卵形鲳鲹刺激隐核虫病组织病理学研究

陈福艳，梁万文，陈 明，黄 婷，李莉萍，雷爱莹，王 瑞，杨学明，罗洪林，欧阳贤华

(广西水产科学研究院，广西水产遗传育种与健康养殖重点实验室，广西 南宁 530021)

卵形鲳鲹刺激隐核虫病组织病理学研究

陈福艳，梁万文，陈 明，黄 婷，李莉萍，雷爱莹，王 瑞，杨学明，罗洪林，欧阳贤华*

(广西水产科学研究院，广西水产遗传育种与健康养殖重点实验室，广西 南宁 530021)

利用组织切片、HE染色和显微观察的方法，研究了卵形鲳鲹患刺激隐核虫病组织病理变化。组织切片结果可见，感染鱼的鳃和体表受到直接机械损伤；鱼体在缺氧状态下，入侵的刺激隐核虫有可能对机体产生某种毒素，也可能因刺激隐核虫感染而引发细菌或病毒继发性感染，造成肝、脾和肾脏不同程度的间接性损伤。表现为鳃部机能严重受阻，肝脏脂肪肝变性严重，肝索紊乱，血窦缩小或消失；脾脏组织结构不清晰，有充血、出血和坏死等症状；肾脏结构不清晰，肾小管及肾小体缩小，肾小管细胞融合(黏连)，组织间隙松散扩大，局部细胞坏死，存在脂肪粒。

卵形鲳鯵(Trachinotusovatus)；刺激隐核虫(Cryptocaryonirritans)；组织病理学

卵形鲳鲹(Trachinotusovatus)是我国新兴名特优海水养殖品种之一。近年来，卵形鲳鲹养殖业在福建、广东、海南、广西等沿海地区迅猛发展，而且随着深海网箱养殖技术的进步，该养殖业得到进一步发展。但随着养殖规模的不断扩大，各种病害暴发日益频繁，尤其是刺激隐核虫(Cryptocaryonirritans)病，严重威胁卵形鲳鲹养殖业的健康发展。目前由于该病尚无有效的治疗方案，因此造成每年秋季快上市的大规格成品鱼大批量死亡，且死亡率高达100%，这给养殖户造成巨大的经济损失[1-4]。国内外关于卵形鲳鲹刺激隐核虫病的报道诸多，如但学明[5]、黄玮[6]、陈添铮[7]等对卵形鲳鲹和刺激隐核虫进行了研究，满其蒙[8]、赵典惠[9]对细菌感染卵形鲳鲹组织病理学进行报道，但有关刺激隐核虫感染卵形鲳鲹组织病理学研究未见报道，因此笔者对其进行研究，旨在为该病的病理及防治研究提供理论参考。

1 材料与方法

1.1 材料及仪器

鱼安定MS222，福尔马林，无水酒精、二甲苯、石蜡，Leica RM2235切片机，Nikon ECLIPSE 80i显微镜，立体显微镜YYL-440。

1.2 采样

试验鱼来源于钦州龙门港海水网箱养殖鱼，规格为(400±25)g。对健康鱼和患病鱼进行常规检查和流行病学调查，依据资料[10]对寄生虫进行诊断。

1.3 组织切片的制备及观察

选取健康鱼和感染鱼各6尾，经MS222麻醉后，用剪刀剪取鱼鳃组织，解剖刀切取皮肤、肝、脾和肾脏组织适量(3 mm×3 mm)，将各组织块置于10%的中性福尔马溶液浸泡24 h以上，然后用梯度酒精脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，切片，HE染色，中性树胶封片[11]。Nikon ECLIPSE 80i显微镜观察拍照[12]。

2 结果

2.1 感染鱼的症状

感染鱼活动缓慢，食欲下降或不进食，呼吸困难，常用身体摩擦网片或用尾鳍拍打水面。体表黏液增多，宛如身披轻纱，局部出现红肿、充血和出血现象；部分鳍条充血、溃烂；鳃部暗红、肿胀、充血和出血，黏液增多而将鳃丝粘连成片(图1-2)。体表、鳍条和鳃部附着大量“小白点”(图1-1，图1-2)，镜检确诊为刺激隐核虫(图1-3，图1-4)。

注：1～2为感染鱼；3为刺激隐核虫附着鳃丝(×100)；4为包囊(×100)。
Notes：1～2 indicated infected fish；3 indicated parasitic gill filaments(×100)；4 indicated packaging(×100).

