HDA19调控拟南芥对真菌Botrytiscineara的抗性反应

孙淑豪　胡彦如　余迪求

摘要： HDACs（Histone deacetylase）家族蛋白质负责组蛋白H3K4和H4K19脱乙酰化，并参与植物生长和应激反应的信号转导过程。茉莉酮酸酯Jasmonates（JA）是一种重要的天然植物激素，不仅调节植物生长和发育而且还参与植物对多种逆境胁迫响应的信号转导和调控过程。但是，HDACs在植物中参与JA信号转导的具体机制目前还不是很清楚。该研究以HDA19（Histone deacetylase 19）为对象，探讨了HDACs在植物JA信号转导中的功能和作用。结果表明：HDA19的TDNA插入纯合突变体在JA处理条件下没有出现明显的JA根长反应。在相同处理条件下，hda19的不同突变体株系与相同生态型背景的野生型植株（WT）花色素苷含量无显著差异，但下游JAZ1、VSP1等JA信号通路的标记基因都显著上调表达。同时，hda19相比于WT对真菌Botrytis cineara的抗性显著增强，且hda19中下游基础防御标记基因PDF1.2、Thi2.1、ERF1等的表达水平显著高于WT。基于上述研究结果，该研究认为HAD19通过JA信号通路负调控拟南芥对真菌B. cineara的防御反应。

关键词： HDA19， JA， Botrytis cineara， 生物胁迫

中图分类号： Q945.78

文献标识码： A

文章编号： 10003142（2017）11135513

Abstract： HDACs （Histone deacetylase） family proteins are responsible for the deacetylation of histones H3K4 and H4K19 and are involved in signal transduction processes of plant growth and stress. Jasmonates（JA） is an important natural plant hormone that not only regulates plant growth and development but also participates in the process of signal transduction and regulation of plant responses to multiple stress conditions. However， the specific mechanism by which HDACs participate in JA signal transduction is not very clear. We investigated the function and role of HDACs in plant JA signal transduction with HDA19 （Histone deacetylase 19）. In this study， we found that the HDA19 TDNA insertion homozygous mutant did not show a significant JA root length response treated by MeJA. Under the same conditions， there was no significant difference in anthocyanin content between different mutant lines of hda19 and WT plants of the same ecotype background. However， JAZ1， VSP1 and other downstream JA signaling pathway marker genes were significantly upregulated expression. At the same time， the resistance of hda19 to fungi Botrytis cineara was significantly enhanced compared with WT， and the expression levels of basic defense marker genes PDF1.2， Thi2.1 and ERF1 were significantly higher than WT in hda19. Based on these results， we believe that HAD19 negatively regulates Arabidopsis thaliana defense against Botrytis cineara via JA signaling pathway.

Key words： HDA19， JA， Botrytis cineara， biological stress

在自然界中，植物不僅受到非生物条件，如干旱、寒冷、冷冻、高温和洪水的威胁；而且还受到病毒、细菌、真菌和昆虫等病原体引起的生物胁迫的侵害。在长期的进化过程中，植物和病原体不断相互适应，使植物进化出一系列防御措施来抵抗病原体的侵染。植物针对细菌或真菌病原体的免疫应答，主要通过依赖于一组病原体相关分子模式（pathogen associated molecular pattern， PAMP）的模式识别受体（pattern recognition receptor，PRR）来识别保守的病原体信号分子（Boller & He，2009）。 PTI（PAMPtriggered immunity）抗性病毒病原体的功能已在哺乳动物细胞中得到报道，但在植物中尚未完全了解（Calil & Fontes，2016）。然而，最近的几项研究发现了PTI和其相关成分也参与植物抗病毒防御反应的证据（Korner et al，2013；Nicaise，2014；Iriti & Varoni，2015；Calil & Fontes，2016；Nicaise & Candresse，2016；Niehl et al，2016）。一般来说，植物主要基于RNA或蛋白质介导病毒病原体触发的防御反应的。其中，主要涉及宿主RNA介导的RNA沉默途径的抗性反应，这是病毒侵入触发的基础防御反应，这个途径通过对病毒RNA的切割达到抗病毒侵染植物体的目的。除了这种基础防御反应外，还有宿主抗性（R）蛋白介导的针对病毒病原体的防御反应，这条途径能在大多数情况下限制病毒复制和传播（Zhou & Chai，2008；Verlaan et al，2013；Nakahara & Masuta，2014）。 R基因介导效应物触发的免疫（effectortriggeredimmunity， ETI）是PTI的高度扩增版本（Jones & Dangl，2006）。 PTI和ETI的开放转导可激活下游如茉莉酸（JA）、水杨酸（SA）、乙烯（ET）等信号通路，调节免疫相关基因表达，达到帮助植物预防病原体感染的目的。

