赖氨大黄酸对糖尿病小鼠肾脏的保护作用

李开济 甄永占

华北理工大学基础医学院 河北唐山 063000

赖氨大黄酸对糖尿病小鼠肾脏的保护作用

李开济 甄永占

华北理工大学基础医学院 河北唐山 063000

①目的 观察赖氨大黄酸(rheinlysinate，RHL)对糖尿病小鼠肾脏的保护作用并探讨其保护机制。②方法 应用糖尿病饮食建立KK/H1J小鼠的糖尿病肾病模型，将患有糖尿病肾病的小鼠随机分为糖尿病肾病模型组、不同剂量RHL组(25和50mg/kg)，同时采用同龄C57BL/J作为正常对照组，连续喂养12周后，对比观察小鼠的一般状态、体质量、肾质量以及肾质量/体质量比值的变化；留取血液测定血糖、血肌酐和尿素；留取部分肾脏组织进行匀浆后测上清液中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧物(GSH-Px)活性。③结果 糖尿病肾病组小鼠明显不喜活动，毛色黯淡，RHL组小鼠一般状况明显改善；糖尿病组小鼠肾脏重量和肾质量/体质量的比值明显增高，RHL组小鼠肾质量和肾质量/体质量较模型组降低。糖尿病肾病模型组血糖、肌酐、尿素和肾组织MDA水平均明显升高，肾组织SOD和GSH-Px活性降低，RHL各剂量组血糖、肌酐、尿素和MDA水平显著降低，SOD和GSH-Px活性升高。④结论 赖氨大黄酸对糖尿病小鼠肾脏有保护作用，其机制可能与减轻肾脏氧化应激反应有关。

赖氨大黄酸 糖尿病肾病 氧化应激KK/H1J小鼠

糖尿病肾病(Diabetic nephropathy,DN)是糖尿病的一种常见而严重的并发症[1～4]。糖尿病患者有25%～44%出现糖尿病肾病，临床上可分为肾小球超滤期、寂静期、微量蛋白尿期、大量蛋白尿期和尿毒症期5期。前3期如果能及时发现及时治疗，还可得以逆转。糖尿病肾病是糖尿病患者致死的重要原因，其发病机制尚不十分清楚，并且临床上亦缺乏非常有效的防治方法。大黄酸是治疗糖尿病肾病的候选药物，目前正处在2期临床研究阶段。但大黄酸水溶性差，生物利用度低，使其进一步应用受到很大限制。本研究室通过对大黄酸进行结构改造，获得了水溶性好的赖氨大黄酸(RHL)，与大黄酸相比，RHL溶解度显著提高，可能更适合临床应用，但尚缺乏有效的治疗糖尿病肾病的实验依据。本研究主要通过动物实验观察RHL对小鼠糖尿病肾病的防治作用及可能机制，为赖氨大黄酸应用于临床防治糖尿病肾病提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物 应用24只KK/H1J近交系小鼠通过糖尿病饮食建立糖尿病肾病模型。检测血肌酐和尿素氮判定造模型成功后，将18只KK/H1J近交系小鼠按体质量随机分为3组：糖尿病肾病模型组、不同剂量RHL组(25和50mg/kg/day)。同龄C57BL/J作为正常对照组，给予普通饲料喂养，KK/H1J近交系小鼠予糖尿病饮食喂养。RHL组分别1次/d灌胃25和50mg/kg的RHL，并继续糖尿病饮食。正常对照组和衰老模型组灌胃等量生理盐水，连续12周。

1.1.2 样本采集 实验结束时摘眼球收集血标本，离心取血清，4℃离心15min，3000r/min，取血清保存在-20℃待测血糖、creatinine和urea含量。取左肾1/2肾组织在4℃预冷生理盐水中反复清洗，称重。肾脏组织分别切成小块，置于液氮中，冻透后转入-70℃冰箱中待测肾脏组织MDA含量与SOD和GSH-Px活性。