2.2 组织病理学观察

1)鳃组织：健康鱼的鳃部鲜红、黏液正常；鳃丝切片可见，鳃小片整齐且梳形排列，呼吸上皮细胞、柱细胞、血窦等结构清晰(图2-1)。感染鱼鳃部切片可见，由于刺激隐核虫感染，局部组织肿胀、组织增生，使鳃丝和鳃小片呈波浪状弯曲变形，局部细胞坏死和脱落，结构不完整(图2-2，图2-3)。鳃丝上附着大小不等的刺激隐核虫，局部组织被刺激隐核虫挤压或诱导组织细胞增生，阻碍血细胞流通(图2-2～图2-6)。

注：1.健康鱼切片HE×400(a.鳃丝软骨；b.鳃小片)；2.感染鱼鳃切片HE×200(a.鳃丝软骨；b.鳃小片局部肿胀、弯曲，细胞脱落)；3.感染鱼鳃切片HE×400(a.红肿/弯曲变形；b.细胞脱落)；4.感染鱼鳃切片HE×400(刺激隐核虫)；5.感染鱼鳃切片HE×400(刺激隐核虫)；6.感染鱼鳃切片HE×400(刺激隐核虫)。
Notes：1.The historigal section of healthy fish’s gill HE×400(a.gill filament，b.gill lamella)；2.The historigal section of infected fish’s gill HE×200(a.gill filament，b.local swelling and bending of gill lamella，cell shedding)；3.The historigal section of infected fish’s gill HE×400(a.redness/bending and deformation，b.cell shedding)；4.The historigal section of infected fish’s gill HE×400(Cryptocaryonirritans)；5.The historigal section of infected fish’s gill HE×400(Cryptocaryonirritans)；6.The historigal section of infected fish’s gill HE×400(Cryptocaryonirritans).

2)皮肌：健康卵形鲳鲹体表光滑、黏液较少。感染鱼皮肌组织切片可见，表皮层增厚，黏液细胞数量增多，分泌黏液亢奋，中间层增厚；小滋养体已进入中间层与生发层，真皮层和肌肉层没有发现刺激隐核虫(图3-1，图3-2)。

注：1.感染鱼皮肤组织切片HE×100(a.刺激隐核虫；b.表皮层)2.感染鱼皮肤组织切片HE×200(a.刺激隐核虫)。
Notes：1.The transverse of infected fish’s back skin HE×100(a.Cryptocaryonirritans，b.surface layer)；2.The transverse of infected fish’s back skin HE×200(a.Cryptocaryonirritans).

3)鳍条：健康鱼鳍条完整，无附着物。感染鱼的鳍条局部充血、溃烂，黏液增加，常附着脏物，肉眼可见附着刺激隐核虫(图4-1，图4-2)。

注：1.刺激隐核虫；2.充血。
Notes：1.Cryptocaryonirritans；2.Congestion.

4)肝脏：健康鱼与感染鱼肝脏脂肪变性，肝细胞肿胀，结构不清晰，胞浆内充满大小不等的空泡(脂肪滴)，有的细胞核被挤到一侧(图5-1)；感染鱼脂肪肝变性更明显，肝索结构紊乱，有的变小或消失；部分胰腺内有较大空泡，血管内有大量红细胞、白细胞，局部充血、淤血和水肿(图5-2)。

注：1.健康鱼肝脏切片HE×200；2.感染鱼的肝胰腺切片HE×400(a.肝肿胀；b.血窦变大；c.胰腺内瘀血、各种白细胞增多；d.大脂肪粒)。
Notes：1.The transverse of healthy fish’s liver HE×200；2.The transverse of infected fish’s hepatopancreas HE×400(a.liver swelling，b.sinusoid bigger，c.blood stasis in the pancreas and various leukocytes increasing，d.large fat granule).

5)脾脏：健康鱼的脾脏结构清晰，脾膜、红髓、白髓等排列整齐致密，脾小体结构清晰(图6-1)。感染鱼脾脏红髓与白髓的界限模糊不清，小梁、脾小体组织清晰，白髓内细胞减少，许多淋巴细胞坏死，脾血窦、间质散布红细胞，大静脉内出现大量红细胞，脾脏淤血(图6-2)。

注：1.健康鱼脾脏切片HE×400；2.感染鱼脾脏切片HE×200(a.小梁；b.脾索；c.脾血窦；d.淤积)。
Notes：1.The transverse of healthy fish’s spleen HE×400；2.The transverse of infected fish’s spleen HE×200(a. trabecula，b.splenic cord，c.splenic sinus，d.blood stasis).

