益肾化湿颗粒对糖尿病大鼠肾组织的FoxO1表达的影响及意义

刘 静

河北唐山开滦总医院 河北省唐山市 063000

益肾化湿颗粒对糖尿病大鼠肾组织的FoxO1表达的影响及意义

刘 静

河北唐山开滦总医院 河北省唐山市 063000

目的:探讨益肾化湿颗粒对糖尿病大鼠肾组织FoxO1表达的影响，探讨益肾化湿颗粒对糖尿病肾病模型大鼠肾保护作用的可能机制。方法:采用STZ诱导糖尿病肾病大鼠模型，大鼠随机分为正常组、模型组、益肾化湿治疗组、洛汀新治疗组。观察各组大鼠治疗后肾功能（BUN、Scr）、肾脏肥大指数、血β2微球蛋白含量及Fox01的表达等指标的变化。结果:与模型组比较，益肾化湿颗粒治疗组大鼠血BUN、Scr肾脏肥大指数显著改善（P＜0.01），血β2-MG明显下降（P＜0.01），肾小球Fox01阳性表达率明显下降（P＜0.01），益肾化湿颗粒组与洛汀新组比较，各项指标无显著性差异（P＞0.05）。结论:益肾化湿颗粒可能通过降低肾小球Fox01的表达，使肾小球细胞凋亡延缓，从而可以达到保护肾脏，改善肾脏功能的目的。

益肾化湿颗粒；糖尿病肾病；Fox01

随着社会的发展，人们生活水平逐渐提高，糖尿病（diabetes mellitus, DM）的患病率逐年增加，在发达国家，糖尿病肾病已居终末期肾衰竭病因的首位，糖尿病肾病(DN)是糖尿病慢性微血管并发症之一[1]。2015年10月我们观察了益肾化湿颗粒对DN模型大鼠肾小球Fox01表达的影响，探讨其对DN肾小球系膜细胞凋亡的影响，揭示其肾组织保护作用的可能机制。

1 材料

1.1 动物

Wistar雄性大鼠，48只，体质量(250±50)g，由北京维通利华实验动物中心提供。

1.2 用药及试剂

益肾化湿颗粒由广东康臣药业提供;洛汀新：北京诺华制药有限公司生产；链脲佐菌素（STZ）：购自sigma公司;Fox01试剂盒:购自上海研晶生物科技有限公司。

2 方法

2.1 模型制作及分组给药

大鼠适应性喂养1周，称体重，经尿糖、尿蛋白定性检测为阴性后，随机分为正常组（12只）造模组（36只），造模组按60mg/Kg体重一次性左下腹腔注射STZ，正常对照组注射同等剂量的柠檬酸盐缓冲液注射72小时后取鼠尾微量血测定血糖(采用罗氏ACCU-CHEK Active血糖仪)，空腹血糖>16.7mmol/L者，确定糖尿病模型建立。1周后，随机抽取两只测尿微量白蛋白＞15 μg/ml，确定DN模型形成，将造模成功后的18只大鼠随机分为模型组6只，益肾化湿颗粒治疗组6只，洛汀新治疗组6只。正常组 、模型组分别给蒸馏水2 ml灌胃， 益肾化湿颗粒组给予益肾化湿颗粒混悬液150mg/kg灌胃,洛汀新组给洛汀新（1.5mg/kg）蒸馏水混悬液灌胃。以上给药均1次/d，共持续8周。

2.2 观测指标及方法

实验第8周末，隔夜空腹腹腔麻醉下后采血，，抗凝分离血浆留待检测。放射免疫分析方法测定血β2微球蛋白含量，全自动生化分析仪检测BUN，Scr；大鼠处死后摘取右肾，肾脏称重，肾组织常规石蜡包埋，切片，按Fox01试剂盒操作说明，免疫组化法测定Fox01表达。

2.3 资料统计与分析

3 结果

（1）模型组大鼠BUN、Scr较正常组明显增高，差异均具有显著性（P<0.01）；与模型组比较，益肾化湿颗粒组、洛汀新组大鼠BUN、Scr明显降低，有显著性差异（P<0.01）。益肾化湿颗粒、洛汀新两组比较，上述指标无显著性差异（P>0.05）。说明益肾化湿颗粒和洛汀新治疗在改善糖尿病大鼠肾功能、肾脏肥大指数方面均可能有显著疗效，两者之间无显著性差异。

（2）模型组大鼠血β2-MG含量较正常组明显升高，有显著性差异（P<0.01）；益肾化湿颗粒组、洛汀新组与模型组比较血β2-MG含量均有明显降低，有显著性差异（P<0.01）。益肾化湿颗粒组与洛汀新组比较，两者无明显差异（P>0.05）。