由脂质衍生的植物激素茉莉酮酸酯Jasmonates（JAs）不仅响应于植物生长和发展，同时也参与病原体和草食动物的防御反应。生物胁迫或非生物胁迫将促使植物茉莉酮酰L异亮氨酸（JAIle）含量的升高，被其共受体COI1JAZ所感知，随后通过SCFCOI126S蛋白酶体途径降解抑制子JAZs蛋白（Xu et al， 2002；Chini et al，2007；Thines et al，2007；Yan et al，2009； Sheard et al，2010）。JAZs蛋白，具有Jas和ZIM结构域，通过与广泛的转录因子相互作用负调节茉莉酮酸信号； JAZs降解使这些调控因子释放，随后激活下游生长发育和应激反应相关的响应基因等下游信号。在这些下游调节因子中，bHLH家族转录因子JASMONATE INSENSITIVE1（JIN1/MYC2），MYC3和MYC4是JAZ蛋白质的直接靶标，调控例如抑制根伸长和防御反应等过程（Boter et al，2004；Lorenzo et al，2004；Chini et al，2007；Dombrecht et al，2007；Fernández-Calvo et al，2011）。此外，JA还负责植物繁殖、其他生长和发育过程；包括侧向和不定根形成，雄性能育性，花青素积累，种子萌发，叶片衰老，以及腺毛状体、树脂管和蜜腺的形成（Wasternack & Hause， 2013；Campos et al，2014；Kazan，2015；Wasternack & Strnad，2016；Staswick et al，1992；Feys et al，1994；Pauwels et al，2010；Mcconn & Browse，1996；Sanders et al，2000；Stintzi & Browse，2000；Cheng et al，2009；Franceschi & Grimes，1991；Shan et al，2009；Ueda & Kato，1980；Schommer et al，2008；Shan et al，2011）。 JAs还帮助植物防御各种草食动物以及坏死性病原体的侵染（Howe & Jander，2008；Antico et al，2012； Erb et al，2012； Campos et al，2014；Yan & Xie，2015）。 JA参与植物防御叶食性昆虫，如毛虫和甲虫；以及穿刺吸食昆虫，如蓟马、叶蝉、叶螨、真菌癣和虫蛆；防御利用管针器在韧皮部进食的蚜虫和白蛉，以及在叶片上下表面之间软组织上进食的昆虫等（Howe & Jander，2008；Campos et al，2014；Lu et al，2015； Goossens et al，2016）。除草食动物外，JA信号介导植物对抗坏死性病原体的防御，如细菌病原体红色腐质杆菌（胡萝卜软腐欧文氏菌亚种）、真菌病原体如链格孢菌、Botrytis cinerea、Plectosphaerella cucumerina和尖孢镰刀菌，以及卵菌（Campos et al，2014；Yan & Xie，2015）。

