重庆市垫江地区高风险人群珠蛋白生成障碍性贫血检出率及基因型分布

余登琼,廖俐雅，张存亮，马明炎，雷明容

(重庆市垫江县人民医院检验科 408300)

·经验交流·

重庆市垫江地区高风险人群珠蛋白生成障碍性贫血检出率及基因型分布

余登琼,廖俐雅△，张存亮，马明炎，雷明容

(重庆市垫江县人民医院检验科 408300)

目的 研究重庆市垫江县高风险人群珠蛋白生成障碍性贫血的发生率及基因型分布。方法 通过检测该院门诊、住院患者和孕前、产前检查夫妇外周血的平均红细胞体积(MCV)、平均红细胞血红蛋白含量(MCH)进行珠蛋白生成障碍性贫血高风险人群筛查，以红细胞平均体积MCV<80 fL和/或MCH<27 pg/L作为高危人群判断标准，筛选并收集2013年7月至2016年6月，年龄5个月至83岁珠蛋白生成障碍性贫血高危人群血液标本，对其中404例用跨跃断裂点PCR(Gap-PCR)及反向斑点膜条杂交技术(RDB)法进行基因诊断，未检查到常见突变者进一步通过基因突变热点测序、比对。结果 404人中检出珠蛋白生成障碍性贫血168例(41.6%)，其中α-珠蛋白生成障碍性贫血77例(19.0%)，β-珠蛋白生成障碍性贫血89例(22.0%)，检出β-珠蛋白生成障碍性贫血复合α-珠蛋白生成障碍性贫血双重杂合子1例(0.25%)，β-珠蛋白生成障碍性贫血少见型[ⅣS-Ⅱ-81(C-T)]1例(0.25%)。结论 垫江县高危人群中珠蛋白生成障碍性贫血总检出率为41.6%，其中β-珠蛋白生成障碍性贫血检出率明显高于α-珠蛋白生成障碍性贫血。

珠蛋白生成障碍性贫血；高风险人群；检出率；基因型分布

珠蛋白生成障碍性贫血又称地中海贫血(thalassemia)，是因某个或多个珠蛋白基因异常引起一种或一种以上珠蛋白链合成减少或缺乏，导致珠蛋白链比例失衡所引起的遗传性溶血性疾病，以溶血、无效红细胞生成及不同程度的小细胞低色素性贫血为特征[1-2]。轻型珠蛋白生成障碍性贫血可无或仅有轻度贫血，中重型患者生存质量受到严重影响，重型可有严重贫血、肝脾肿大，全身水肿、骨骼改变等，最严重者可于妊娠30～ 40周宫内死亡或产后数小时死亡，严重影响家庭和儿童生活质量[1,3-5]。由于目前对珠蛋白生成障碍性贫血尚无有效根治方法，因此，本研究分析高危人群中珠蛋白生成障碍性贫血的发生率及基因型颁布，以期为遗传咨询、产前诊断，贫血患者的诊断及治疗提供支持。

1 资料与方法

1.1 检测对象 所有标本来自2013年7月至2016年6月本院门诊、住院患者和孕前、产前检查夫妇，年龄5个月至83岁，用Sysmex XT-2000i血细胞分析仪进行全血细胞分析，筛选出红细胞平均体积(MCV)<80 fL和/或平均血红蛋白含量(MCH)<27 pg/L的珠蛋白生成障碍性贫血高风险人群，收集高危人群血液标本共404份。

1.2 试剂 使用深圳亚能生物技术有限公司提供的珠蛋白生成障碍性贫血基因诊断试剂盒，按说明书进行操作。

1.3 方法

1.3.1 缺失型α-珠蛋白生成障碍性贫血基因检测 用跨跃断裂点PCR(Gap-PCR)法，将PCR产物在1．2%的琼脂糖胶电泳，然后在紫外灯下观察基因图谱为1 800、2 000、1 600、1 300 bp的条带,分别为α-珠蛋白正常基因，3．7缺失型，4．2缺失型，SEA缺失型的扩增产物，即进行3．7、4．2、SEA 3种缺失型的基因诊断。

1.3.2 β-珠蛋白生成障碍性贫血基因及非缺失型α-珠蛋白生成障碍性贫血基因检测 采用单管多重PCR及反向斑点膜条杂交技术(RDB)法，检测中国人较常见的β-珠蛋白生成障碍性贫血基因17种突变位点和α-基因QS、CS、WS 3种点突变类型。