（3）各组大鼠肾小球Fox01的表达免疫组化阳性表达分析，每例切片随机选取5个视野，随后利用光镜400倍下将图像捕入病理图像分析软件对每个视野进行分析，可得出阳性细胞的平均光密度值和阳性细胞率，反映了Fox01表达。模型组大鼠肾小球Fox01的表达较正常组明显升高，有显著性差异（P<0.01）；益肾化湿颗粒组、洛汀新组与模型组比较肾小球Fox01的表达均有明显降低，有显著性差异（P<0.01）。益肾化湿颗粒组与洛汀新组比较，两者无明显差异（P>0.05），见表1。

表1：六组相关指标比较（n=12,）

表1：六组相关指标比较（n=12,）

注：与对照组比较，*P<0.05；与DN模型组比较，#P<0.05

检验指标 正常组 DN模型组 益肾化湿颗粒治疗组 洛汀新治疗组KW(g) 5.41±0.85 3.76±0.68* 3.73±0.14* 3.74±0.15*KW/BW(g/Kg) 2.08±0.01 5.03±0.08* 2.79±0.12# 2.67±0.17#β2-MG(mmol/L) 3.51±0.29 10.09±0.08* 8.33±0.66*# 8.63±1.30*#BUN(mmol/L) 7.37±0.37 25.51±1.79* 17.52±1.38*# 14.78±2.65*#Scr(umol/L) 15.31±1.87 32.79±1.33* 23.27±1.93*# 23.02±2.19*#Fox01阳性细胞平均光密度值(OD值) 6.72±0.23 24.01±1.29* 13.81±1.47*# 14.03±1.47*#

4 讨论

系膜细胞是肾小球中的固有细胞之一，在糖尿病肾病的发生发展中发挥着重要机制之一是系膜细胞的凋亡[2]。有研究显示糖尿病时的高糖环境能够诱导肾小球系膜细胞的凋亡增加，抑制系膜细胞凋亡能够延缓糖尿病肾病的进展[3]，多个研究证实，FoxO1参与糖尿病肾病的发生发展，其中一重要机制是FoxO1与高糖诱导的系膜细胞凋亡密切相关[4]。当前学界对益肾化湿颗粒参与肾小球系膜细胞Fox01的表达的研究并不多，本研究显示，模型组、益肾化湿颗粒组及洛汀新组各项检测指标均显著高于正常对照组，益肾化湿颗粒组及洛汀新组显著低于模型组，且本研究提示益肾化湿颗粒及洛汀新均对大鼠糖尿病肾组织Fox01的活性予以有效的抑制。这可以证实STZ造模糖尿病大鼠可以并发糖尿病肾病，而益肾化湿颗粒及洛汀新都可以抑制STZ造模大鼠糖尿病肾病的进展。国内外大量实验证实，肾素-血管紧张素系统阻断剂对慢性肾脏病具有肾脏保护作用，而洛汀新作为活性较强的血管紧张素转换酶抑制剂之一，可以使外周血管阻力降低，进而减轻后负荷，减轻肾内压，因此起到保护肾组织作用；而益肾化湿颗粒由人参、黄芪、白术、茯苓等组成，其中人参能使肾小管管腔的内皮反应性增强及促使脂质去氧化作用；黄芪能补脾气利尿消肿，同时能改善体内氧自由基的清除，改善蛋白质代谢，提高血浆白蛋白水平，茯苓具有利湿化浊之功效，诸药合用可以达到延缓糖尿病肾病进展的作用。益肾化湿颗粒与具有代表意义的ACEI类药物洛汀新具有同样的抑制肾小球系膜细胞Fox01表达的作用，有一定的临床价值[5]，为糖尿病肾病的药物选择提供了更多的可能性。

[1]郑元慧,高丽辉,李玲等.自噬与糖尿病肾病相关性研究进展.国际药学研究杂志,2016,43(05)：844-845.

[2]Cherney DZ.Advances in the treatment of diabetic nephropathy[J].Nephrol News Issues,2013,7(05)：18,33.

[3]Khera T,Martin J,Riley S,et al. Glucose enhances mesangial cell apoptosis.Lab Invest.2006,86：566-577.

[4]Behl Y,Krothapalli P,Desta T,et al.FOXO1 plays an important role in enhanced microvascular cell apoptosis and microvascular cell loss in type 1 and type 2 diabetic rats.Diabetes,2009,58：917-925.

[5]李娜,孙汇,王拓,等.糖尿病肾病发病机制研究进展[J].北华大学学报：自然科学版,2012,2(01)：68-72.