规模化猪场消毒效果的评估分析

冯晓友，黄毅，刘芳

（河南省正阳种猪场，河南正阳463612）

规模化猪场消毒效果的评估分析

冯晓友，黄毅，刘芳

（河南省正阳种猪场，河南正阳463612）

随着养猪业的快速发展，规模化程度不断提高，在提高了养殖效益的同时，疫病的多发也成为困扰养殖场的重要问题。疫病的流行必须具备三个要素：传染源、传播途径和易感动物。在养猪场，有时虽然没有疫病的发生，但外界环境中存在传染源，病原体就会通过空气、饲料、人员、饮水等途径入侵，进而引起猪群发病。因此采取有效的生物安全措施是切断疫病传播的途径和防止疫病蔓延的有效措施。消毒是一项经常性和基础性的生物安全措施，选取有效的消毒剂和作用方式，是保证消毒效果的关键。

该研究通过评估某规模化猪场中人员消毒、胶靴消毒、熏蒸消毒、环境消毒以及消毒液的有效时间和紫外线消毒效果的好坏，为实际生产应用提供参考。

1 材料与方法

1.1 实验材料

EP管（1.5 ml），大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA），麦康凯培养基，培养皿，棉签，高压锅，操作台，移液枪，枪头等。

1.2 实验方法

1.2.1 人员消毒（消毒间喷雾消毒效果检验）

喷雾消毒前采样：用灭菌棉签涂抹衣服表面5 cm×5 cm大小区域，之后将棉签置于灭菌EP管中，盖好管盖，立即送检或置于4℃冰箱保存。每份样品设置两个重复。

喷雾消毒后采样：人员进入消毒通道前，消毒通道先提前进行气化喷雾，待消毒通道内充满消毒剂气雾时人员进入，待衣服上完全沾满消毒剂气雾（约99秒），走出喷雾消毒通道，消毒剂作用一段时间（依据使用消毒剂的说明书）后采样。采样方法同进入消毒通道前采样，即用灭菌棉签涂抹衣服表面5 cm×5 cm大小，之后将棉签置于灭菌EP管中，盖好管盖，立即送检或置于4℃冰箱保存。每份样品设置两个重复。

1.2.2 胶靴过消毒池效果

过消毒池前采样：胶靴进入消毒池前选择胶靴鞋底部分（鞋底无粪便），用灭菌棉签涂抹，之后将棉签置于灭菌EP管中，盖好EP管管盖，立即送检或置于4℃冰箱保存。每份样品设置两个重复。

过消毒池之后采样：胶靴过消毒池之后经过一段时间（按消毒剂说明书规定的消毒时间），选择与过消毒池前采样临近的部位进行采样，采样面积一致。每份样品设置两个重复。

1.2.3 熏蒸消毒

冲圈干燥后采样：待空圈冲洗干净并干燥后，分别选取地面、猪栏各2～3处作为采样地点（采样地点要包括角落、平面）。用灭菌棉签涂抹地面或猪栏5 cm×5 cm大小区域，之后将棉签置于灭菌EP管中，盖好EP管管盖，立即送检或置于4℃冰箱保存。每个采样地点设置两个重复。

熏蒸后采样：空圈冲洗干燥后进行熏蒸，熏蒸后选取同一地点相同体积进行采样，采集方法同上。每份样品设置两个重复。

1.2.4 环境消毒

圈舍内部带猪喷雾消毒：地面、猪栏各选择一处作为采样地点，分别在消毒前和消毒后（按消毒剂说明书规定消毒药作用时间）进行采样，每次采样在同一地方的不同地点，采样面积应大小一致。

采样方法：棉拭子采样方法，用灭菌棉签涂抹地面或猪栏5 cm×5 cm大小区域，之后将棉签置于灭菌EP管中，盖好EP管管盖，立即送检或置于4℃冰箱保存。消毒前和消毒后的采样点设置两个重复。

环境消毒（圈舍外部消毒）：在猪圈圈舍外区域任选1～2处作为采样地点，分别在消毒前和消毒后（按消毒剂说明书规定消毒药作用时间）进行采样，每次采样在同一地方的不同地点，采样面积应大小一致。

