河湟谷地胃癌患者癌组织生长抑素受体2和CCL7蛋白的表达及临床意义

马玉滨 燕 速 于鹏杰 赵林娟

(青海大学附属医院胃肠肿瘤外科，青海 西宁 810016)

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河湟谷地胃癌患者癌组织生长抑素受体2和CCL7蛋白的表达及临床意义

马玉滨 燕 速 于鹏杰 赵林娟

(青海大学附属医院胃肠肿瘤外科，青海 西宁 810016)

目的 研究河湟谷地胃癌患者癌组织及癌旁组织中生长抑素受体(SSTR)2和细胞趋化因子(CCL)7蛋白的表达及与临床病理特征的关系。方法 收集河湟谷地新发胃癌患者癌组织及癌旁组织各60例，免疫组化法检测SSTR2和CCL7蛋白的表达情况，分析不同临床病理参数对SSTR2和CCL7阳性表达的影响以及二者表达的相关性。结果 SSTR2在胃癌组的阳性表达率较癌旁组低(P<0.05)；CCL7在胃癌组的阳性表达率较癌旁组明显升高，均具有统计学意义(P<0.05)。高、中分化胃癌组中SSTR2的阳性表达率明显高于低分化胃癌组(P<0.05)；有浆膜浸润、肿瘤直径大、淋巴结有转移以及TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期者的CCL7阳性表达率均远远高于无浆膜浸润、淋巴结无转移以及TNM分期为Ⅰ～Ⅱ期者(P<0.05)。SSTR2和CCL7在胃癌组织中的表达无相关性(P>0.05)。结论 SSTR2的缺失和CCL7的高表达可能促进河湟谷地胃癌的发生。

SSTR2；CCL7；胃癌；河湟谷地

尽管世界大部分地区胃癌的发生率已经有明显下降，但在我国仍是第二位的癌症死因，尤其在我国西北部地区〔1，2〕。作为西北青藏高原上的省份之一，青海省平均海拔在3 000 m以上，是我国胃癌的高发地区〔3〕。河湟谷地位于青海省东部，位于黄河上游与湟水河流域之间，海拔相对较低，平均约2 000 m，是青海省主要农业区，人口稠密。研究显示近10年来河湟谷地胃癌的检出率及死亡率呈现明显上升趋势，且呈现出特殊的流行病学特征——高侵袭性，该地区胃癌具有高病死率主要是因为该地区的进展期肿瘤容易侵犯神经及脉管〔4〕。生长抑素(SST)是一种能够抑制垂体释放生长激素的环状多肽类激素，主要通过5种生长抑素受体(SSTR)发挥作用〔5〕，其中SSRT2还可诱导细胞凋亡，在肿瘤组织中呈低表达，并与患者预后相关〔6，7〕。但对胃癌中SSRT2变化的报道不多，且结果不尽相同〔8～12〕。此外，在肿瘤发生发展中，细胞趋化因子(CCL7)起着重要作用，通过结合肿瘤细胞表面受体CCR1、CCR3增加肿瘤侵袭性〔13〕。但在胃癌方面，仅有1篇报道认为CCL7在胃癌组织中高表达，与患者不良预后有关〔14〕。本文探讨SSTR2和CCL7在河湟谷地胃癌患者中的表达及临床意义。

1 资料与方法

1.1 研究对象 对2015年3～10月青海大学附属医院胃肠外科住院的病人进行筛选，选取世居于河湟谷地、经纤维胃镜检查，取病理活检明确诊断为胃癌，且接受胃癌根切手术者60例，年龄46～75〔平均(55.5±7.1)〕岁，男33例，女27例；肿瘤直径<5 cm者37例，≥5 cm者23例；TNM分期：Ⅰ～Ⅱ期39例，Ⅲ～Ⅳ期21例；肿瘤组织分化程度：高、中分化组26例，低分化组34例；有淋巴结转移28例；浆膜浸润24例。术中取胃癌组织标本及相应癌旁非肿瘤黏膜组织(距肿瘤边缘>5 cm)置10%～13%甲醛溶液中固定，石蜡包埋备用。

