瑞舒伐他汀钙片对大鼠心肌梗死后炎症反应及NF—kB的影响

朱开权

【摘要】目的 研究SD大鼠心肌梗死后服用瑞舒伐他汀钙片对其心肌组织炎性反应及炎症信号通路核转录因子NF-kB（Nuclear factor kB NF-kB）的影响。方法 通过SD大鼠冠状动脉前降支的结扎建立心肌梗死模型，模型成功者随即分为心肌梗死组（MI，n=10）和瑞舒伐他汀钙片组（RC，n=10，10 mg/（kg.d）），另设阴性对照组（Sham，n=10），分别2周后观察；苏木精-伊红染色观察心肌组织病理结构；通过检测NF-kB的mRNA表达量大小对比炎性反应的影响，免疫细胞化学检测各组蛋白表达情况。结果 心肌梗死后2周：（1）与Sham组比较，MI组和RC组心肌组织结构显著异常；与MI组比较，RC组心肌结构明显改善。（2）与Sham组比较，MI组和RC组NF-kB在基因水平上显著增加，差异有统计学意义（P<0.05）；与MI组比较，RC组NF-kB在基因水平上表达显著减少，差异有统计学意义（P<0.05）。结论 瑞舒伐他汀钙片能够减轻大鼠心肌梗死后心肌组织的炎性浸润，下调NF-kB表达。

【关键词】瑞舒伐他汀钙片；心肌梗死；NF-kB

【中图分类号】R542.22 【文献标识码】A 【文章编号】ISSN.2095-6681.2016.27.00.02

【Abstract】Objective To observe the effect of rosuvastatin calcium tablet on the inflammatory infiltration and the expression of nuclear factor-κB （NF-κB） in the inflammatory mediators of myocardial infarction rats.Methods The left anterior descending coronary artery was ligated to establish the rat myocardial infarction model. The surviving rats were randomly divided into myocardial infarction group （MI， n=10） and rosuvastatin calcium group （RC， n=10， 10 mg And the control group （Sham， n=10）. The pathological changes of the myocardium were observed after 2 weeks in each group. The pathologic structure of each group was observed by histopathology. Reverse transcription polymerase chain reaction （RT-PCR） The expression of NF-kB mRNA was detected by immunohistochemistry.Results Compared with Sham group， myocardial tissue of MI group and RC group were significantly abnormal compared with MI group. Compared with MI group， the myocardial structure of RC group was significantly improved. （P<0.01）. Compared with MI group， the expression of NF-κB in RC group was significantly lower than that in MI group （P<0.01）. Compared with Sham group， the expression of NF-κB in MI group and RC group was significantly increased （P

【Key words】Rosuvastatin calcium；Myocardial infarction；NF-kB

心肌梗死后，病理性應激会触发心室重构的发生，事实上所有心肌梗死的病人都会发生心室重构，包括梗死区和非梗死区. 心室重构的发生会导致心衰的形成，影响病人的预后，早期预防心室重构的发生对于预防心力衰竭有重要的作用。炎性反应对心肌梗死后心室重构有较大影响，已经有研究表明抗炎治疗可以改善心肌组织的重构[1]。目前，NF-KB通路被认为是调节免疫，应激，凋亡，心肌缺血再灌注损伤，心力衰竭的最重要的通路。作为炎症反应中的一个主要调控因子，核转录因子（NF-κB）参与了炎症和免疫应答、凋亡及细胞增殖的调控。在非活动性细胞上，细胞内的NF-κB通过P65亚基上的锚定蛋白重复序列与其抑制物IκB结合，形成没有活性的复合物[2]。当其被激活后就会引起一系列炎症因子的表达，从而引起心室的重构。他汀类药物作为一种降脂药物广泛应用在心脑血管疾病中，而且近些年，他汀类药物在改善心室重构，改善预后，提高患者生存率方面，越来越被人所认知[3]。但是瑞舒伐他汀钙片能否在MI活体抑制NF-kB的表达，现在还不明确，本研究以SD-大鼠建立的心肌梗死模型为研究对象，研究瑞舒伐他汀钙片对大鼠心肌梗死后炎性反应和核转录因子表达的影响，进而对探讨人心肌梗死后，瑞舒伐他汀钙片对其心肌组织炎性反应及心室重构的影响积累一定

经验。

1 资料与方法

1.1 一般资料

主要试剂瑞舒伐他汀钙片（可定阿斯利康制药有限公司）、保存组织RNA样本保存液（天根生物科技公司）、总RNA提取试剂盒（天根生物科技公司）、逆转录试剂盒（TaKaRa）、PCR试剂盒（天根生物科技公司）；兔抗鼠核转录因子多克隆抗体（博奥森生物技术公司）、辣根过氧化物酶标记的羊抗兔二抗（北京博奥森）；组织裂解液、SDS-PAGE凝胶配制试剂盒（武汉博士德公司）；免疫细胞化学试剂盒（北京博奥森）、DAB染色试剂盒（C-0010北京博奥森）等。

