决明退障口服液指纹图谱研究

陈寅生，赵颖，李文

(南京市中医院，江苏 南京 210001)

决明退障口服液指纹图谱研究

陈寅生，赵颖*，李文

(南京市中医院，江苏 南京 210001)

目的：建立了决明退障口服液的HPLC-DAD指纹图谱分析方法，确定了部分特征峰的归属。方法：采用HPLC法，Dikma Diamonsil C18色谱柱( 250 mm×4.6 mm,5 μm)，以乙腈-0.1%醋酸水为流动相梯度洗脱，流速为1.0 mL/min，检测波长280 nm，柱温30℃，进样量10 μL。结果：建立了10批决明退障口服液的指纹图谱，共有28个共有峰，多数峰分离度较好，具有较高的相似度。结论：建立的HPLC指纹图谱有较高的特征性和稳定性，为质量控制提供依据。

决明退障口服液；HPLC；指纹图谱

决明退障口服液为我院常用的医院制剂，包括珍珠母、决明子、枸杞子、白芍、甘草和当归等九味饮片，具有平肝养血，益肾滋阴功效，主要用于治疗白内障，已经有多年的临床应用。医院制剂的质量提升是保持医院特色及其优势的重要内容之一，应当运用现代化的分析检测技术为质量控制提供科学依据。针对中药及其制剂成分复杂多样性，中药指纹图谱技术可以综合反映中药材中各主要成分及其相对含量[1-6]，能有效评价中药制剂的质量的技术评价方法。

1 材料

1.1 仪器与试药

Agilent-1260 Infinity型高效液相色谱仪(包括Chemstation化学工作站、自动进样器、柱温箱、G1315D二极管阵列检测器)，Mettler Toledo XS205 Dual Range型分析天平(瑞士梅特勒～托利多公司)，GWA-UN型超纯水器(北京普析通用仪器有限责任公司)。

决明退障口服液(批号：150618、150730、150827、150924、151019、151119、151212、160109、160124、160404，分别以S1-S10表示)由南京市中医院提供;芍药苷(批号：110736-201438，含量以96.4%计);橙黄决明素(批号：111900-201504，含量以97.5%计)由中国食品药品检定研究院提供;乙腈、甲醇为色谱级;纯化水为自制(经0.45 μm微孔滤膜过滤);冰醋酸为分析级。

指纹图谱分析用软件为中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A 版(国家药典委员会)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Dikma Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；检测波长： 280 nm；柱温 ：30 ℃；流速 ：1.0 mL/min；进样量 ：10 μL；流动相：乙腈-0.1%冰醋酸水溶液，梯度洗脱程序：0～10 min，5%～5%乙腈；10～15 min，5%～8%乙腈；15～30 min，8%～15%乙腈；30～40 min，15%～18%乙腈；40～60 min，18%～30%乙腈；60～80 min，30%～60%乙腈；80～95 min，60%～100%乙腈；95～100 min，100%～100%乙腈[7]。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液

取芍药苷及橙黄决明素对照品适量，精密称定，甲醇配制成芍药苷的浓度为0.766 mg/mL，橙黄决明素为0.020 mg/mL的对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液

分别取决明退障口服液适量，移取2 mL至10 mL量瓶中。加水至刻度，摇匀，过0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

2.3 方法学考察

2.3.1 精密度试验

取批号为160404的口服液样品1份，按“2.2.2”项下方法制备，连续进样6次，考察色谱峰相对保留时间和峰面积。经计算，相对保留时间及峰面积(大于2%)的色谱峰RSD均小于2.7%，表明仪器稳定，精密度良好。

2.3.2 重复性试验

取批号160404的口服液样品6份，按“2.2.2”项下方法制备，分别进样检测，考察色谱峰相对保留时间和峰面积。经计算，相对保留时间及峰面积(大于2%)的色谱峰RSD均小于3.0%，表明方法具有较好的可重复性。

2.3.3 稳定性试验

取批号160404的口服液样品1份，按“2.2.2”项下方法制备，分别在0、4、8、12、24 h进样检测，考察色谱峰相对保留时间和峰面积。经计算，相对保留时间及峰面积(大于2%)的色谱峰RSD均小于3.0%，说明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

2.4 指纹图谱的测定及共有峰的确定

按照确定的指纹图谱检测方法分别检测10批决明退障口服液液相色谱(图2)，对10批样品液相色谱图进行数据分析，结果确定了28个色谱峰为决明退障口服液所共有峰，见图1。

图1 对照指纹图谱

2.5 指纹图谱相似度评价

参照文献[8],采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版”。分别设置参数：(1)参照图谱：采用批号为160404样品的色谱图(S1)作为参照谱图。(2)时间窗宽度：0.10。(3)校正方式：多点校正。校正色谱峰的确定：实验色谱图保留时间为100 min，结果表明特征峰在0～90 min。(4)指纹图谱生成：10批样品色谱图生成指纹图谱见图2，以生成的对照图谱作为相似度计算时校正的参照图谱。将测定获得的10批样品数据采用指纹图谱相似度评价系统与生成的对照指纹图谱进行相似度评价，结果见表1。