6)肾脏：健康鱼肾脏组织结构完整清晰，肾小管、肾小球、肾单位等排列整齐(图7-1)。感染鱼肾脏结构模糊，局部充血，间质肿胀出血；有的肾小管、肾小球萎缩；肾小管内部轮廓不清晰，两边上皮细胞相互溶合粘连，有些坏死崩解；肾小管和肾小体存在少许空泡(脂肪滴)(图7-2)。

注：l健康鱼中肾切片HE×400(a.肾小体；b.近端小管；c.远端小管)； 2感染鱼中肾切片HE×400(a.间隙扩大；b.肾间质肿胀、出血；c.肾小管坏死；d.肾小管细胞溶合)。
Notes：1.The transverse of healthy fish’s mesonephros HE×400(a.renal corpuscle，b.proximal convoluted tubule，c.distal convoluted tubule)；2.The transverse of infected fish’s mesonephros HE×400(a.gap expansion，b.renal interstitium swelling and bleeding，c.uriniferous tubules necrosis，d.uriniferous tubules cell fusion).

3 讨论

从组织切片观察可知，刺激隐核虫对鱼鳃部的损伤是致命性的。一方面，由于刺激隐核虫的入侵，鳃部组织受刺激产生大量黏液，黏液覆盖整个鳃部，鳃丝粘连甚至溶合在一起，不利于鳃小片伸张，阻碍水体流通和气体的有效交换，也减少了有害物质的排泄，这是造成鱼窒息性死亡的外因之一；另一方面，鳃丝受损严重，引起局部肿胀、上皮组织增生，表现出鳃丝及鳃小片严重扭曲，局部细胞坏死和脱落，且有出血和充血现象，因此在鳃组织内部的血液循环不通畅，使作为主要呼吸器官的鳃组织难于进行气体交换，这是造成鱼缺氧的重要内因之一。此结果与雷曼红研究的多子小瓜虫感染金鱼的组织病理学结果相似[13]。临床观察到濒死的刺激隐核虫感染鱼表现出活动缓慢、呼吸困难的症状，表明鱼机体处于严重缺氧状态，最终窒息而亡[1-4，14]。

刺激隐核虫虽然没有寄生于卵形鲳鲹的各内脏器官，没有对其造成直接性机械损伤，但鱼体在缺氧状态下，入侵机体的刺激隐核虫有可能对机体产生某种毒素，也可能因刺激隐核虫感染而引发细菌或病毒继发性感染，使鱼体的鳃、肝、脾和肾脏受到不同程度损伤，生理机能出现紊乱，对机体造成伤害。研究[15-16]表明刺激隐核虫重度感染后，鱼体免疫因子的释放受到抑制或出现紊乱，使其免疫能力下降。组织切片结果表明感染卵形鲳鲹的肝、脾和肾脏组织的血管内红细胞局部增多，表现为不同程度淤血，血液循环不畅，局部组织肿胀，细胞增大或坏死，可见各组织器官发生不同程度的生理机能障碍、调节能力降低，可能进一步加速感染鱼死亡。

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Histopathology study on theCryptocaryonirritansdisease ofTrachinotusovatus

CHENFuyan，LIANGWanwen，CHENMing，HUANGTing，LILiping，LEIAiying，WANGRui，YANGXueming，LUOHonglin，OUYANGXianhua*

(Guangxi Key Laboratory for Aquatic Genetic Breeding and Healthy Aquaculture，Guangxi Academy of Fishery Sciences，Nanning 530021，China)

Tissue sections，HE staining and microscopic observation were adopted to investigate the histopathological changes ofTrachinotusovatuswith theCryptocaryonirritansdisease. Through histological examination，the results showed that the gills and skin of infected fish were suffered with direct mechanical injury.When the fish under the hypoxia condition，theCryptocaryonirritansmay produce toxins，or cause bacterial or viral infection，thus cause indirect injury of liver，spleen and kidney in different degrees.The injure had following performances：the gill function was seriously blocked，the fatty liver degeneration was severe ，hepatic cord was disordered，blood sinus shrunk or disappeared；histological structure of spleen was unclear and had symptoms such as congestion，hemorrhage and necrosis；renal structure was unclear，renal tubule and renal corpuscle were shrunken，renal tubule showed fused cells(adhered)，interstitial space was loose and expanded，and local cell died and had fatty granules.

Trachinotusovatus；Cryptocaryonirritans；histopathology

2017-02-27

自治区直属公益性科研院所基本科研业务专项资金项目：卵形鲳鲹刺激隐核虫病病理学研究(GXIF-2014-009)；广西壮族自治区水产畜牧兽医局科技计划项目：广西养殖卵形鲳鲹细菌性疾病“快速选药”试剂盒的研究与应用(桂渔牧科1304534).

陈福艳，(1979-)，女，副研究员，从事水生动物病害防治.E-mail：215174469@qq.com

欧阳贤华(1978-)，男，助理工程师，从事水产养殖与病害防治.E-mail：419625825@qq.com

陈福艳，梁万文，陈 明，等.卵形鲳鲹刺激隐核虫病组织病理学研究[J].渔业研究，2017，39(3)：181-187.

S941.51+4

A

1006-5601(2017)03-0181-07