高效液相法测定尼莫地平片剂的含量

路明亮

摘要：目的 通过HPLC方法测定尼莫地平片剂的含量。方法 在色谱条件：选择Diamonsil C18（200 mm×4.6 mm，5 μm）为色谱柱，流动相：甲醇∶水（68∶32），检测波长238 nm，进样量10 μl，1.0 ml/min流速，柱温为室温（25℃）条件下进行检测。结果 尼莫地平在11.07～55.35 μg/ml范围内线性关系良好，线性方程为：Y=6921.2X-4311.6（r=0.9994），平均回收率為100.97%，RSD=1.5%。结论 采用高效液相色谱方法，可有效评估尼莫地平片剂中尼莫地平的含量，本法简单、灵敏度高、结果准确。

关键词：HPLC法；尼莫地平；含量

尼莫地平（Nimodipine，NMD）为1，4双氢吡啶类钙通道拮抗剂，主要用于扩张脑血管及改善脑功能[1]，该药难溶于水，属脂溶性药物[2]。尼莫地平片剂测定多以紫外分光光度法为主，但因该法存在有关物质方面干扰，专属性较差[3]，本文由此出发考察高效液相法在其含量测定方面的应用效果。

1 资料与方法

1.1仪器与试药 岛津 LC-2010CHT 型高效液相色谱仪；超声波清洗器；甲醇由霍尼韦尔贸易（上海）有限公司提供，为色谱醇；尼莫地平对照品（中国药品生物制品检定所，批号：160112-160223）；尼莫地平片（牡丹江灵泰药业股份有限公司，国药准字H23022380，规格：20 mg，批号：160123、160321、160628）。

1.2方法

1.2.1高效液相色谱法

1.2.1.1色谱条件 ①波长：选择以流动相做空白对照，于200～400 nm波长下对尼莫地平对照品溶液进行全波长扫描，结果显示在238 nm处尼莫地平有最大吸收；以空气为对照，对流动相进行全波段扫描显示，其在238 nm内基线平行，无干扰，故确定检测波长238 nm。②色谱柱：选择Agilent C18（150 mm×4.6 mm，5 μm），流动相：甲醇∶水（68∶32），检测波长238 nm，进样量10 μl，1.0 ml/min流速，柱温为室温（25℃）。

1.2.1.2溶液的制备 ①供试品溶液的制备：精密称取10片尼莫地平片，粉碎后混合均匀，精密称取上述供试品适量置于25 ml容量瓶中，加入流动相适量稀释，摇匀至澄清后，稀释至对应刻度，取适量溶液经微孔滤膜（0.25 μm）过滤后，待用。②对照品溶液的制备：采用十万分之一天平称取尼莫地平对照品11.07 mg于100 ml容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀即得。

1.2.1.3方法学验证 ①精密度试验：在相同色谱条件下，取对照品重复进样6次，每次10 μl，分别测定峰面积，并计算6组数据所得的相对标准偏差RSD，结果为1.2%<2.0%，符合药典规定[4]，提示本组方法精密度良好。②重复性试验：选择同批号尼莫地平片6份，精密称定后，根据供试品“1.2.1.2①”项操作制备溶液，采用“1.2.1.1”项下色谱条件，进样10 μl，采集6份样品的色谱图，计算溶液的相对标准偏差RSD=1.3%（<2.0%），符合标准规定，提示本组方法具有较好的重复性。③稳定性试验：于2 h、4 h、8 h、12 h、24 h取尼莫地平供试品溶液，采用相同色谱条件，进样10 μl，根据测得的色谱峰面积，供试品组RSD为1.6%<2.0%，提示供试品溶液在24 h内较为稳定。④回收率考察：取“1.2.1.2①”项供试液，保存至3个锥形瓶内，依次加尼莫地平对照品0.409 mg、1.231 mg和2.141 mg，根据“1.2.1.1”项色谱条件，进样10 μl，对峰面积进行测定，得到回收率分别为101.11%、100.84%和100.97%，平均100.97%，RSD 1.5%，与药典标准相符[4]。

1.2.1.4线性关系考察 采用移液管精密移取“1.2.1.2②”的尼莫地平对照品溶液1.0 ml、2.0 ml、3.0 ml、4.0 ml、5.0 ml于10 ml容量瓶中，使用流动相稀释至刻度，澄清后，采用微孔滤膜过滤，得到系列标准溶液。结合对应色谱条件，进样10 μl，测定样品色谱峰面积，以峰面积和浓度为坐标，建立标准曲线，得到方程为：Y=6921.2X-4311.6（r=0.9994），提示尼莫地平浓度在11.07～55.35 μg/ml范围内与峰面积存在良好的线性关系。

1.2.2样品中尼莫地平含量测定 结合“1.2.1.1”项下色谱条件，分别测定尼莫地平对照品溶液与3批尼莫地平片供试品溶液，供试品制备同“1.2.1.2①”项操作，采用自身对照法对供试品内含有的尼莫地平含量进行测定。

2 结果

结果显示，高效液相法测定尼莫地平片中，尼莫地平平均含量（与标识量比较）为（100.67±0.83）%，见表1。

3 讨论

尼莫地平（C21H26N2O7）属二氢吡啶类钙拮抗剂，其在238 nm和234 nm的波长处均有吸收，但研究显示前者的灵敏度比后者高，故本文选择238 nm作为检测波长。流动相选择方面，由于尼莫地平几乎不溶于水而溶于甲醇，美国药典33版[5]中显示其流动相为甲醇-四氢呋喃-水（20∶20∶60），考虑上述方法对四氢呋喃纯度及色谱柱要求较高，故本文尝试采用甲醇-水系统作为流动相备选，最终选择甲醇-水（68∶32）作为流动相，此时尼莫地平与杂质分离度较高为4.1，且峰形较好，保留时间在7.5 min左右。需注意的是尼莫地平对光敏感，故在测定过程中注意避光操作及保存。

通过本文结果我们可知，高效液相色谱法测定尼莫地平准确性高、精密度好、重现性好和相关性均符合相关要求，可通过色谱柱作用将尼莫地平及其有关物质有效分离，提高测定的专属性，值得推广使用。

参考文献：

[1]潘文，李豫，雷宇，等.高效液相色谱法同时测定血清中尼莫地平和尼群地平浓度[J].中国药业，2012，21（2）：25-26.

[2]李帅，李文莉，廖彬，等.高效液相色谱法测定尼莫地平固体制剂的溶出度[J].中南药学，2012，10（7）：494-497.

[3]郝桂明，华莲，唐素芳.HPLC法测定尼莫地平软胶囊的含量及有关物质[J].药物分析杂志，2012，32（3）：464-467.

[4]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].北京：化学工业出版社，2010.

[5]Rajani B，Mukkanti K.Optimized and validated RP-HPLC method for estimation of nimodipine in tablet dosage form[J].International Journal of Research in Pharmacy and Chemistry，2014，4（1）：105-109.