HBV-DNA及HBeAg阴性乙型肝炎病毒感染者乙型肝炎病毒大蛋白（HBV-LP）检测的临床价值

杨忠臣 袁 轶 姜丽丽 张 舒

（齐齐哈尔市第二○三医院，黑龙江 齐齐哈尔 161000）

HBV-DNA及HBeAg阴性乙型肝炎病毒感染者乙型肝炎病毒大蛋白（HBV-LP）检测的临床价值

杨忠臣 袁 轶 姜丽丽 张 舒

（齐齐哈尔市第二○三医院，黑龙江 齐齐哈尔 161000）

目的 对慢性乙型肝炎患者血清检测乙型肝炎病毒的脱氧核糖核酸（HBV-DNA）及乙型肝炎病毒E抗原（HBeAg），结果阴性的标本进一步检测乙型肝炎病毒大蛋白（HVB-LP），用以判断乙型肝炎病毒是否复制的临床价值。方法 以302例慢性乙型肝炎患者为研究对象，50例健康体检者做为对照组，采取酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血HBV-LP和乙型肝炎病毒标志物（HBV-M），荧光定量PCR检测HBV-DNA。进行HBV-DNA、HBV-LP和HBeAg的阳性率差异性比较，比对HBV-DNA及HBeAg阴性患者检测血清HBV-LP的阳性率。结果 HBV-LP阳性率为78.8%，较HBV-DNA、HBeAg均敏感。HBV-LP检出率为78.8%高于HBV-DNA（70.8%）（χ2=0.4674，P＞0.05），二者无显著性差异， HBV-LP和HBeAg检出率（40.7%）比较（χ2=91.058，P＜0.01）二者差别有非常显著意义；HBV-LP的HBeAg阴性患者阳性率为69.3%，对比HBV-DNA阴性患者HBV-LP阳性检出率（11.27%）（χ2=62.43，P＜0.01）显著高；有18例慢性乙型肝炎患者血清检测HBV-DNA和HBeAg皆是是阴性的标本中，检出4例HBV-LP阳性。结论 血清HBV-LP检测是对HBV-DNA及HBeAg检测的补充，HBV-LP是鉴别慢性乙型肝炎患者体内病毒是否复制的敏感指标，对提高监测慢性乙型肝炎患者体内的病毒复制、观察疗效及判断预后提供了进一步的保障。

乙型肝炎病毒大蛋白（HBV-LP）；乙型肝炎病毒DNA；乙型肝炎病毒标志物（HBV-M）

中国是乙型肝炎病毒（HBV）感染性疾病的重灾区，约有1.2亿人感染乙型肝炎病毒，约为1/3的全球感染者，其中乙型肝炎E抗原（HBeAg）阴性慢性肝炎平均占52%，约20%的慢性HBV感染患者中死于HBV感染相关的肝病[1]。治疗慢性乙型肝炎患者临床常用HBVDNA＜103拷贝/mL为阴性或HBeAg转阴（产生E抗体）来判断患者的HBV停止复制，而临床检测证实部分HBeAg阴性的患者体内病毒仍然大量复制，并且HBV-DNA转阴时也不能彻底排除HBV的复制[2-3]。乙型肝炎病毒大蛋白（HBV-LP）是乙型肝炎病毒（HBV）上重要的传染性颗粒（Dane颗粒）和亚病毒颗粒管的包膜蛋白，它是乙型肝炎病毒形式完整外膜的一个重要指标，由HBsAg和前S蛋白（PreSl蛋白和PreS2蛋白）组成，HBV-LP的前S蛋白具有复杂跨膜构象拓扑结构，其对乙型肝炎病毒复制过程起激活作用，并参与在细胞中的病毒颗粒的调节释放，与病毒复制密切相关[4-6]。本实验通过对302例慢性乙型肝炎患者血清进行HBV-LP、HBV-DNA和HBV-M定量的检测，探讨HBV-LP的检测在慢性乙型肝炎HBV-DNA和HBeAg阴性患者中的临床应用价值。

1 资料与方法

1.1 研究对象：选取2015年健康体检者50例为对照组，排除病毒肝炎感染者，其中，男性28例，女22例，年龄分布在19～67岁。另外，选取2015年1月至2016年4月感染科住院及肝病专家门诊就诊慢性乙型肝炎患者302例为实验组，排除其他型肝炎病毒感染，以及非病毒引起的肝脏疾病等。其中，男性233例，女性69例；年龄7～76岁。诊断标准依照《慢性乙型肝炎防治指南（2014年版）》，由中华医学会的肝病学分会和感染病学分会联合制订。

1.2 试剂与仪器：①乙型肝炎病毒大蛋白（HBV-LP）酶免定量检测试剂由北京热景盐物技术有限公司生产（结果判断标准：CUTOFF=阴性对照OD均值Nc×2.1，阳性对照OD值≥1.0，阴性对照OD值＜0.1，样品OD值≥CUTPFF判为阳性）；②HBV-DNA采用荧光定量聚合酶链反应测定试剂盒（深圳市匹基生物工程股份有限公司），结果判断标准以HBV-DNA拷贝数＞103 copy/mL判断为HBV-DNA阳性；③HBeAg血清标志物采用酶联免疫法（ELISA）检测试剂盒（英科新创厦门科技有限公司）；上述试验严格按照标准操作规程进行操作。主要仪器为深圳RAYTO公司生产的RT-2100C型全自动酶标仪，美国BIO公司生产的荧光定量PCR仪。