1.3.3 罕见型珠蛋白生成障碍性贫血基因检测 表型阳性而α-基因诊断试剂盒及RDB法未见基因型异常的样品通过PCR扩增α-珠蛋白基因的常见突变区域和β-珠蛋白全长测序。

1.4 统计学处理 用EXCEL 2013软件对所得数据进行统计学分析。

2 结 果

2.1 高危人群中珠蛋白生成障碍性贫血基因检出情况 MCV<80 fL和/或MCH<27 pg/L的404例患者中，共检出珠蛋白生成障碍性贫血患者168例，检出率为41.6%。其中α-珠蛋白生成障碍性贫血77例(19.0%)，β-珠蛋白生成障碍性贫血89例(22.0%)，β-珠蛋白生成障碍性贫血复合α-珠蛋白生成障碍性贫血双重杂合子1例(0.25%)，β-珠蛋白生成障碍性贫血少见型[ⅣS-Ⅱ-81(C-T)]1例(0.25%)。

2.2 α-珠蛋白生成障碍性贫血基因型分布 168例珠蛋白生成障碍性贫血患者中单纯携带α-珠蛋白生成障碍性贫血基因患者共77例(45.8%)。各基因型构成比见表1。

表1 重庆市垫江县α-珠蛋白生成障碍性贫血基因型分布

2.3 β-珠蛋白生成障碍性贫血基因型分布 168例珠蛋白生成障碍性贫血患者中单纯携带β-珠蛋白生成障碍性贫血基因患者共89例，构成比为53.0%，共检出9种突变类型。以ⅣS-Ⅱ-654(C-T)、CD41-42(-TCTT)、 CD17(A-T)多见(表2)。

2.4 其他 168例珠蛋白生成障碍性贫血患者中检出双重杂合子1例，其基因型为β41-42βA/-α3.7/αα，构成比0.6%。168例珠蛋白生成障碍性贫血患者中检出少见基因型1例，其基因型为 ⅣS-Ⅱ-81(C-T) ，构成比0.6%

表2 重庆市垫江县β-珠蛋白生成障碍性贫血基因型分布

3 讨 论

珠蛋白生成障碍性贫血是溶血性贫血的常见病因[6-8]。本病呈世界性分布，多见于东南亚、地中海区域，我国西南、华南一带为高发地区[9-13]。重庆市垫江县位于西南部，本研究筛选出小细胞低色素贫血的高危患者用Gap-PCR及RDB进行珠蛋白生成障碍性贫血基因检测，其检出率为41.6%，低于袁晖等[14]深圳地区的研究(50.7%)，符合我国两广地区发病率最高的趋势。

在本县404例高危受检者中检出珠蛋白生成障碍性贫血168例，检出率为41.6%，β-珠蛋白生成障碍性贫血(22.0%)检出率高于α-珠蛋白生成障碍性贫血(19.0%)，αβ复合型珠蛋白生成障碍性贫血、β珠蛋白生成障碍性贫血少见型检出率较低，各仅检出1例(0.25%)。所有突变基因中，-SEA/αα型珠蛋白生成障碍性贫血在本地区检出率最高，构成比为75.3%，因此在高危人群中进行珠蛋白生成障碍性贫血筛查能有效减少Bart′s水肿儿出生概率，对于优生优育有重要意义[2]。

PCR及RDB珠蛋白生成障碍性贫血基因检测方法作为珠蛋白生成障碍性贫血的诊断方法，比较于传统血红蛋白电泳技术，能有效检出静止型α-珠蛋白生成障碍性贫血及β-珠蛋白生成障碍性贫血复合α-珠蛋白生成障碍性贫血双重杂合子，减少漏诊率，能为产前诊断及遗传咨询提供更可靠的理论支持[8,15-16]。

珠蛋白生成障碍性贫血基因检测可作为贫血的鉴别诊断依据，对明确诊断的珠蛋白生成障碍性贫血患者制订科学合理的个性化治疗方案，避免无效用药和盲目补铁，减少患者经济负担和药物造成的损害。

综上所述,本县属于珠蛋白生成障碍性贫血高发地区，珠蛋白生成障碍性贫血基因检测在优生优育、遗传咨询及贫血鉴别诊断和治疗中都有重要意义。

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10.3969/j.issn.1671-8348.2017.13.035

余登琼(1968-)，本科，副主任技师，主要从事临床检验工作。△

，E-mail:346702856@qq.com。

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