树莓组织培养快繁体系的建立

于 非

(黑龙江省农业科学院园艺分院，哈尔滨150069)

树莓组织培养快繁体系的建立

于 非

(黑龙江省农业科学院园艺分院，哈尔滨150069)

以树莓品种“哈瑞太兹”和“红宝玉”1年生枝条带腋芽的茎段为外植体，研究光照时长、植物生长调节剂对腋芽增殖的影响；探讨组培苗生根的最佳培养基，以建立树莓组织培养快繁体系。结果表明：“哈瑞太兹”的培养基为MS+2mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA+30g/L蔗糖+8g/L琼脂；“红宝玉”的培养基为MS+2mg/L 6-BA+0.3mg/L NAA+30g/L蔗糖+8g/L琼脂,光照时长12～14h/d最佳；组培苗最佳生根培养基均为1/2MS+1mg/L IBA+2mg/L NAA+30g/L蔗糖+8g/L。

树莓；培养基；生根；快繁

树莓(Rubusspp.)为蔷薇科悬钩子属植物，灌木型果树，果实为聚合浆果，其根、茎、叶皆有药用价值，颜色鲜艳，口感良好，即可鲜食，也可以加工成果汁、果酱、果冻等多种食品添加剂，可清除氧自由基、提高免疫力、具有美容和抗衰老的作用；富含天然的阿司匹林，可抗血凝、镇痛解热[1]；含有居各类食物之首的抗癌物质，欧洲人称其为“癌症克星”。其营养价值跟经济价值都高于市面上大部分水果。市近年来世界发展最为迅速、及营养和保健于一身的新兴水果[2-3]。

树莓栽培最早起源于欧洲。15世纪中期西欧国家把树莓作为果树开始栽培，末期已经发展成树莓产业；18世纪树莓被引入美洲，19世纪以后成为世界广泛栽培的浆果类果树[4]。据统计，20世纪90年代中期世界树莓总产量已经达到306326 t。我国开发和利用树莓的历史悠久，自古就有食用和药用的记载。李时珍《本草纲目》中称：“悬钩，树生，高四、五尺，其茎白色，有倒刺，故名悬钩”[5-6]。

黑龙江省近几年不断从外地引进优良的树莓品种，“哈瑞太兹”和“红宝玉”属于红树莓类群也称空心莓类群，果实成熟时花托与果实分离。研究树莓组织培养快繁技术对于我省的树莓品种推广及应用具有巨大的意义[7]。本实验研究光照时长、芽萌发最佳培养基、组培苗生根的最佳培养基及培养条件，以建立树莓组织培养快繁体系，提高树莓优质种苗繁殖速度。

1 试验材料

1.1 外植体选择

本试验采用树莓品种“哈瑞太兹”和“红宝玉”一年生枝条带腋芽的茎段为外植体，采集地点为黑龙江省农业科学院园艺分院。

1.2 材料处理

将采集的树莓枝条叶片去除，在流水状态下冲洗4h。冲洗干净后，将枝条剪成1cm左右带1或2个腋芽的茎段，置于超净工作台中70%的酒精中浸30s，无菌水冲洗2次，再放入到0.1%HgCl2中消毒10min，无菌水冲洗3次，接入到培养基上。

1.3 培养基的制作

试验采用的培养基均为MS和1/2MS，附加不同种类和浓度的生长调节剂，蔗糖浓度为 30g/L，琼脂浓度为 8g/L，pH5.4～5.7。

2 实验内容与方法

2.1 不同生长激素对腋芽增殖的影响

腋芽增殖培养以MS为基本培养基进行腋芽增殖培养，附加激素包括细胞分裂素(6-BA)和生长激素(NAA)，激素配比见表1，每一编号处理20瓶，每瓶2个外植体，观察其成活率及增殖情况。

表1 腋芽增殖培养基激素配比表

2.2 光照时长对腋芽增殖的影响

“哈瑞太兹”采用的培养基为MS+2mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA+30g/L蔗糖+8g/L琼脂；“红宝玉”采用的培养基为MS+2mg/L 6-BA+0.3mg/L NAA+30g/L蔗糖+8g/L琼脂。光照时长设为10、12、14、16h/d，每一处理20瓶，每瓶3个外植体。接种25d后调查成活及增殖情况，实验重复3次，取平均值。