采样方法：棉拭子采样方法，用灭菌棉签涂抹地面或墙壁5 cm×5 cm大小区域，之后将棉签置于灭菌EP管中，盖好EP管管盖，立即送检或置于4℃冰箱保存。

1.2.5 消毒池消毒液有效时间检测

分别在更换消毒液（烧碱）后0 d、1 d、2 d、3 d进行采样。

采样方法：用无菌注射器吸取消毒池底部消毒液1 ml，将注射器针头掰弯并盖上针头帽，立即送检或置于4℃冰箱保存。

1.2.6 紫外线消毒

消毒前采样：紫外线照射前用灭菌棉签涂抹衣服表面5 cm×5 cm大小区域，之后将棉签置于灭菌EP管中，盖好管盖，立即送检或置于4℃冰箱保存。

消毒后采样：紫外灯分别照射30 min和60 min后按照照射前的采样方法进行采样，保存好后送检。

表1显示了不同消毒类别所使用的消毒剂的名称和按照说明书确定的最佳消毒浓度和消毒方法。

表1 不同类型消毒方法使用的消毒剂名称以及浓度和消毒方法

1.2.7 样品的处理

向以上采集的装有棉签的EP管中加入1 ml灭菌生理盐水，剧烈震荡10 min。取0.2 ml样品处理液加入灭菌TSA培养基中，涂菌棒涂布均匀，37℃培养24 h，记录菌落生长情况。

1.2.8 数据统计与分析

杀菌率的计算：用消毒前的菌落总数减去消毒后的菌落总数，再除以消毒前的菌落总数，乘以100%，即可得出不同消毒类型的杀菌率。

2 结果

2.1 人员消毒效果

对人员进出消毒间喷雾消毒效果进行评估，发现消毒前后菌落数差异不大。

2.2 胶靴过消毒池效果

通过对胶靴过消毒池前后消毒效果的验证，发现消毒液对胶靴所携带细菌的平均杀菌率为56.7%。

2.3 熏蒸消毒效果

通过对圈舍的熏蒸消毒研究发现，圈舍冲洗干净并熏蒸后的平均杀菌率要比只进行冲洗干燥的平均杀菌率显著提高。

2.4 环境消毒效果

通过对圈舍内外环境的消毒研究发现，圈舍内外消毒前后的菌落数没有明显的变化，甚至出现消毒后菌落数相对于消毒前的菌落数增加的现象。

2.5 消毒池消毒液有效消毒时间的检测

通过对消毒池中消毒液有效消毒时间的检测，发现随着时间的延长，在2 d的时候菌落数为30个，而在3 d后，菌落数增加到110个。

2.6 紫外线消毒效果

通过对紫外灯消毒前和分别消毒30 min和60 min后采样来验证消毒效果，发现紫外灯消毒30 min相对于消毒前的平均杀菌率为75%，紫外灯消毒60 min相对于消毒前的平均杀菌率为87.5%。

3 分析与讨论

该研究从人员进出的消毒到圈舍的消毒等各个方面进行了研究，得出如下结论：①人员进出喷雾间喷雾消毒和紫外灯分别消毒30 min和60 min的效果不是太明显，这可能和采样有关。但是消毒后相对于消毒前菌落数是减少的，这表明消毒还是有效的；②胶靴过消毒池后，消毒液对细菌的平均杀菌率为56.7%，表明消毒有效。当胶靴过消毒池后，鞋底的赃物被清洗，胶靴上粘附的消毒液也有杀菌作用；③相对于冲圈前，冲圈干燥后猪栏的平均杀菌率为62.5%，而冲圈干燥又进行熏蒸后的平均杀菌率为100%，墙面的平均杀菌率分别为25%和78.4%，地面的平均杀菌率分别为55%和95%。这表明熏蒸消毒相对于冲圈后只进行干燥的杀菌效果更好；④环境消毒（圈舍外及猪舍内环境）的消毒效果较差，甚至出现了消毒后菌落数增加的情况，这可能是由于环境太脏，污秽沉积过厚，未进行清扫就喷洒消毒药，少量的消毒药无法消灭细菌。这也提示我们，在进行喷洒消毒之前，一定要对环境进行彻底的打扫清洗；⑤对于消毒池的维持时间，在0 d和1 d时菌落数较少，但是2 d后细菌的数量就上升到30个，2 d后菌落数为110个。作为消毒池，自身不能有太多细菌，这次实验结果也提示我们，消毒池的消毒液应2 d或1.5d更换一次。

消毒措施是猪场生物安全体系中的重要环节，在预防和控制传染性疾病方面发挥着重要作用，不仅可以降低猪场环境中病原微生物的数量，而且还可以降低猪场微生物的污染程度，阻断病原微生物从外部环境中传入和在猪群内部的群内扩散，显著降低了细菌性疾病及病毒性疾病的发生率。而有效的生物安全体系就是在传染源和易感动物之间建立起一个隔离屏障。该研究从人员的进出消毒到圈舍的消毒等方面进行了细致的分析，从而为规模化、集约化养猪业病原的防控提供参考依据。