组蛋白乙酰化不仅是最早被研究报道的组蛋白化学修饰，而且还是组蛋白翻译后修饰的表征之一（Allfrey et al，1964）。负责催化组蛋白乙酰化的酶称为组蛋白乙酰转移酶（HAT）（Gallwitz，1971），相对的组蛋白去乙酰化酶（HDAC）基于其能从组蛋白中除去乙酰基的能力而命名。然而，这些酶还利用除组蛋白之外的蛋白质作为催化底物，如转录因子或基因转录的配体调节剂等（Chen & Tian，2007）。核小体的四种核心组蛋白均可被乙酰化/去乙酰化修饰，且核小体已被报道包含26个确定的乙酰化位点。Lusser et al（2001）发现在植物中，H3的赖氨酸残基的第9、第14、第18和23位点以及H4的赖氨酸残基的第5、8、12、16和20位点都能够被乙酰化和脱乙酰化（Fuchs et al，2006 ）修饰通过改变染色质结构调节基因转录、DNA复制和DNA修复等过程（Bertos et al，2001）。组蛋白乙酰化可降低相邻核小体之间的相互作用，并防止核小体压缩成30 nm染色质纤维，从而松散染色质结构促进转录起始（Shahbazian & Grunstein，2007）。由HDAC介导的低乙酰化则是促进染色质丝螺旋化使结构更致密，阻断转录因子到靶基因的接触导致基因的阻遏/沉默（Hollender & Liu，2008）。除了改变染色质结构，组蛋白乙酰化还能改变核小体的表面活性，并调控参与基因转录蛋白质的结合（Berger，2007；Shahbazian & Grunstein，2007）。在过去10年中，植物HDACs得到更多的关注，许多HDACs家族成员从植物如玉米、拟南芥、水稻、大麦（Demetriou et al，2009）、马铃薯（Lagace et al，2003）、葡萄（Busconi et al， 2009）和煙草（Bourque et al，2011）中分离鉴定。即使在木本植物山毛榉中，HDACs也已被鉴定。基于和酵母HDACs的序列同源性，植物HDACs被分为三个不同的亚家族，其中两个主要的亚族为植物和其他真核生物共有：RPD3（reduced potassium dependency protein 3）HDA1（HDAC1）亚家族和SIR2（silent information regulator 2）亚家族。第三个亚家族HD2家族在植物细胞中特异存在，且至少在结构水平上严格区别于其他家族（Fu et al，2007）。第一个被分离的植物HDACsZmRpd3属于RPD3HDA1超家族，在玉米中被鉴定并发现其在功能上补充酵母rpd3突变体（Rossi et al，1998）。在拟南芥中，编码具有脱乙酰酶活性蛋白质的18个基因中，根据聚类模式和引导支持，鉴定了12个ZmRPD3的HDACs同源物并分类为三个不同的类别：I类（由HDA6、7、9、10、17和19组成也称为HDA1）由RPD3结构类似来限定；II类（包括HDA5、15和18）定义HDA1样组；IV类（仅由一个成员HDA2组成）定义为AtHDA2组（Alinsug et al，2009，2012），后一类在一些其他研究中也称为III类（Hollender & Liu，2008）。其他RPD3 HDACs即HDA8和HDA14未分类。

在RPD3/HDA1家族的12个成员中，只有HDA6和HD1/HDA19已经被广泛研究。同时人们发现在拟南芥中，各种亚细胞区室中的大量非组蛋白也可以被乙酰化（Finkemeier et al，2011；Tran et al，2012；Wu et al，2011）。然而，所有这些HDACs的分子靶点仍然很大程度上未知。HDACs基因的表达响应于应激，并且由应激相关激素如水杨酸（SA）、茉莉酸（JA）或脱落酸（ABA）调节（Fu et al，2007；Hu et al，2009；Xu et al，2013）。 SA和JA介导植物防御反应，而ABA则参与水胁迫反应调节植物水平衡和渗透胁迫耐受性。HDA6在许多基本过程中起作用，例如转录基因沉默（Probst et al，2004）、开花和衰老（Wu et al，2000）或ABA（脱落酸）和盐信号传导（Chen et al，2010）。据报道HD1/HDA19可以调节胚胎发育（Tanaka et al，2008），也参与对生物和非生物胁迫的调控反应（Song et al，2005；Chen & Wu，2010；Choi et al，2012）。在拟南芥中，JA信号诱导了AtHDA6和AtHDA19的表达（Zhou et al，2005）。HDACs基因的表达可能影响植物生长和发育，产生各种可见表型。 RPD3同源HDACs基因（AtHDA6，AtHDA9和AtHDA19）的表达谱高度相似（Xu et al，2013）。拟南芥AtHDA19定位于核独立区域，负责全局转录调控（Fong et al，2006）。拟南芥AtHDA19可在整个胚胎发生过程中表达，并与Topless1（TPL1）（转录共抑制子）一起作用，以确保枝杆的正确发育（Long et al，2006）。AtHDA19的转录可被病原体相关激素（如JA和乙烯）和真菌病原体链格孢菌（Alternaria brassicicola）诱导（Zhou et al，2005）。研究发现AtHDA19与转录因子WRKY38和WRKY62相互作用，WRKY38和WRKY62是植物病害抗性的负调节物，HDA19可以消除它们靶基因激活物的活性。最近，Choi et al（2012）报道在拟南芥中，AtHDA19在由依赖SA信号传导途径介导的基础防御中起负调控作用。AtHDA19也可以由另一种细菌病原体，假单胞菌（Pseudomonas syringae）誘导（Kim et al，2008）。