图2 10批决明退障口服液指纹图谱

表1 决明退障口服液HPLC指纹图谱相似度数据

上述数据表明，10批样品中有5批样品相似度处于0.8～0.9之间，其余5批决明退障口服液的指纹图谱的相似度均大于0.9，说明本品的批件质量稳定性不高。而部分批次间，如区别于其他批次S2、S3、S6、S9色谱中保留时间为46.5 min具有较大的色谱峰，其紫外全波长扫描图一致，以这四批之间做相似度计算，均大于0.9。

2.6 色谱峰的指认

采用高效液相色谱仪分别检测供试品溶液、对照品溶液，记录色谱图，通过保留时间和紫外全波长扫描的比较，对色谱峰进行指认，共指认了2个色谱峰。16号共有峰为芍药苷，27号共有峰为橙黄决明素。见图3。

图3 芍药苷(S1)与橙黄决明素(S2)色谱图

3 讨论

该方法首次采用同一色谱条件同时检测芍药苷、橙黄决明素2个成分。

色谱条件的确定，通过比较甲醇-水、甲醇-酸水、乙腈-水、乙腈-酸水等溶剂系统观察比较，乙腈-酸水峰型较好；通过比较色谱柱Agilent puls C18、Kromasil 100-5 C18、Dikma Diamonsil C18色谱柱比较，Dikma Diamonsil C18色谱柱塔板数较高，峰型好；在选定的液相色谱条件下，采用二极管阵列检测器对供试品溶液进行测定，综合考虑基线、色谱峰的数目及信号响应值，确定280 nm为最佳检测波长。

本品为水煎煮提取，多为水溶性化学成分，通过指纹图谱初步研究了决明退障口服液的色谱图，可见其成分非常复杂；指标性成分需要利用相对保留时间和全波长紫外图进行对比分析。后续研究可以运用HPLC-MS技术，进一步揭示其成分组成。

通过指纹图谱研究发现本产品批次间一致性较差、药效物质“控制窗”过宽，可能与不同批次间的投料饮片的产地、批次、质量差异有关。下一步需要考察主要差异色谱峰的药味归属[9]，控制其产地或品种。

[1] 聂磊,罗国安,曹进,等.中药二维信息指纹图谱模式识别[J].药学学报,2004,39(2):136-139.

[2] 赵旭，马晓鹏.GC-MS-AMDIS 结合保留指数技术用于缬草挥发性成分指纹图谱的研究[J].中医药信息,2015,32(3):29-31.

[3] 杨柳，张颖，刘季田媛,等.牛膝各化学拆分组分指纹图谱研究[J].中医药信息,2015,32(6):16-19.

[4] 唐先明,何志一,刚宏林.中药指纹图谱在药品质量控制中的应用[J].中医药学报,2014,42(2):86-88.

[5] 刘斌,熊辉朴,成玉,等.补阳还五汤的HPLC指纹图谱研究[J].中医药学报,2016,44(4):5-9.

[6] 郝变,潘丽丽,袁少雄,等.不同品种、产地瓜蒌皮中游离氨基酸类成分指纹图谱研究[J].中医药学报,2015,43(2):14-18.

[7] 闫婕,卫莹芳,胡慧玲.HPLC测定全国不同产地及进口决明子大黄酚与橙黄决明素含量[J].时珍国医国药,2015,27(1):56-58.

[8] 达娃卓玛,尕藏卓玛.健胃消食片HPLC指纹图谱研究[J].中国民族民间医药,2016,25(8):14-16.

[9] 祝明，陈碧莲，石上梅.中药指纹图谱技术在中国药典2015年版一部中的应用[J].中国现代应用药学,2016,33(5):611-614.

Study on the Fingerprint of Jueming Tuizhang Oral Liquid

CHEN Yin-sheng, ZHAO Ying, LI Wen

(NanjingHospitalofTraditionalChineseMedicine)

Objective: An HPLC-DAD fingerprint method for Jueming Tuizhang Oral Liquid was developed and some characteristic peaks were marked. Methods: A Dikma Diamonsil C18 column(250 mm×4.6 mm, 5 μm) was used in HPLC, with acetonitrile-0.1% acetic acid water as mobile phase, under the 280 nm detection wavelength. The column temperature was 30℃ with the flow rate of 1.0 mL/min, the sample volume was 10 μL. Results: 10 batches of HPLC fingerprints were established. 28 common peaks were selected in all samples. Among the obtained fingerprints, most of the detected peaks were separated effectively. Conclusion: The established HPLC fingerprint has repeatability and stability, which provides quality control reference for Jueming Tuizhang Oral Liquid.

Jueming Tuizhang Oral Liquid; HPLC; Fingerprint

2016-12-22

2017-04-28

陈寅生(1974-)，男，副主任药师，研究方向：临床药学、药物经济学和信息药学。

*通讯作者：赵颖(1984-)，女，硕士，主管中药师，研究方向：中药制剂质量标准研究。

R284.1

A

1002-2392(2017)03-0039-02