菊米提取物对高血压大鼠模型视网膜损伤修复的影响

项微微

浙江省台州市中医院 浙江 台州 318000

菊米提取物对高血压大鼠模型视网膜损伤修复的影响

项微微

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目的：观察菊米提取物对高糖高脂致高血压大鼠模型眼底损伤的修复作用。方法：将大鼠随机分成正常组、模型组及给药组，模型组及给药组建立高糖高脂致高血压大鼠模型。给药组给予菊米提取物，正常组、模型组给予同体积生理盐水，连续灌胃30天后观察指标：①组织生化：视网膜组织血管舒缩因子、氧化指标。②视网膜铺片PAS染色。结果：菊米提取物可升高高血压动物模型视网膜组织中NO、Glu、SOD含量，降低MDA、iNOS、vWF、MMP-9、EGF、ET-1、ICAM-1。使动静脉血管比例接近1:2；改善视网膜血管及细胞排列等病理状态。结论：菊米提取物可以改善高血压动物模型组织抗氧化能力，减轻神经元损伤，改善视网膜血管内皮损伤，维持视网膜微环境稳定。

菊米 高血压视网膜损伤 大鼠 实验研究

笔者通过实验研究观察菊米提取物对高糖高脂致高血压大鼠模型眼底损伤的修复作用，结果提示菊米提取物可以改善高血压动物模型组织抗氧化能力，减轻神经元损伤，改善视网膜血管内皮损伤，维持视网膜微环境稳定。具体方法如下。

1 材料和方法

1.1 实验动物:SD大鼠，雌雄各半，体重180～220g，30只，浙江省实验动物中心，实验动物合格证号SCXK（浙）20140033。

1.2 实验药剂:菊米，批号2015年8月1日，亳州市菊花缘农业发展有限公司。超氧化物歧化酶测定试剂盒（批号2015022511）、谷氨酸测定试剂盒（批号02/25/ 2015）、丙二醛测定试剂盒（批号2015022510）、一氧化氮测定试剂盒（批号2015022508）、一氧化氮合酶（分型）测定试剂盒（批号2015022511）、ET-1 ELISA试剂盒（批号08/2015），以上均购自北京瑞格博科技发展有限公司。

1.3 实验方法:分述如下。

1.3.1 菊米提取物制备:菊米，将600g菊米加入10倍量提取两次，提取液浓缩至60ml备用。

1.3.2 分组及给药:将SD大鼠随机分成三组，正常对照组、模型组及给药组（25g/kg）。高糖高脂模型组:给予高糖高脂饲料（普通饲料76%、蔗糖10%、猪油9%、胆固醇3%、胆盐1%）喂养，自由饮食、采水。造模4周后，给药组每天按10ml/kg体积给药1次，正常对照组、模型对照组分别给予等容量生理盐水。连续给药30天。

1.3.3 视网膜组织匀浆:给药30天后，处死大鼠，迅速摘取眼球，小心剥离视网膜，研磨均匀，匀浆液测定视网膜组织生化指标SOD、MDA、NO、iNOS，以及细胞因子ET-1、Glu、EGF、MMP-9、ICAM-1、von Willebrand含量。

1.3.4 视网膜消化铺片:大鼠左眼球，于4%多聚甲醛溶液中固定48h以上，取出眼球流水下冲洗过夜，预冷的生理盐水中剥离视网膜，PBS（0.01mol/L，PH7.4）漂洗10min，甘氨酸缓冲液隔夜浸泡（0.15mol/L，PH7.4），将视网膜放入1.5mL的离心管中，加入溶解于0.1MTris缓冲液中的3%胰蛋白酶（Amresco，Serva 1:250）消化液，37℃孵化箱消化3h，吸出消化液，用蒸馏水漂洗，轻轻振荡多次，显微镜下观察仅剩下一层透明的视网膜血管网，将其倒在载玻片上，待其展开后，置室温自然干燥，存放于切片盒中4℃保存以备PAS-H染色。

1.4 统计学方法:计量资料数据以-x±s表示，采用SPSS 17.0统计软件做单因素方差分析，结果做t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 实验结果

