；在第4孔滴入25 μL致敏粒子。（5）混合：以不会导致微量反应板内容物溅出的强度混合30 s。（6）反应：加盖置湿盒内，于室温（15～30 ℃）下水平静置。2 h后观察并记录结果。结果判读：首先观察未致敏粒子反应孔是否出现凝集（第3孔），判断试验有效性后，再根据致敏粒子与标本反应孔（第4孔）与致敏粒子是否产生1+～2+凝集反应凝集反应，判断结果。如未致敏粒子反应孔出现凝集（第3孔）为无效试验，需要对标本进行重吸收试验后再进行检测。（1）++：产生均一的凝集，凝集粒子在底部，呈膜状延展。（2）+：粒子环明显变大，其外周边缘不均匀且杂乱的凝集在周围。（3）±：粒子形成小环状，呈现出外周边缘均匀且平滑的圆形。（4）-：粒子呈纽扣状聚集，呈现出外周边缘均匀且平滑的圆形。

1.4 统计学处理 选择SPSS 17.0统计软件进行数据统计，计量资料用（x－±s）表示，比较采用t检验；计数资料以率（%）表示，比较采用 字2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 TPPA、TP-ELISA和TRUST法检测梅毒抗体的阳性率比较 采用三种不同的方法检测1618个标本梅毒抗体的阳性率，见表1。

表1 三种方法检测梅毒抗体的阳性率比较

2.2 TPPA和TP-ELISA检测梅毒抗体的结果 TPELISA检测的阳性符合率为97.5%（312/320）。TPPA作为金标准设定其为对照，TP-ELISA的敏感性为96.0%（312/325），特异性为99.4%（1285/1293），准确率为98.7%（1597/1618），阳性预测率为97.5%（312/320），阴性预测率为99.0%（1285/1298），Youden指数为95.4%（敏感性+特异度-1），见表2。

表2 TPPA和TP-ELISA检测梅毒抗体的结果 例

2.3 TPPA和TRUST检测梅毒抗体的结果 TRUST检测的阳性符合率为98.2%（275/280）。TPPA作为金标准并以其为对照，TRUST检测敏感性为84.6%（275/325），特异性为99.6%（1288/1293），准确率为96.6%（1563/1618），阳性预测率为98.2%（275/280），阴性预测率为96.3%（1288/1338），Youden指数为84.2%（敏感性+特异度-1），见表3。

表3 TPPA和TRUST检测梅毒抗体的结果 例

2.4 TPPA、TP-ELISA和TRUST检测梅毒抗体的诊断效能比较 以TPPA为对照，TP-ELISA的敏感性、准确率与TRUST比较，差异均无统计学意义（P＞0.05），见表4。

表4 TPPA、TP-ELISA和TRUST检测梅毒抗体的诊断效能比较 %

3 讨论

梅毒是由梅毒螺旋体引起的性传播疾病。临床Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期梅毒感染后第1年被称为早期梅毒，自第2年起被称为晚期梅毒。血液扩散（Ⅱ期：继发性梅毒）导致6周～6个月后出现的全身症状，包括发烧、肌痛、骨骼和关节疼痛、转氨酶升高、典型的斑马疹（玫瑰色梅毒）[11-13]。75%未经治疗的患者在Ⅱ期结束后没有进一步症状，但25%患者在感染12个月～10年演变为三级梅毒（Ⅲ期）[14]。Ⅲ期梅毒会引发神经系统和精神系统的并发症，如果未经治疗，可能危及生命。