本研究发现，HDA19受JA信号的调控。但是，令人惊讶的是，hda19在JA处理下没有显示明显的JA根长度反应。花青素含量测定结果显示，不同突变体株系的hda19在相同的处理条件下与野生型相比没有显著差异，但它们体内花色素苷的含量却都显著高于myc234。然而，hda19相比于野生型却增强了拟南芥对真菌B. cineara的抗性，hda19下游抗病相关标记基因PDF1.2、Thi2.1、ERF1的表达水平都高于WT。本研究结果表明，HDA19在JA调节的植物对真菌疾病抗性中发挥负调节作用。

1材料与方法

1.1 材料和植物生长条件

所有hda19 的纯合TDNA插入突变体都是Columbia0遗传背景。从Arabidopsis Biological Resource Center购买hda194（SALK_139443）、hda195（CS370961）和hda196（SALK_027241C），并通过两对引物筛选，见表1。突变体myc234、myc2已在Patricia et al（2011）中报道。在本研究中，野生型和突变植物用于Columbia0遗传背景，先进行种子表面灭菌 [20%（v/v）漂白15 min]，然后播种在半倍Murashige和Skoog（1/2 MS）培养基并在4 ℃下保持3 d。将一周龄的植物转移到土壤中。将该植物在22 ℃下 10 h光/14 h暗光周期下的人工生长室中生长。植物激素MeJA购自SigmaAldrich。Taq DNA聚合酶由Takara Biotechnology提供，其他常用化学品从上海Sangon购买。

1.2 JA处理

为了测量茉莉酮酸处理的幼苗根长度的变化，将拟南芥种子在不含或具有1、10或25 μmol·L1 MeJA的Murashige和Skoog（MS）琼脂培养基上播种，在4 ℃下储存3 d，并在22 ℃垂直生长，1周后测量幼苗根长度并进行统计分析。 对于每个样品，用于JA处理分析的生物重复不少于3次，并且对于每个试验重复不少于3次。

1.3 花青素含量的测定

为了测量花青素含量，在包含100 μmol·L1 MeJA 的MS琼脂培养基表面生长的7 d龄幼苗WT和hda194/5/6和myc234[在称重W（g）]各加入1 mL盐酸甲醇提取物（甲醇∶盐酸体积比为99∶1），保持在4 ℃暗处并连续振荡24 h。13 000 r·min1离心10 min，取浸出液在530 nm波长和600 nm波长处测量吸光度，花色素苷的相对含量用公式（OD5300.25×OD600）/W计算。

1.4 RNA提取和qRTPCR

使用Trizol试剂（Invitrogen）从拟南芥幼苗中提取总RNA。如Hu et al（2012）所述进行qRTPCR。简言之，第一链cDNA使用具有oligo（dT）18引物的MMu LV逆转录酶（Fermentas），其在20 mL反应体系中由1.5 mg DNA酶处理的RNA合成。在Roche Light Cycler 480实时PCR仪上，根据制造商的说明书使用2×SYBR Green I master mix进行qRTPCR。在本研究中，每个样品用于qRTPCR分析的生物学重复多于3次， 并且对每

个生物学重复分析至少有两个技术重复。拟南芥ACTIN2基因用作基因表达的内部对照。用于检测转录物的基因特异性引物，见表2。

1.5 病原体感染试验

如先前所述，B. cineara在2×V8琼脂上生长（Mengiste et al，2003）。为了感染植物，从10 d龄的真菌培养物收集分生孢子，并在Sabouraud Maltose Broth中调节孢子密度，使用Preval喷雾器喷雾。将接种的植物在生长室中保持在黑暗高湿度下，并观察从3～5 dpi的症状发展。通过从接种的植物分离的总RNA的qRTPCR定量真菌病原体的生物量。