2.1 各组视网膜组织生化指标比较:见表1。

表1 各组视网膜组织生化指标比较（±s）

表1 各组视网膜组织生化指标比较（±s）

注:与正常组比较，*P＜0.001；与模型组比较，#P＜0.001。

指标SOD(U/mL) MDA(nmol/mL) NO(μmol/L) iNOS(U/mL)给药组124.63±1.09#5.84±0.34#18.46±0.93#812.77±3.12#正常组120.96±0.91 4.30±0.24 12.70±0.56 741.83±1.56模型组116.28±2.11*4.73±0.10*11.45±0.97*824.43±2.13*

2.2 各组视网膜组织细胞因子比较:见表2。

2.3 视网膜铺片结果:如图1所示。正常SD大鼠视网膜铺片血管管径均匀，比例固定，血管内周细胞、内皮细胞排列规则，血管无闭塞区，没有无细胞血管区域。高糖高脂模型大鼠视网膜铺片中，血管管径粗细不均匀，血管内周细胞及内皮细胞排列无规则，影周细胞异常多。而给药组大鼠视网膜铺片中，血管管径均匀，血管内细胞排列规则。

表2 视网膜组织细胞因子测定（±s）

表2 视网膜组织细胞因子测定（±s）

注:与正常组比较，*P＜0.001；与模型组比较，#P＜0.001。

细胞因子ET-1(ng/L) EGF(ng/L) MMP-9(ng/ml) ICAM-1(ng/ml) VWF(ng/ml) Glu(μmol/L)给药组87.62± 6.69 187.46±13.80 1.67± 0.19 4.68± 1.44 9.09± 0.50 211.91± 1.48#正常组84.92±1.06 193.10±4.12 1.61±0.11 4.79±1.34 9.74±0.69 280.65±1.82模型组92.49±3.56*198.13±6.98 1.89±0.16 4.96±1.55 9.17±0.55 210.13±1.90*

图1 大鼠视网膜铺片

3 讨论

菊米，即精制野菊花花蕊，呈黄绿色，因形状如米粒，故称野菊米。据《增广本草纲目》记载:“处州出一种山中野菊，土人采其蕊而干之，如半粒绿豆大，甚香而轻圆黄亮。败毒、散疔、祛风、清火、明目为第一。产自遂昌石练山中。”研究[1]发现，菊米含有菊米内脂、蛋白质、黄酮甙、挥发油、氨基酸等多种营养成份及抗病要素，具有杀菌、降压、降脂等作用，尤其是对对于高血压临床患者眼底视网膜病变具有一定的保护作用[2]，对视力衰退及高血压患者具有较好的抗病保健功效。

目前国内对菊米的研究主要有对心血管的作用，对血压、血脂的影响[3]，调整血流动力学和抗心肌缺血作用，清除亚硝酸盐及抑制N-亚硝基二乙胺(NDEA)生成，抑菌和抗病毒作用；抗氧化作用以及毒性作用等。从本实验视网膜铺片中可以发现，由高糖高脂引起的高血压大鼠模型眼底视网膜血管管径粗细不均匀，血管内周细胞及内皮细胞排列无规则，影周细胞异常多。血管内皮细胞增生、周细胞减少，出现影周细胞、无细胞毛细血管、毛细血管基底膜增厚等是糖尿病性视网膜病变特征性改变[4]。本实验没有做细胞凋亡实验，未知血管内皮细胞是否增生、周细胞是否减少，但可以观察到视网膜铺片中高糖高脂模型组影周细胞异常多。本实验中发现，给药后，发现模型大鼠眼底视网膜组织SOD、NO、Glu含量升高，而iNOS含量降低，减少了血管闭塞区，影周细胞减少，缓解高糖高脂及高血压对眼底视网膜造成的损伤。提示菊米提取物对高糖高脂引起的高血压大鼠模型视网膜损伤也有一定的改善作用。

[1]廖树森.高血压病眼底诊断学[M].西安:陕西科学技术出版社,1990:510.

[2]应海航,徐高.益气清肝活血汤治疗高血压性视网膜病变40例临床观察[J].浙江中医杂志，2015，50(3):192-192.

[3]黄景明,黄诚孝.菊米对血压、血脂影响的研究[J].浙江中医杂志,,2006,41(4):233-234.

[4]周水平,郭治昕,仝小林,等.复方丹参滴丸对糖尿病大鼠视网膜病变的影响[J].中国中西医结合杂志，2002(S1): 174-178.

2016-11-14