川芎嗪对AD大鼠氧化应激影响的初步研究①

王圣也，伦 泽，石俊杰，刘福兴,许梦婷，宋庆娇，张 涛，柳朝阳

(佳木斯大学，黑龙江 佳木斯 154007 )

川芎嗪对AD大鼠氧化应激影响的初步研究①

王圣也，伦 泽，石俊杰，刘福兴,许梦婷，宋庆娇，张 涛，柳朝阳

(佳木斯大学，黑龙江 佳木斯 154007 )

目的：探讨川芎嗪对AD大鼠氧化应激的影响。方法：用DCFH-DA(二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯)荧光包被探针法检测细胞内总ROS；邻苯三酚自氧化法检测大鼠血清及海马组织SOD活性； 硫代巴比妥酸法检测大鼠血清及海马MDA含量。结果：与AD模型组相比，川芎嗪组大鼠海马细胞内总ROS含量降低(P<0.05)、血清SOD活性升高(P<0.05)和MDA含量降低(P<0.05)、海马细胞内SOD活性升高(P<0.05)和MDA含量降低(P<0.05)。结论：川芎嗪可提高AD模型大鼠的抗氧化能力，防止神经元细胞损伤。

川芎嗪；AD大鼠；氧化应激

阿尔茨海默病(AD)中，β-淀粉样蛋白斑块(Aβ)、神经炎症、神经纤维缠结、氧化应激反应广泛[1]是主要病理特征。氧化应激是AD病理过程的最早应激事件[2，3]。活性氧(ROS)的含量反应细胞内氧化应激的水平，本课题中，我们应用川芎嗪干预，检测AD模型大鼠海马组织细胞内总ROS、SOD和MDA含量，为川芎嗪防治AD提供实验依据。

1 材料和方法

1.1 动物和材料

成年雌性SD大鼠 30只，平均240g，由佳木斯大学动物实验中心提供。

川芎嗪和Aβ1-40购于Sigma公司；ROS、SOD、MD检测试剂盒购于北京中杉金桥生物公司。

1.2 方法1.2.1 动物模型的建立[4]

1%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉各组SD大鼠，注射部位是海马CAI区：根据Cusmhnao与Pellegrin大鼠脑定位图谱，制定注射点是中线左侧2.1mm，前囱后3.4mm，硬脑膜下2.9mm，Aβ1-40溶液注射1μL，留针5min,假手术组生理盐水等量注射。

1.2.2 试验分组与给药

大鼠随机分3组：川芎嗪组：川芎嗪(250mg/kg·d灌胃24d;假手术组与AD模型组：等量生理盐水灌胃。

1.2.3 大鼠海马组织总ROS测定

10微摩DCFH-DA加入单细胞海马组织悬液。37℃作用20min，DMEM细胞洗涤。在488纳米激发波长和发射波长525纳米下，ROS的含量用流式仪检测的荧光强度来表示。

1.2.4 大鼠血清及海马组织SOD活性测定

大鼠心脏血清进行分离，在血清中进行SOD活性检测。在分离的大脑海马组织中加入4℃生理盐水，研磨后获取匀浆组织，取上清液按照试剂盒操作检测SOD活性。

SOD血清值=(对照管OD值-测定管OD值)/对照管OD值/50%×稀释倍数×样本稀释倍数

SOD组织匀浆值=(对照管OD值-测定管OD值)/对照管O值/50%×反应体系的稀释倍数/样本蛋白浓度

1.2.5 大鼠血清及海马组织MDA含量测定

取待测血清及 10%海马组织匀浆，按试剂盒要求配试剂和操作。

血清MDA值=(测定管OD值-对照管OD值)/(标准管OD值-空白管OD值)×标准品浓度×样本稀释倍数

组织匀浆MDA含量=(测定管OD值-对照管OD值)/(标准管OD值-空白管OD值)×标准品浓度(10nmol/mL)/待测样本蛋白浓度。

1.3 统计学方法

2 结果

2.1 川芎嗪对AD大鼠海马细胞总ROS生成的影响

与假手术组比，AD大鼠海马细胞ROS含量增加(P<0.05)。川芎嗪治疗后，AD模型大鼠海马细胞内总ROS含量降低(P<0.05)，与假手术组比无显著差异(P>0.05) ，见表1。