1.2 纳入及排除标准 纳入标准：性别不限；有完整的临床病理资料；世居青海省河湟谷地(两代及两代以上)；新发原发性胃癌病例；可接受根治性手术治疗等。排除标准：接受过放化疗治疗；合并免疫、神经等系统疾病等。

1.3 实验步骤

1.3.1 HE染色 ①修整蜡块，连续匀速切片，每片厚度约4 μm，温水中展平，放到经过预处理的载玻片上，烘干；②二甲苯及乙醇梯度处理，对石蜡切片进行脱蜡，复水；③苏木精液染色；④1%盐酸乙醇分色；⑤自来水浸泡15 min至反蓝；⑥将切片置伊红染色液中1～3 min，蒸馏水稍洗；⑦常规脱水，透明；⑧中性树脂封片，镜检。

1.3.2 免疫组化法 ①切片、脱蜡、复水：同HE染色。②抗原微波修复：枸橼酸盐缓冲液微波修复(中低火)10 min，室温冷却至常温，重复一次；3%H2O2，10 min；PBS液洗3次。③封闭：封闭液(PBS，5% BSA+0.3% Triton X-100)室温孵育1 h。④孵育抗体：加入适量一抗(SSTR-2兔源一抗购自Abcam公司，用封闭液以1∶100稀释；CCL-7兔源一抗购自SAB公司，用封闭液以1∶20稀释)4℃过夜，PBS液洗3次；辣根酶标记的二抗(羊抗鼠IgG-HRP，购自Jackson ImmunoResearch，用封闭液以1∶500稀释)室温孵育2 h；PBS液洗3次。⑤DAB溶液显色，观察至显色满意，流动水冲洗终止显色；⑥苏木素复染10 s，1%氨水退紫，梯度酒精脱水，二甲苯透明。⑦中性树胶封片，镜检。⑧质量控制：用试剂公司所提供的已知结果为阳性的切片作为阳性对照；阴性对照组则用PBS液替代一抗。

1.4 结果判定 使用随机选取的5个高倍镜(×400)进行观察，统计观察患者的癌细胞和癌旁正常胃黏膜上皮细胞的阳性细胞数和着色深度，并进行计分。共设定为0～4分，0分代表阴性表达，1分代表阳性表达细胞数≤10%，2分代表阳性表达细胞数在11%～50%，3分代表阳性表达细胞数在51%～75%，阳性表达细胞数超过75%为4分。同时根据阳性细胞表达的着色深度进行区分：0分代表基本不着色，1分代表淡黄

色，2分代表棕黄色，3分代表棕褐色。统计的分数相乘，得数≤3分的计为表达阴性(-)，得数>3的则为表达阳性(+)。

1.5 统计学方法 采用SPSS20.0软件进行χ2检验或Fisher精确概率法。

2 结 果

2.1 SSTR2和CCL7蛋白在胃癌与癌旁组织中的表达 SSTR2和CCL7蛋白在免疫组化染色中呈现棕褐色颗粒，在细胞质及细胞膜内表达。见图1。胃癌组织中，SSTR2表达阳性28例(46.7%)，癌旁组织中，SSTR2表达阳性44例(73.3%)，二者差异显著(χ2=8.889，P=0.003)。胃癌组织中CCL7表达阳性33例(55.0%)；癌旁组织CCL7表达阳性17例(28.3%)，二者差异显著(χ2=8.777，P=0.003)。见图2。

图1 胃癌及癌旁组织HE染色(×400)

2.2 胃癌组织中SSTR2的表达与临床病理特征的关系 SSTR2在低分化胃癌组织中的阳性表达率较高、中分化胃癌组织明显降低(P<0.05)；SSTR2的阳性表达与患者性别、年龄、肿瘤大小、浸润深度、淋巴结转移、TNM分期均无关(P>0.05)。见表1。