1.2 方法

实验大鼠30只，水合氯醛腹腔麻醉，气管插管成功，左侧第四肋间开胸暴露心脏，5号丝线结扎冠状动脉前降支，存活大鼠随即分为MI组、RC组，另设sham组（只穿线不结扎）。

样品2周后采集，使用10%KCL液2 mL注入大鼠心室，心脏停搏于舒张期。立即打开胸腔，取出心脏。

RT-PCR实验方法检测NF-kB mRNA表达。按照RNA提取试剂盒指示的步骤提取大鼠心肌组织总RNA并检测其纯度和浓度。按照RT及PCR试剂盒说明书，行RT-PCR反应。RT反应条件为37℃反应15 min（反转录反应），85℃反应5 s（反转录酶的失活反应）4℃为保存温度。PCR反应条件为94℃反应3 min，94℃反应30 s，64℃退火30 s，72℃反应1 min，72℃反应5 min。第2到第4步骤反应30个循环。以β-actin为内参照，进行电泳后，使用凝胶成像系统进行验证，目的片段与β-actin吸光度比值作为目的片段mRNA的相对含量。

苏木精—伊红法进行组织石蜡切片染色，对比各组石蜡切片中心肌细胞形态，及炎症细胞在梗死后心肌组织和非梗死心肌组织的反应以及纤维组织增生情况。

免疫细胞化学法检测核转录因子蛋白的表达，依照免疫细胞化学试剂盒的实验方法，兔抗鼠核转录因子多克隆抗体1：200稀释。PBS液代替一抗作为阴性对照组，棕黄色颗粒为阳性表达，测定出的累积吸光度值为目的蛋白的相对表达量。

1.3 统计学方法

应用SPSS 16.0统计学软件对数据进行分析，计量资料以“x±s”表示，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

各实验组中核转录因子的基因表达含量各组间比较，差异有统计学意义（F=596.18，P<0.05）。与sham组相比较，MI组NF-kB基因表达为6.12倍，差异有统计学意义（P<0.05）。RC组NF-kB基因表达分别为3.7倍，差异有统计学意义（P<0.05）。与MI组相比较，RC组基因表达明显降低，差异有统计学意义（P<0.05）。

苏木精-伊红染色：普通显微镜下，阴性对照组心肌细胞无水肿，结构整齐，心肌细胞间未见炎症细胞浸润及纤维组织的增生。阳性组，心肌梗死区变薄，可见大量炎症细胞浸润，心肌组织有大量坏死，可见排列紊乱的纤维组织代替；非梗死区心肌细胞水肿，可见大量炎性细胞浸润及纤维增生。RC组心肌组织结构均较MI组明显改善。

免疫细胞化学法检测各组核转录因子的蛋白表达：其他两组与阴性对照组（30084.5±3312.32）w比较，心肌梗死组（91782.2±3188.52）w和RC组（70793.5±3167.32）w NF-kB蛋白累积吸光度值显著增加，差異有统计学意义（P<0.05）。与心肌梗死组相比较，RC组蛋白累积吸光度值明显降低，差异有统计学意义（P<0.05）。

3 讨 论

本研究发现通过大鼠心肌梗死模型的建立，分别从阴性对照组，药物干预组，阳性对照组三方面观察，组织切片显示：药物干预组与阳性对照组相比较，梗死区及非梗死区炎性细胞浸润情况明显减轻，从而说明瑞舒伐他汀钙片可以减轻心肌梗死后的炎症反应，通过NF-kB的M-RNA表达及免疫组化蛋白表达的测定，从量化方面进一步证明瑞舒伐他汀钙片可以抑制NF-kB信号通路的激活，从而减轻炎症反应，从而证明瑞舒伐他汀钙片可能通过减轻大鼠心肌梗死后的炎症反应，下调NF-kB表达，从而起到改善心室重构，改善预后的作用，但是本实验仅从动物水平验证，是否在人体心肌梗死后达到同样的治疗作用，尚需进一步研究证明。

参考文献

[1] 黄振华.急性心肌梗死抗炎症治疗对心室重构的影响[J].中国新药与临床杂志，2015，10，24.

[2] Diep QN，EIMabrouk M，Cohn JS.Structure，endothelial function，cell growth，and inflammation in blood vessels of angiotensinⅡinfused rats-role of peroxisome proliferator activated receptorgamma[J].Circulation，2002，105（19）：296-302.

[3] 杨 蕾.他汀类药物在心脑血管疾病中的临床应用[J].临床合理用药杂志，2010，03，53.