2.2 川芎嗪对AD大鼠血清SOD活性和MDA含量的影响

与假手术组比，AD大鼠血清SOD活性降低

(P<0.05)。川芎嗪治疗后，与AD模型组相比，大鼠血清SOD活性升高(P<0.05)，与假手术组比无显著差异(P>0.05)。见表2。与假手术组比，AD大鼠血清MDA含量升高(P<0.05)。川芎嗪治疗后，与AD模型组相比，大鼠血清MDA含量降低(P<0.05)，与假手术组比无显著差异(P>0.05)。见表2。

表1 各组大鼠海马组织细胞内总ROS含量±s,n=10)

注：与假手术组相比a)P<0.05，与AD模型组相比b)P<0.05。

表2 各组大鼠血清SOD活性和MDA含量

注：与假手术组相比a)P<0.05，与AD模型组相比b)P<0.05。

2.3 川芎嗪对AD模型大鼠海马细胞内SOD活性和MDA含量的影响

与假手术组比，AD大鼠海马细胞内SOD活性降低(P<0.05)。川芎嗪治疗后，与AD模型组相比，大鼠海马细胞内SOD活性升高(P<0.05)，与假手术组比无显著差异(P>0.05)，见表3。与假手术组比，AD大鼠海马细胞内MDA含量升高(P<0.05)。川芎嗪治疗后，与AD模型组相比，大鼠海马细胞内MDA含量降低(P<0.05)，与假手术组比无显著差异(P>0.05)，见表3。

表3 各组大鼠海马细胞内SOD活性和MDA含量

注：与假手术组相比a)P<0.05，与AD模型组相比b)P<0.05。

3 讨论

氧化应激指有害刺激作用机体时，氧化系统和抗氧化系统失衡，活性氧自由基(ROS)产生过多超出氧化物的清除，导致组织损伤[5,6]。细胞内氧化应激的水平可由ROS的生成多少直接反应。本实验川芎嗪干预后，AD模型大鼠总ROS含量明显降低，说明川芎嗪对AD模型大鼠海马组织细胞内氧化应激水平有明显的影响。川芎嗪减轻氧化应激对神经元损伤可能通过降低过氧化物和氧化自由基的生成。生物体清除自由基通过SOD(超氧化物歧化酶)，SOD可阻断并修复氧化自由基对组织细胞的侵害[7, 8]。MDA是是生物细胞的氧化应激导致脂质过氧化的终末代谢产物。AD发病过程中MDA的毒性可使神经元变性坏死凋亡，因此，机体受ROS攻击的程度MDA能够间接反映出来[9,10]。老年斑、神经元纤维缠结常和MDA的高水平同时出现在AD模型大鼠脑组织。本实验中AD模型大鼠血清SOD活性下降，MDA含量显著升高。川芎嗪干预后，提高了SOD活性，可使脂质过氧化减少，氧化自由基被有效的清除，川芎嗪干预后，降低了MDA含量，减轻了组织脂质过氧化损伤，MDA毒性引发的组织损伤可以避免。综上，AD大鼠抗氧化能力川芎嗪能够在整体水平提高。本实验中，川芎嗪干预后，明显升高AD大鼠海马细胞SOD活性，降低MDA含量，提示川芎嗪可从整体和病变的关键区域(海马组织)两方面提高AD模型大鼠机体的抗氧化能力。

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1.黑龙江省大学生创新创业训练计划项目，编号：201610222037；2. 佳木斯大学科基础研究类(自然类)面上项目，编号：JMSUJCMS2016-023；3.黑龙江省普通高等学校青年学术骨干支持计划项目，编号：1252G059。

王圣也(1996～)男，黑龙江巴彦人，在校本科生。

柳朝阳(1971～)男，黑龙江嘉荫人，硕士，副主任医师，硕士研究生导师。E-mail：ztlzy888@163.com。

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1008-0104(2017)02-0029-02

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