2.3 胃癌组织中CCL7的阴性表达与临床病理特征的关系 胃癌患者中CCL7的阳性表达与性别、年龄、肿瘤分化程度无明显的关系(P>0.05)，与肿瘤大小、癌组织浸润程度、淋巴结转移、TNM分期有关(P<0.05)。见表1。

2.4 SSTR2和CCL7在胃癌中表达的相关性 在SSTR2表达阳性的胃癌组织中，CCL7阳性表达率为60.7%(17/28)，在所有SSTR2的表达为阴性胃癌组织中，CCL7阳性表达率为50.0%(16/32)，差异无统计学意义(χ2=0.693,P=0.405)，表明二者在胃癌组织中的表达无相关关系。

3 讨 论

对于胃癌组织中SSTR2的研究不多，结果也有出入。武华等〔8〕研究指出，SSTR的表达具有多样性，多种亚型SSTR可以在胃癌组织和胃良性组织中检测出表达结果，而SSTR2在胃癌组织中表达比较低，但与患者性别、肿瘤大小、肿瘤浸润深度、淋巴结转移及TNM分期均未见明显相关；与高分化胃癌相比，低分化胃癌组织中SSTR的表达降低，但无统计学意义(P>0.05)。江兴松等〔9〕认为SSTR2与胃癌有无淋巴结转移及胃癌分化程度有关。但杨晓莉等〔10〕则发现SSTR2在胃癌及癌旁组织均低表达，差异无统计学意义。范学科等〔11〕在基因和蛋白水平的研究得出同样结论。梁君铭等〔12〕则表明，SSTR2在胃正常组织的阳性表达率明显高于胃癌组织，该差异具有统计学意义(P<0.05)。Liu等〔13〕也有类似发现，且在胃癌组织中尤其是低分化的胃癌组织中SSTR的表达相对更低。CCL7是CC趋化因子亚族一员，主要在内皮细胞、单核细胞、肿瘤细胞等表达，进入内质网后经过系列的加工和修饰，分泌至胞外，发挥的作用包括趋化作用、引发钙内流、肝素结合等〔14〕。免疫组化法和RT-PCR法显示大肠癌肝转移中，肿瘤细胞CCL7的表达明显高于正常肠上皮细胞，推测CCL7在促进肿瘤远处转移中起到相当重要的作用〔15〕，对于胃癌与CCL7相关性的报道很少。

本文结果提示SSTR2的缺失可能在胃癌的发生发展中起到一定作用。SSTR2属于特异性的生长抑素受体，受SST、SSTA激活后可能通过环腺苷酸、促分裂原活化蛋白激酶、钙离子依赖性蛋白激酶等途径发挥抑制肿瘤细胞增殖的作用；也可通过抑制促肿瘤生长的细胞因子或激素的合成与分泌，阻滞细胞周期，抑制肿瘤血管形成〔6，7〕。因此推测由于SSTR2的低表达，影响了上述信号转导途径，SST抑制胃黏膜细胞增殖的能力下降，凋亡细胞减少，这可能是胃癌发生的原因之一。此外，本研究还发现SSTR2在河湟谷地胃癌组织中的低表达与分化程度密切相关，分化程度越高，SSTR2阳性表达率越高，而与其他临床病理因素无关。据此认为，胃癌的恶性程度与SSTR2有关联，且SSTR2可能具有调控胃癌组织分化的作用，在胃癌的发展中起到一定作用。然而研究发现，SSTR2在胃癌中的表达与其是否存在淋巴结转移无关，与江兴松等〔9〕的结论相悖，这有待大样本数据的进一步确认。

本文提示CCL7的表达上调可能在胃癌的侵袭及转移过程起到了一定的作用，这与Hwang等〔14〕的研究结果相同。恶性肿瘤的侵袭是一个复杂的过程，多数情况下，与细胞外基质和肿瘤细胞周围结缔组织的降解及破坏有关，而CCLs表达水平的增加可募集髓样细胞至肿瘤病灶处，这些髓样细胞分泌MMP9、MMP2，可通过破坏组织学屏障、促进新生血管形成等促进肿瘤侵袭和转移。本研究提示CCL7在胃癌的进展及侵袭转移中发挥一定作用。