梅毒螺旋体一旦感染人体，宿主迅速对感染早期被损害的自身细胞以及梅毒螺旋体细胞表面所释放脂类物质做出免疫应答，在3～4周内可产生抗类脂抗原的抗体（亦称为反应素）。甲苯胺红试验（TRUST）利用这种抗体在体外可与0.03%心磷脂、0.21%卵磷脂和0.90%胆固醇发生抗原-抗体反应作为原理。心磷脂、卵磷脂和胆固醇都是醇溶性脂类，遇水形成胶体溶液。当含有反应素的梅毒血清与它们混合时，即粘附在胶体颗粒的周围。经摇动、碰撞，形成抗原抗体复合物，出现凝集颗粒，肉眼即可判定为阳性反应。甲苯胺红不加热血清试验即在抗原中加入甲苯胺红颗粒作为指示物，与待检血清（浆）中的反应素结合，形成肉眼可见的红色絮状物。血清不需灭活，肉眼可观察结果。梅毒螺旋体颗粒凝集试验（TPPA）是用超声裂解梅毒螺旋体抗原致敏明胶粒子，致敏粒子与待检血清（浆）中的梅毒螺旋体抗体结合，产生肉眼可见的颗粒凝集。梅毒螺旋体颗粒凝集试验（TPPA）是一种用来针对检测和滴定梅毒抗体的间接凝集测定试验[15]。梅毒螺旋体酶联免疫试验（TP-ELISA）是以ELISA试验为基础，用梅毒螺旋体抗原包被聚丙乙烯板，加入待检血清和酶标抗原，检测IgG、IgM抗体[16]。甲苯胺红试验（TRUST）是一种非梅毒螺旋体抗原血清试验[17-20]。用心磷脂、卵磷脂、胆固醇作为抗原检查血清中的反应素，用于初筛。非梅毒螺旋体抗原血清试验价格低廉、降低检测成本但其检测敏感性差，容易漏检。梅毒螺旋体抗原血清试验是技术上最佳的检测方案，但是检测成本较高。

本试验比较了以上三种方法检测梅毒抗体的临床价值。以TPPA法作为金标准，TP-ELISA法的敏感性和准确性较高，TRUST法的特异性和阳性预测率比较高。同时，TP-ELISA的Youden指数比较大。因此，很难评判哪种检测方法适用性最好，三种方法各有优缺点。

综上所述，推荐临床上进行梅毒血清学试验，应该先以非梅毒螺旋体抗原血清试验（TRUST）进行初筛，如果检测结果是阳性，随后用梅毒螺旋体抗原血清试验（TPPA、TP-ELISA）进行进一步确认。三种方法共同使用为梅毒检测提供更有利更准确的诊断证据。

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Comparative Study on Clinical Value of TPPA，TP-ELISA and TRUST in Detecting Syphilis/

HE Sijie，HUANG Cui-fang，XIAN Jie-neng，et al.//
Medical Innovation of China，2017，14（18）：059-062

Objective：To compare the clinical value of treponema pallidum particle agglutination test（TPPA），enzyme-linked immunosorbent assay（TP-ELISA） and toluidine red unheated serum test （TRUST）in the detection of syphilis.Method：Specimens of 1618 patients （including dermatology and STD clinic patients，patients in other departments，patients before surgery，pregnant women and HIV voluntary testing） in our hospital from July 2015 to July 2016 were selected and tested with TPPA，TP-ELISA and TRUST，the detection rate，sensitivity，specificity，positive predictive value，negative predictive value and Youden index of the three detection methods were compared.Result：The positive rates of TPPA，TP-ELISA and TRUST were 20.1%，19.8% and 17.3%，respectively.Using TPPA as control，the positive coincidence rate of TP-ELISA was 97.5%，the sensitivity，specificity，accuracy rate were 96.0%，99.4%，98.7%，respectively.The positive coincidence rate of TRUST was 98.2%，and the sensitivity， specificity and accuracy rate were 84.6%，99.6% and 96.6%，respectively.When the sensitivity and accuracy rate of TP-ELISA were compared with TRUST，the differences showed no statistically significant （P＞0.05）.Conclusion：TPPA，TP-ELISA and TRUST can be used to detect syphilis，but the accuracy rate， sensitivity， specificity of the three methods are different，clinical methods should be combined with clinical symptoms and diagnosis of syphilis， so as to provide better reference for the diagnosis.

TPPA； TP-ELISA； TRUST； Syphilis； Clinical value

The Third People’s Hospital in Nanhai District of Foshan City，Foshan 528244，China

10.3969/j.issn.1674-4985.2017.18.016

2017-04-20） （本文编辑：张爽）

广东省医学科学技术研究基金项目（A2016628）

①广东省佛山市南海区第三人民医院 广东 佛山 528244

何思杰