1.1.3 血生化指标测定 血糖、血肌酐、尿素由全自动生化分析仪测得。

1.1.4 肾脏组织MDA 含量与SOD和GSH-Px活性测。MDA含量采用硫代巴比妥酸法，SOD活力采用联苯三酚自氧化法，GSH-Px活性采用NADPH偶联法，严格按照试剂盒说明书操作。

1.1.5 统计学处理 采用SPSS 13.0软件进行统计学分析，以均数±标准差表示，组间比较采用单因素方差分析。

2 结果

2.1 RHL对小鼠一般状况的影响 正常对照组小鼠一般状态良好，活动灵活，反应灵敏，毛发光洁整齐。糖尿病肾病组与正常组比较，明显不喜活动，毛色黯淡。RHL组小鼠的灵敏度和皮毛光泽较正常对照组虽有所下降，但比糖尿病肾病组更灵活，皮毛更光泽。不同剂量的RHL组小鼠体质量与对照组小鼠体质量相比无明显差异，但糖尿病组小鼠肾脏质量和肾质量/体质量的比值明显高于对照组，与糖尿病模型组相比，RHL组小鼠肾脏质量和肾质量/体质量明显降低，差异有统计学意义(P<0.05),见表1。

2.2 RHL对小鼠血糖、血肌酐和尿素水平的影响 糖尿病肾病模型组血糖、肌酐、尿素均明显高于对照组，与糖尿病肾病相比，RHL各剂量组血糖、肌酐、尿素水平显著降低，差异有统计学意义(P<0.05)，见表2。

2.3RHL对小鼠肾脏组织氧化应激指标的影响 与对照组相比，肾脏组织SOD和GSH-Px活性显著降低，而MDA含量明显升高。与糖尿病模型小鼠相比，25mg/kg和50mg/kgRHL治疗后，均能改善肾脏组织SOD和GSH-Px活性，RHL治疗组的SOD和GSH-Px活性与模型组相比在统计学上有显著性差异。RHL还能降低肾脏MDA的含量,见表3。

表1 RHL对小鼠体质量、肾脏质量、肾质量/体质量的影响

注:与C57BL/J组比较，*P<0.05;与KK/HlJ组比较，#P<0.05

表2 RHL对MDA、SOD、GSH-px的影响

注:与C57BL/J组比较，*P<0.05;与KK/HlJ组比较，#P<0.05

表3 RHL对血白蛋白/肌酐、血糖，肌酐和尿素氮的影响

注：与C57BL/J组比较，*P<0.05;与KK/HlJ组比较，#P<0.05

3 讨论

目前，关于大黄酸防治糖尿病肾病已有较多报道[5～8]，多种临床常用中药复方中含有大黄酸，但因其水溶性较差，所以大黄酸单独应用于临床尚未见报道。有文献报道卞达赖氨酸可防治大鼠糖尿病肾病[9]。

RHL是赖氨酸和大黄酸反应生成的新化合物[5]，能够溶于水，对给药治疗提供了方便。本文主要观察了RHL对糖尿病小鼠肾脏损伤的影响。结果显示，糖尿病模型组小鼠的血糖、血肌酐和尿素水平明显高于对照组，说明糖尿病模型组小鼠由于高血糖影响了肾脏的功能。同时发现糖尿病KK/HlJ小鼠肾脏组织SOD和GSH-Px活性显著降低，而MDA含量明显升高，提示糖尿病小鼠的肾脏处于容易遭受氧化应激损伤的状态中，从而引起继发性肾脏损害。RHL治疗组的血糖、血肌酐和尿素水平明显低于模型组小鼠，说明RHL可降低血糖，改善肾脏功能。并且这两个治疗组的SOD和GSH-Px活性明显增强，使肾脏抵御氧化损伤能力得到加强，从而可有效减轻糖尿病肾病。模型小鼠肾脏MDA水平明显高于对照组小鼠，说明糖尿病可引起肾脏的脂质过氧化反应，诱发肾脏损伤。RHL治疗组小鼠肾脏组织MDA水平明显降低，提示RHL可减轻肾脏的脂质过氧化反应。