此外，SSTR2和CCL7在胃癌患者中的表达无相关关系，可能二者在胃癌中表达受到的影响因素不同，也可能是本次实验选取的样本较少或使用的实验方法不同导致。因此，下一步拟扩大样本量，应用PCR法从DNA水平验证，并通过基因转染及免疫印迹法探讨SSTR2和CCL7在胃癌侵袭及转移中可能涉及的信号途径。

1 Bray F，Ren JS，Masuyer E，etal.Global estimates of cancer prevalence for 27 sites in the adult population in 2008〔J〕.Int J Cancer，2013；132(5)：1133-45.

2 Ang TL，Fock KM.Clinical epidemiology of gastric cancer〔J〕.Singapore Med J，2014；55(12)：621-8.

3 燕 速，李 斌，吴俊麒.河湟谷地胃癌临床流行病学特征分析〔J〕.中国癌症杂志，2014；24(4)：246-51.

4 Su Y，Bin L，Jun QW，etal.Changes in the clinicopathological characteristics of gastric cancer in Hehuang Valley of China〔J〕.Chin German J Clin Oncol，2014；13(2)：63-8.

5 Xu C，Zhang H.Somatostatin receptor based imaging and radionuclide therapy〔J〕.Biomed Res Int，2015；2015：917968.

6 Song KB，Kim SC，Kim JH，etal.Prognostic Value of Somatostatin Receptor Subtypes in Pancreatic Neuroendocrine Tumors〔J〕.Pancreas，2016；45(2)：187-92.

7 Zhao WY，Zhuang C，Xu J，etal.Somatostatin receptors in gastrointestinal stromal tumors：new prognostic biomarker and potential therapeutic strategy〔J〕.Am J Transl Res，2014；6(6)：831-40.

8 武 华，王小明，常 杰.生长抑素受体亚型在胃癌中的表达及意义〔J〕.肿瘤基础与临床，2009；22(4)：297-301.

9 江兴松，张南征，王小友.人胃癌、癌旁及浅表性胃炎组织生长抑素受体各亚型表达及临床意义〔J〕.徐州医学院学报，2008；28(10)：647-51.

10 杨晓莉，李小京.不同亚型的生长抑素受体在胃癌组织中的表达变化及临床诊断意义〔J〕.世界华人消化杂志，2014；22(28)：4306-11.

11 范学科，贺小华，牛月花，等.人胃癌组织中SSTR2、SSTR5亚型与p-ERK的表达及其相关性〔J〕.中华临床医师杂志，2013；7(22)：9916-9.

12 梁君铭，曾 宽，骆雪梅.胃癌患者VEGF及SSTR表达及与胃癌的相关性研究〔J〕.中国医学创新，2015；12(28)：35-7.

13 Liu J，Chen S，Wang W，etal.Cancer-associated fibroblasts promote hepatocellular carcinoma metastasis through chemokine-activated hedgehog and TGF-β pathways〔J〕.Cancer Lett，2016；379(1)：49-59.

14 Hwang TL，Lee LY，Wang CC，etal.CCL7 and CCL21 overexpression in gastric cancer is associated with lymph node metastasis and poor prognosis〔J〕.World J Gastroenterol，2012；18(11)：1249-56.

15 Cho YB，Lee WY，Choi SJ，etal.CC chemokine ligand 7 expression in liver metastasis of colorectal cancer〔J〕.Oncol Rep，2012；28(2)：689-94.

〔2017-03-15修回〕

(编辑 曹梦园)

马玉滨(1979-)，男，硕士，副主任医师，主要从事胃肠道肿瘤研究。

R735.2

A

1005-9202(2017)11-2713-04；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.11.049