超高效液相色谱-串联质谱法测定鸡肉中的金刚烷胺

2017-06-05张振宇

兽医导刊 2017年4期

关键词：金刚烷胺质谱法鸡肉

张振宇李明

（济源市畜产品质量监测检验中心，河南济源 459000）

超高效液相色谱-串联质谱法测定鸡肉中的金刚烷胺

张振宇李明

（济源市畜产品质量监测检验中心，河南济源 459000）

金刚烷胺又叫三环癸胺，是广泛用于人类流感治疗的抗病毒药物，但是将它用于畜禽，不仅导致畜禽产品药物残留、动物机体产生免疫抑制和耐药性等问题，还可影响人用抗病毒药物的有效性。2005年我国农业部第560号公告规定金刚烷胺为禁用兽药。

串联质谱法；鸡肉；金刚烷胺

目前我国测定鸡肉中金刚烷胺的相关文献较少，国家和行业标准也是空白，给此类药物的监管带来不便。而鸡肉组织中残留的金刚烷胺含量低，基质干扰大，急需有效的检测技术，目前，检测金刚烷胺有液相色谱法、气相色谱-串联质谱法、液相色谱-串联质谱法。液相色谱法灵敏度较低且无法测定结构信息；气相色谱-串联质谱法需衍生后气化，样品处理方法复杂。液相色谱-串联质谱法可检测待测物的结构信息，具有较高的灵敏度，是测定金刚烷胺的理想方法。

本文利用1%乙酸乙腈作提取液，浓缩后用20%乙腈溶液溶解，再用正己烷除脂，高速离心后过PSA滤膜，用液相色谱-串联质谱法测定，同位素内标法定量。该方法简便快速，可节省检测时间和成本。

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

UPLC-Xevo TQ MS型超高效液相色谱-串联质谱仪（美国Waters公司）；ULUP超纯水系统（成都优普公司）；PSA微孔滤膜（0.22μm，Agela公司）超声波清洗器（新苗仪器有限公司）；高速冷冻离心机（力康公司）。

金刚烷胺标准品（中国药品生物制品检定所）；盐酸金刚烷胺-D15（加拿大CDN公司）；甲酸（色谱级，美国TEDIA公司）；乙腈、甲醇（色谱纯，美国Fisher公司）。

1.2 标准溶液的配制

准确称取金刚烷胺10 mg于10mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解并定容，得质量浓度为1 mg/ml的标准储备液，准确称取金刚烷胺-D151 mg于10 ml棕色容量瓶中，用甲醇溶解并定容，得质量浓度为0.1 mg/ml的标准储备液，于-18 ℃下避光存储。

1.3 色谱质谱条件

色谱柱：Acquity UPLC BEH C18色谱柱（50 mm×2.1 mm，1.7 µ m）。流动相A为乙腈，流动相B为0.1%甲酸溶液。柱温40 ℃；进样体积10.0 µl。质谱采用电喷雾正离子模式电离，多反应监测（MRM）模式进行检测。

梯度洗脱程序

金刚烷胺特征离子参考质谱条件

1.4 样品提取和净化

称取试料2.00g，置于50ml离心管内，加适量金刚烷胺-D15内标溶液，再加无水硫酸钠3g，再加入1%乙酸乙腈10ml，涡旋1min后，震荡提取10min。8000r/min离心8min，取5mL上清液于50℃下氮气吹干。

加入20%乙腈溶液1.0mL，充分涡旋溶解，再加入20%乙腈溶液饱和的正己烷2ml，充分涡旋混合，然后室温下静置5min。吸取下层溶液0.5ml，转移至1.5ml塑料离心管内，12000r/min离心5min，取下层清液适量，过0.22μmPSA滤膜后供超高效液相色谱-串联质谱仪测定。

2 结果与讨论

2.1 提取和净化条件的选择和优化

2·1·1 提取溶剂的选择

本实验选用乙腈、1%乙酸乙腈、甲醇、1%乙酸甲醇作为提取溶剂，进行了提取效率（回收率和信噪比）的比较，发现1%乙酸乙腈提取溶剂的提取效率最好，可以达到本方法的要求。

2·1·2 净化方法的选择

为了简化样品净化操作，本方法使用含有PSA吸附剂的针式过滤器，该针式过滤器的引用可以简化样品净化操作，只需一步操作即可将净化和滤膜过滤整合完成，从而可以大幅提高样品的前处理效率。

2.2 线性范围、准确度、精密度及灵敏度

准确量取适量的金刚烷胺标准工作液，用甲醇溶液稀释成金刚烷胺浓度分别为1、2、5、10、20、50µg/L，上高效液相色谱-串联质谱法测定。按其所得峰面积的平均值与对应的金刚烷胺溶液浓度作标准曲线，相关系数为R2= 0.9984。

对于鸡肉样品，由于基质效应较强，因此采用相应的空白基质溶液稀释金刚烷胺标准工作液，分别制成上述系列基质标准工作溶液，按同样的方法进样分析和绘制金刚烷胺在1～50.00 µg/L范围内的标准曲线，相关系数为R2= 0.9994。

2.3 方法的准确度及精密度

本标准采用标准添加法，在鸡肉中添加金刚烷胺三个添加浓度分别为0.3、1、2、10µg/kg的回收率测定，每个浓度5个样品平行，计算样品回收率和相对标准偏差。

金刚烷胺添加回收率实验结果

2.4 方法的灵敏度

在空白样品中添加一定量的金刚烷胺。按照提取净化方法进行处理后，经过高效液相色谱-串联质谱法检测，当金刚烷胺添加浓度为0.3 µg/kg时，其信噪比在6左右，高于检测限所需的信噪比为3的要求，因此方法的检测限为0.3 µg/kg；当金刚烷胺添加浓度为1 µg/kg时，每种基质中其信噪比均大于10，因此方法的定量限为1 µg/kg。