1.6 统计分析

基于通过Sigma Plot 10.0计算的Students检验的统计学显著性差异（*P<0.05，或**P<0.01，***P<0.001）数据是五个独立实验重复的平均值 ± 标准差。

1.7 登录号

本研究讨论的拟南芥基因组基因登录号如下：HDA19，AT4G38130； MYC2，AT1G32640； MYC3，AT5G46760； MYC4，AT4G17880； LOX2，AT3G45140； LOX3，AT1G17420； JAZ1，AT1G19180； DFR，AT5G42800 UF3GT，AT5G54060； VSP1，AT5G24780； VSP2，AT5G24770； ERF1，AT3G23240； JR1，AT3G16470； PR4，AT3G04720； PR5，AT1G75040； PDF1.2，AT5G44420； Thi2.1，AT1G72260和ACTIN2，AT3G18780。

2结果与分析

2.1 HDA19不参与JA调节的根长反应

HDA19是受植物激素信号JA的诱导表达的，我们怀疑hda19是否具有典型的JA根长反应。和不含MeJA的1/2 MS培养基上生长的幼苗相比，在含有MeJA的1/2MS培养基上生长的野生型拟南芥幼苗具有典型的根长变短的表型。功能缺失的JA相关突变体如coi12和myc2对MeJA信号不敏感，在含有JA的条件下根长并没有受抑制，显示出了比WT显著变长的根长表型。

为了检测hda19突变体是否影响JA信号传导过程，我们在同一批次中收获hda194，hda195和hda196种子，播种到具有不同MeJA浓度的1/2MS培养基表面，Columbia生态型背景野生型种子WT和myc234三突变体擬南芥种子作为对照。结果表明，三种不同的突变株hda194、hda195和hda196与野生型一样对JA信号敏感（图1）。同时，对不同浓度下幼苗的根长进行了统计分析，hda194，hda195，hda196和WT相比没有显著差异，但它们与myc234的根长有显著差异（图2）。本研究重复6次，每次都得到相同的实验结果。

2.2 hda19的花色素含量明显高于myc234

JA浓度增加能诱导植物体积累大量的花色素苷，表现为植物体颜色加深，植株显示出紫红色的表型。本研究测量了不同JA处理时间hda19突变体株系体内的花色素苷含量。结果表明hda194，hda195，hda196的花青素含量显著高于myc234，但hda194，hda195，hda196的花色苷含量与WT差异并不不显著（图3：A）。为在分子水平上验证这一结果，我们对拟南芥花青素生物合成基因UF3GT，DFR的表达量进行qRTPCR分析。分别对用100 μmol·L1 MeJA处理的7 d龄幼苗hda194，hda195，hda196，WT，myc234在不同处理时间进行采样。在hda194，hda195，hda196和WT中花青素生物合成基因的转录水平显著高于myc234，但是hda194，hda195，hda196与WT相比，花青素生物合成基因在幼苗中的表达差异并不显著。定量结果与本研究观察到的表型结果一致，该实验重复了至少3次（图3：B）。

2.3 hda19突变体中的JA下游基因表达量显著增加

在这些突变体中，测定了JA信号传导途径中标记基因的表达水平。对不同处理时间100 μmol·L1 MeJA处理的7 d龄的hda194，hda195，hda196，WT，myc234幼苗进行取样，提取这些样品的RNA，并通过qRTPCR测量它们JA相关标记基因的相对表达。图4显示在hda194，hda195和hda196中的JA合酶基因LOX2和LOX3表达水平显著高于WT和myc234中的表达水平，并且在myc234三突变体中，LOX2和LOX3的转录水平最低。 JAZ1的转录水平与LOX2和LOX3的表达情况相似。 JAZ1是MeJA信号存在后JA信号通路开始转导的标志。 JAZ1基因表达的显著增加表明hda194、hda195和hda196突变体内的JA信号通路被激活，这意味着JA下游的调节基因将发生转录水平的增加或降低。另外，在hda194/5/6中VSP1基因的表达也显著高于WT和myc234。这表明hda19突变体中的防御反应开启且高于WT中相关基因的表达水平。

