氢化物-原子荧光法测定富硒马铃薯中有机硒和无机硒

王爽，张春磊，李玉丹

（黑龙江八一农垦大学，大庆 163319）

氢化物-原子荧光法测定富硒马铃薯中有机硒和无机硒

王爽，张春磊，李玉丹

（黑龙江八一农垦大学，大庆 163319）

建立了富硒马铃薯中有机硒和无机硒的测定方法。通过用硝酸-高氯酸的混合酸进行湿法消解，再经Tris-HCl缓冲溶液提取、超声提取、离心进行有机硒和无机硒的分离，用氢化物-原子荧光光谱法进行分析测定。结果表明，富硒马铃薯样品中硒主要以有机硒的形态存在，占硒总量的60.74%，该方法线性范围2～40 μg·L-1，无机硒检出限为0.008 mg·kg-1，相对标准偏差3.6%，回收率95.50%。该方法操作简单、灵敏度高、回收率好，适合富硒马铃薯有机硒和无机硒的测定。

氢化物-原子荧光光谱法；有机硒；无机硒；富硒马铃薯

硒是人体所必需的14种微量元素之一，具有非常重要的生理作用，主要体现在抗病、抗衰老、防癌、解毒等方面，硒只能通过外源补充而获得[1-2]。马铃薯作为一种健康食品越来越受到人们青睐，更是人体通过食物补硒的重要来源[3]。2015年农业部把马铃薯作为主粮化列入重要工作议程[4]，研究开发富硒马铃薯及加工产品价值巨大，但食物中无机硒和有机硒的生理、生化功能很大程度上不尽相同[5]。因此，建立一种准确有效的方法，用于测定富硒马铃薯中无机硒和有机硒的含量势在必行。

目前，硒元素检测常用的方法有比色法、气相色谱法、氢化物-原子荧光光谱法、电感耦合等离子体质谱法等，但这些方法或多或少都会有一定的缺点，比如比色法的灵敏度不高，且试剂稳定性差；气相色谱法操作程序相对来讲过于繁琐；电感耦合等离子体质谱法仪器价格十分昂贵。在GB 5009.93-2010《食品中硒的测定》中规定，硒元素检测的排在第一的方法就是氢化物-原子荧光光谱法（hydride generation-atomic fluorescence spectrometry，HG-AFS），因为该方法具有检出限低、干扰较小、线性范围宽等诸多优点[6-7]。

实验用Tris-HCl缓冲溶液进行提取，结合HGAFS，对富硒马铃薯中的总硒和无机硒进行测定，有机硒的含量则用差减法计算得出，该方法简便、安全、灵敏度高，精密度、回收率结果满意，对马铃薯中的无机硒及有机硒含量进行了准确的定量分析。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

用去离子水将新鲜的马铃薯洗净，去皮，切成碎块，放在60℃烘箱中烘干，取出冷却后将其粉碎待用。

硒标准溶液，硝酸、高氯酸、盐酸、硼氢化钾、氢氧化钠（均为优级纯），三羟甲基氨基甲烷、铁氰化钾（为分析纯），所使用的水均为超纯水。

1.2 仪器设备

LC-AFS 9530液相色谱原子荧光联用仪（北京海光），KH-100DE型超声波清洗器（昆山禾创），DFY-100C-1000C型高速万能粉碎机（上海汗诺），DGG-9140A型电热恒温鼓风干燥箱（上海森信），GHP600型石墨电热板（成都奥普乐），Milli-QA10超纯水仪（法国默克密里博），Allegra X-30R台式高速冷冻离心机（美国贝克曼库尔特）。

1.3 实验方法

1.3.1 溶液配制

混酸：将1份高氯酸与9份硝酸混合；20 g·L-1硼氢化钾溶液：称取硼氢化钾10 g溶于500 mL的NaOH溶液（5 g·L-1）中，混匀（现用现配）；Tris-HCl缓冲溶液：称取三羟甲基氨基甲烷1.514 g和六水氯化镁0.505 g，溶于100 mL水中，并用盐酸（6 mol·L-1）调节pH值至8.6；100 g·L-1铁氰化钾溶液：称取铁氰化钾10 g，溶于100 mL水中，混匀。

硒标准曲线：使用100 μg·L-1硒标准溶液作为使用液，依次准确移取0.00、0.50、1.25、2.50、5.00、10.0 mL至25 mL容量瓶中，依次加入6 mol·L-1盐酸5 mL、100 g·L-1铁氰化钾溶液2.5 mL，用水定容后摇匀备用（相当于硒质量浓度为0.0、2.0、5.0、10.0、20.0、40.0 μg·L-1）。

1.3.2 仪器参数

灯电流为80 mA；负高压为300 V；原子化器高度为9 mm；原子化器温度为800℃；载气流量为400 mL·min-1；屏蔽气流量为1 000 mL·min-1。

1.3.3 总硒的测定

准确称取试样1 g（精确至0.000 1 g）于25 mL三角瓶中，加混酸10 mL冷消化过夜，于电热板上加热，当溶液变成清澈透明并伴有白烟出现时取下，待冷却后加入Tris-HCl缓冲溶液5 mL，将六价硒还原成四价硒，继续加热至体积约2 mL。冷却至室温，移至25 mL容量瓶中，加入1 mL 10%铁氰化钾溶液，并加水定容至刻度，上机测定，同时做空白实验。