2.3 不同生长激素对组培苗生根的影响

生根培养以1/2MS培养基为基本培养基进行生根培养，附加生根素NAA和IBA，激素配比见表2。每一编号处理20瓶，每瓶3个外植体，观察其生根情况。

表2 生根培养基激素配比表

3 结果与分析

3.1 适宜腋芽增殖的生长激素筛选

接种25天后调查成活及增殖情况。结果见表3。

表3 生长激素对腋芽增殖的影响

“哈瑞太兹”和“红宝玉”接种1周后，腋芽开始陆续萌发，25天的时候均有腋芽萌发且开始增殖。从表3中可以看出“哈瑞太兹”成活率以编号8最高，成活率达到87.8%；“红宝玉”成活率以编号9最高，成活率达到86.7%，6-BA浓度升高有利于腋芽增殖，但使用浓度太高会导致生长发育不良。

3.2 适宜腋芽增殖的光照时长

接种25天后调查成活及增殖情况。结果见表4。

表4 光照时长对腋芽增殖的影响

由表4可见，光照时长对“哈瑞太兹”和“红宝玉”成活率有显著的影响。光照12、14h/d“哈瑞太兹”的成活率分别为95.6%和93.4%，“红宝玉”的成活率为94%和97.5%，效果均表现良好，因此，“哈瑞太兹”和“红宝玉”的光照时长应选择在12～14h。

3.3 适宜组培苗生根生长激素筛选

将增殖培养获得的壮苗接入生根培养基中，接种25天后观察生根情况。结果见表5

表5 生长激素对组培苗生根的影响

从表5中可以看出，“哈瑞太兹”和“红宝玉”接种到4号生根培养基中生根率均最高，分别为85.7%和88.7%。

4 结论与讨论

实验结果发现，对于促进两个树莓品种腋芽萌发及生长，“哈瑞太兹”的最佳培养基为MS+2mg/L 6-BA+0.2mg/L IAA+30g/L蔗糖+8g/L琼脂；“红宝玉”的最佳培养基为8：MS+2mg/L 6-BA+0.3mg/L IAA+30g/L蔗糖+8g/L琼脂，光照时长均为12～14h/d有利于芽的增殖。适宜“哈瑞太兹”和“红宝玉”生根培养基为1/2MS+1mg/L IBA+2mg/L NAA+30g/L蔗糖+8g/L琼脂。

在实验过程中发现，不同季节取材对外植体的污染率、发芽及褐化都有明显的影响，其中春季4～5月取材的效果最好；生根培养受温度的影响也较大，树莓组培苗生根温度应控制在22～25℃为最佳；激素浓度过高，极易导致树莓组培苗枯死，因此在实验时应严格控制激素浓度。

[1]蒋桂华,吴延军,谢鸣,等.树莓、黑莓组织培养及遗传转化研究进展[J].果树学报,2006(4):593-598.

[2]朴日子,曹后男,陈艳秋,等.无刺红树莓组织培养快速繁殖技术研究[J].吉林农业大学学报,2006(4):411-414.

[3]李维林,李海燕,王小敏,等.黑莓和树莓组织培养研究进展[J].林业科技开发,2009(3):9-14.

[4]王岳英.树莓组织培养最佳外植体材料试验[J].山西林业科技,2009(2):12-13,30.

[5]解瑞彬,李秋菊,曹媛媛,等.树莓的组织培养快繁研究[J].天津农业科学,2009(3):23-25.

[6]崔雪艳,王海新.树莓组织培养技术[J].现代农业科技,2009(12):42,45.

[7]王岳英.树莓组织培养生根炼苗技术[J].东北林业大学学报,2010(6):121-122.

Establishment ofRubusspp. Tissue Culture Rapid Propagation System

Yu Fei

(Horticultural Sub-academy of Heilongjiang Academy of Agriculture Sciences, Harbin 150069)

This experiment with raspberry varieties “Heritage” and“Hongbaoyu”annual branches stem segment with axillary bud as explants，Study the illumination time、The influence of plant growth regulator on axillary bud germination；The best medium somaclone take root，To establish a raspberry tissue culture system of rapid propagation.The results show that：“Haritage” culture medium for MS + 2 mg/L 6-BA + 0.2 mg/LNAA 30 g/L + sugar + 8 g/L AGAR；“Hongbaoyu” medium for MS + 2 mg/L 6-BA + 0.3 mg/LNAA 30 g/L sugar + 8 g/L AGAR.The best illumination time 12 -14 hours/day；Somaclone best rooting medium are 1/2MS+1mg/LIBA+2mg/LNAA+30g/L sugar +8 g/L AGAR.

Tree blackberry; Culture medium; Take root; Rapid propagation

2016-11-28

于非(1986-)，女，硕士研究生，实习研究员，从事植物组织培养的研究,E-mail：37880420@qq.com。

S663.2

A

DOI.:10.13268/j.cnki.fbsic.2017.03.003