综上所述，RHL可有效降低血糖，提高肾脏的抗氧化能力，从而起到保护糖尿病小鼠肾脏的作用，其详细机制还有待于进一步研究。

[1]GrayN,PiconeG,SloanF,etal.RelationbetweenBMIanddiabetesmellitusanditscomplicationsamongUSolderadults[J].SouthMedJ，2015,108(1):29-36

[2]MirhoseiniM,SalehN,MomeniA,etal.Astudyontheassociationofdiabeticdermopathywithnephropathyandretinopathyinpatientswithtype2diabetesmellitus[J].JNephropathol,2016,5(4):139-143

[3]AhangarpourA,OroojanAA,KhorsandiL,etal.Preventiveeffectsofbetulinicacidonstreptozotocinnicotinamideinduceddiabeticnephropathyinmalemouse[J].JNephropathol,2016,5(4):128-133

[4]ZhouB,ZouH,XuG.ClinicalUtilityofSerumCystatinCinPredictingDiabeticNephropathyAmongPatientswithDiabetesMellitus:aMeta-Analysis[J].KidneyBloodPressRes，2016,41(6):919-928

[5]DuanS,WuY,ZhaoC,etal.Thewnt/β-cateninsignalingpathwayparticipatesinrheinamelioratingkidneyinjuryinDNmice[J].MolCellBiochem,2016,411(1-2):73-82

[6]ZengCC,LiuX,ChenGR,etal.Themolecularmechanismofrheinindiabeticnephropathy[J].EvidBasedComplementAlternatMed,2014(2014):487097

[7] 吴影懿,段俗言,钱 军，等.大黄酸对糖尿病小鼠肾脏的保护作用[J].江苏医药,2015,41(16):1864-1866

[8] 印晓星，张银娣，余俊先，等.苄达赖氨酸对大鼠糖尿病肾病的防治作用[J].中国临床药理学与治疗学,2007,12(5):552-557

[9] 林雅军,黄云虹,甄永占,等.赖氨大黄酸通过抑制HER-2信号通路诱导乳腺癌SK-Br-3细胞凋亡[J].药学学报,2008,43(11):1099-1105

(2016-12-11 收稿)(王一伊 编辑)

敬 告

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Protectiveeffectsoflysinerheinonkidneyofdiabeticmice

LIKaiji,ZHENYongzhan

(CollegeofElementaryMedicine,NorthChinaUniversityofScienceandTechnology,Tangshan063000,China)

Objective To observe the protective effects of rhein lysinate(RHL)and to explore its mechanism of action in diabetic nephropathy(DN)of KK/HlJ mice model.Methods DN of KK/HlJ mice was made by diabetes food.DN of KK/HlJ mice were then randomly divided into three groups:the KK/HlJ model,25 and 50mg/kg/day RHL-treated KK/HlJ group.Normal C57BL/J mice were then used as control.At 12 weeks the levels of blood glucose,creatinine,and urea were etermined.The level of malondialdehyde(MDA)and superoxide dismutase(SOD)and glutathione peroxidase(GSH-px)activities in the kidneys were also measured by appropriate assay kits.Results At 12 weeks the levels of ACR in KK/HlJ mice,blood glucose,creatinine,and urea were increased,however RHL could decreased them.Treatment of KK/HlJ mice with 50mg/kg/day RHL decreased the body weight of KK/HlJ mice.Compared C57BL/J control,KK/HlJ model mice had a significantly lower activity of SOD and GSH-px in the kidneys,but had a significantly higher level of MDA.Treatment of KK/HlJ mice with RHL significantly increased the activities SOD and GSH-px,and reduced the MAD level in the kidneys.Conclusion RHL has a protective effect on DN of KK/HlJ mice.Its mechanism may be related to attenuates renal oxidative stress reaction.

Rhein lysinate.Diabetic nephropathy.Oxidative stress.KK/HlJ mice

河北省科技厅自然科学基金资助课题(编号：H2012401030)；河北联合大学大学生创新性实验计划(编号：X2014078)

李开济(1994-)，男，本科生。研究方向：临床医学。

甄永占。

R

A

2095-2694(2017)03-173-04