1.3.4 无机硒的测定

准确称取试样1 g（精确至0.000 1 g）于50 mL三角瓶中，加10 mL Tris-HCl缓冲溶液，混匀，盖好后置于80℃恒温水浴锅中水浴2 h，超声提取30 min，以5 000 r·min-1离心15 min，然后取清液。剩余溶液再加Tris-HCl缓冲溶液10 mL重复离心，将清液合并于25 mL容量瓶中，并用Tris-HCl缓冲溶液定容，混匀，再经水浴蒸发至少量，按1.3.3测定无机硒的含量。

1.3.5 有机硒的测定

应用差减法（总硒含量减去无机硒含量）计算出有机硒含量。

2 结果与讨论

2.1 标准曲线的绘制及线性范围

分别准确移取不同体积的100 μg·L-1硒标准溶液配制质量浓度梯度为0.0、2.0、5.0、10.0、20.0、40.0 μg·L-1的标准溶液，根据测量标准使用液所产生荧光值，求得待测硒元素荧光值与浓度关系的一元线性回归方程，即If=173.187 c+53.616，R2=0.999 3，在2～40 μg·L-1范围内线性关系良好。

2.2 样品中的有机硒和无机硒

样品测定采用4平行，其中总硒、无机硒和有机硒的含量及所占比例见表1。结果表明，马铃薯鲜基中，有机硒占硒总量的60.74%，无机硒占硒总量的39.26%。

2.3 精密度、检出限和加标回收率的测定

向样品中分别加入0.1 mg·kg-1的无机硒标液，进行加标回收及重复性实验。得出无机硒回收率为95.50%，说明用该方法测定富硒马铃薯中无机硒含量，具有较高的回收率。得出相对标准偏差RSD≤5%，说明用该方法测定富硒马铃薯中无机硒含量，精密度较好。结果见表2。

表1 样品中无机硒和有机硒含量及百分比Table 1The content and relative proportion of organic selenium and inorganic selenium in samples

表2 回收率及精密度测定Table 2Determination of the recoveries and precision

根据限量检测要求，对样品空白进行连续测量（11次）得出空白值，再根据空白值计算标准偏差（σ），并根据3σ法得出方法检出限为0.008 mk·kg-1。

3 结论

实验采用Tris-HCl缓冲溶液提取、离心机分离，结合氢化物-原子荧光法，对富硒马铃薯中的总硒、无机硒含量进行测定，并采用差减法得出有机硒含量。实验结果表明，在富硒马铃薯中，硒元素的主要形态为有机硒，比例为60.74%，可视为安全、有效的补硒食物。该方法线性良好，检出限低，精密度与回收率实验结果理想，是一种适合测定富硒马铃薯中有机硒和无机硒含量的方法。

［1］屈兰竺，杨松杰，禚苏，等.微量必需元素硒的作用探析［J］.中国农学通报，2010，26（7）：94-97.

［2］颜世铭，李增禧，熊丽萍.微量元素医学精要I微量元素的生理作用和体内平衡［J］.广东微量元素科学，2002 （9）：3-4.

［3］杨德平.马铃薯加工产品硒含量及加工中硒分布特性研究［J］.安徽农业科学，2015，43（36）：147-148.

［4］卢肖平.马铃薯主粮化战略的意义、瓶颈与政策建议［J］.华中农业大学学报：社会科学版，2015（3）：1-3.

［5］夏弈明.硒［J］.营养学报，2013，35（3）：223-226.

［6］于振，李建科，李梦颖，等.食品中微量硒测定方法研究进展［J］.食品工业科技，2012，33（18）：371-377.

［7］李秀梅，孙国华，杨建敏，等.氢化物原子荧光法分析不同地区刺参总硒和无机硒含量及分布规律［J］.食品科学，2015，36（12）：113-118.

Determination of Organic Selenium and Inorganic Selenium in Selenium-Enriched Potatoes by Hydride Generation-Atomic Fluorescence Spectrometry

Wang Shuang，Zhang Chunlei，Li Yudan
（Heilongjiang Bayi Agricultural University，Daqing 163319）

The method for the determination of organic selenium and inorganic selenium in selenium-enriched potatoes was established.The mixed acid of nitric acid and hydrochloric acid were used for wet digestion，separation of organic selenium and inorganic selenium by Tris-HCl extraction，ultrasonic extraction and centrifugal separation.The analysis was determined by hydride generation-atomic fluorescence spectrometry（HG-AFS）.The results showed that selenium was found to exist mainly in the form of organic selenium compounds in selenium-enriched potatoes in the range of 60.74%relative to total selenium amount.The linear range was within 2～40 μg·L-1.The detection limit for inorganic selenium was 0.008 mk·kg-1.The relative standard derivation was less than 3.6%.The recovery was 95.50%.This method had the advantages of simple operation，high sensitivity and high recovery rate，and was suitable for the determination of organic selenium and inorganic selenium in selenium-enriched potatoes.

atomic fluorescence spectrophotometer；organic selenium；inorganic selenium；selenium-enriched potatoes

O657.31；TS207.3

A

1002-2090（2017）03-0070-03

10.3969/j.issn.1002-2090.2017.03.015

2016-12-08

王爽（1982-），女，研究实习员，黑龙江八一农垦大学毕业，现主要从事农产品加工检测方面的研究工作。