1.3 统计学处理：应用SPSS19.0进行数据的统计分析，计数资料用率表示，采用χ2检验进行两指标间阳性率的比较和相关分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 对照组的50例健康体检者血清HBV-M检测结果：41.8%抗-HBs阳性，其他项目皆阴性，HBV-DNA、HBV-LP阳性检测率为零。慢性乙型肝炎患者各项指标的检测结果HBV-LP阳性率为78.8%，高于HBVDNA的检出阳性率76.5%，以及HBeAg的检出阳性率40.7%。HBV-LP检出率为78.8%高于HBV-DNA（76.5%）（χ2=0.4674，P＞0.05）二者无显著性差异，HBV-LP和HBeAg检出率（40.7%）比较（χ2=91.058，P＜0.01）二者差别有非常显著意义；HBV-LP的HBeAg阴性患者阳性率为69.3%，对比HBV-DNA阴性患者HBV-LP阳性检出率（11.27%）（χ2=62.43，P＜0.01）显著高。HBV-DNA和LHB-LP阳性的标本检测值比较，LHB-LP的检测值（OD值）与HBV-DNA拷贝数对数值之间呈正相关，相关系数为r=0.86，P＜0.01，有18例慢性乙型肝炎患者血清检测HBV-DNA和HBeAg皆是是阴性的标本中，检出4例HBV-LP阳性。HBV-LP能够反应HBV的复制情况见表1。

表1 HBeAg、HBV-DNA、HBV-LP检出率

2.2 HBV-DNA及HBeAg阴性样本LHBs检测结果：见表2。在179例HBeAg阴性血清中，LHBs的阳性率为69.3%，在71例HBV-DNA阴性血清中LHBs的阳性率11.27%。

表2 HBV-DNA及HBeAg阴性标本中LHBs检测结果[n（%）]

3 讨 论

乙型肝炎病毒大蛋白是传染性颗粒（Dane颗粒）和亚病毒颗粒的主要包膜成分，Dane颗粒的数目和亚病毒颗粒的数目与HBV的复制程度密切相关。HBV-LP在肝细胞内质网聚集是导致内质网应激的关键因素，亚病毒颗粒能通过反式激活使病毒继续复制。目前，在抗病毒治疗慢性乙型肝炎患者时，能抑制乙型肝炎病毒前基因组RNA复制的原始模板（cccDNA）再复制，但乙型肝炎病毒表达蛋白活性不能及时抑制，在HBV-DNA数量＜103copy/mL的低水平时，HBV-LP仍能在血清中检测到，证明患者体内Dane颗粒和亚病毒颗粒依然存在，说明HBV的复制仍在继续[7-11]。因此检测HBV-LP对临床上判定HBV复制具有一定的意义。

血清HBV-DNA检测是评估的HBV复制可靠的指标，可直接反映患者体内乙型肝炎病毒的载量，是判定携带者和乙型肝炎患者有无传染性重要依据，是目前判断乙型肝炎病毒是否复制和抗病毒治疗中评判药物疗效的良好指标。但HBV-DNA检测对PCR实验室条件和仪器设备要求较高，操作复杂，并且扩增产物极易受到污染而产生假阳性检测结果，特别是基层医院不能进行HBV-DNA检测，仅仅以HBeAg阳性判断HBV是否复制、以及传染性的强弱，试验表明HBeAg阴性并不代表HBV复制能力减低，在乙型病毒肝炎治疗中，可导致病毒基因前C区或者CP区发生突变，使HBeAg合成受阻，故HBeAg检测阴性，不能除外病毒的复制[12]。实验数据表明，231例慢性乙型肝炎患者HBV-DNA阳性乙型肝炎患者血清中，随着HBV-DNA拷贝数的升高其血清LHB-LP的含量（OD值）呈上升趋势，两项检测具有良好的相关性（r=0.86，P＜0.01），说明体内HBV-LP与病毒复制程度密切相关，能准确反映出患者体内病毒的复制的情况，各项指标的检测结果HBV-LP阳性率为78.8%，高于HBV-DNA的检出率76.5%，以及HBeAg的检出率40.7%。HBV-LP和HBV-DNA检出率二者无显著性差异，HBV-LP和HBeAg检出率比较二者差别有非常显著意义，HBV-LP的HBeAg阴性患者阳性率为69.3%，对比HBV-DNA阴性患者HBV-LP阳性检出率（11.27%）（χ2=62.43，P＜0.01）显著高，有8份HBV-DNA阴性标本检测结果为而LHB-LP阳性，因此，抗病毒治疗即使HBVDNA转阴，也不能表明HBV已清除，如果此时盲目停止抗病毒治疗，又何能使HBV死灰复燃病情复发，血清HBV-LP的检测，可补充乙型肝炎患者抗病毒治疗过程中HBV-DNA检测在终止治疗时机和疗效观察中的不足。有124份HBeAg阴性标本LHB-LP检测结果为阳性，长期抗病毒治结果疗可致使病毒基因发生突变，可使HBeAg合成受阻，此时慢性乙型肝炎患者血清HBeAg检测阴性也不能说明病毒停止复制，HBV-LP的检测就可判断患者体内HBV的复制状况，对病情监测、观察疗效和判断预后有很高的临床价值。

总之，LHB-LP是HBV感染的一个新的标志物，对慢性乙型肝炎患者特别是血清HBV-DNA及HBeAg阴性的乙型肝炎患者，检测血清HBV-LP的是反映患者体内病毒持续复制的敏感指标，能够准确的反映出乙型肝炎患者体内病毒的感染情况，从适用和推广的角度看，LHB-LP检测由于易操作、成本低廉及易于推广，因而更优于HBVDNA的检测。可作为HBV-DNA的替代及补充检测指标，对提高血清学手段诊断HBV的水平有积极意义。

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1671-8194（2017）10-0048-02