2.4 HDA19功能的丧失增强了拟南芥对Botrytis cineara的基础防御

为检查HDA19是否在植物的基础防御过程中起作用，使用hda194，hda195，hda196，WT来观察用营养性坏死真菌B. cinerea处理下它们的表型情况。将这些拟南芥的种子用20%消毒剂灭菌，然后播种至0.7%Ager含量的1/2MS培养基表面，在4 ℃保持3 d，然后置于短日照条件下发芽生长7 d，并移植到灭菌的土壤中，培养在恒温21 ℃的短日培养室生长至4周龄。选择生长状态一致的幼苗进行B. cinerea侵染处理。

用含有tuwen80的SMB培养基悬浮新培养的B. cinerea孢子，并将孢子浓度调整为5×104个/mL用于幼苗处理。将孢子均匀地喷洒在植物叶片的表面上，然后置于高湿度和黑暗条件下培养3 d，以观察叶表面上的菌斑生长情况。从图5：A可以看出，在相同的处理条件下，与所有WT死亡的情况相比，hda194、hda195、hda196突变体对B. ci

2.5 HDA19功能丧失使抗病相关基因上调表达

为了在分子水平上观察到表型结果，检测了处理植株叶片中βtubulin的表达量， βtubulin是B. cineara菌丝体生长量的标记基因。我们在不同的处理时间取样，用未处理的突变体和WT作为对照。从图6可以看出，hda194、hda195、hda196中的βtubulin表达水平显著低于WT，表明菌株菌丝体在WT中快速生长，而在hda194/5/6植物体内生长受阻，表明HDA19损失功能突变增强拟南芥对B. cineara的抗性。此外，还测量了下游标记基因PDF1.2、Thi2.1、ERF1、VSP2、PR5等的表达，如图7所示，这些基因在hda194、hda195和hda196中的表达水平，3个hda19突变株系中抗性基因的表达量明显高于野生型。这进一步证实，hda19突变体表现出对真菌B. cineara的抗性比WT更强，且暗示HDA19在拟南芥中对病原体胁迫响应的负调节作用。

3讨论与结论

在本研究中， HDA19属于拟南芥的组蛋白脱乙酰酶家族的第二亚家族成员，并且据报道它参与到了对细菌DC300的抗性反应中（SunMee et al，2012）。HDA19也参与其他生物或非生物胁迫反应以及植物激素JA/SA/ET等的信号转导（Zhou et al，2005），但具体的调节机制尚未阐述清楚。已经报道HDA19确实参与JA信号转导过程，我们就怀疑HDA19突变体是否有经典的JA根长反应。本研究使用3个具有不同插入位点的hda19 TDNA纯合突变体作为对象，来观察当用JA处理时它们根长度的变化，结果表明在相同的处理条件下，hda194/5/6的根长不显著短于或长于野生型，根长的统计学分析也得到了同样的结论。另外，本研究还测试了该突变体株系中的花色素苷的含量，结果显示与WT相比，hda194/5/6中的花青素含量没有显著变化。同时还进行了JA下游标记基因表达水平的定量分析，以观察hda194/5/6在分子水平是否会响应JA信号。花青素合成酶基因UF3GT和DFR的转录水平与WT在不同处理时间的转录水平没有显著差异。本研究中JA合成相关基因 LOX2和LOX3的表达水平在hda194/5/6中比WT中高得多，表明hda194/5/6突变体中的JA合成将显著增加，相应的JA信号传导途径也被强烈激活引起下游JA相关通路的转导激活或抑制。 hda194/5/6中JAZ1和VSP2的转录水平显著高于WT。这些基因的转录使我们更加确信植物中的JA信号传导途径被激活，并启动一系列HDA19突变的JA应答基因的转录改变。

早在2005年就有HDA19能由JA信号诱导表达的报道（Zhou et al，2005）。据报道，HDA19参与植物对细菌Pst. DC3000的防御功能的调控，我们怀疑其是否参与植物对真菌的抗性过程。在4周龄的hda194/5/6和WT幼苗上均匀喷洒新培养的B.cineara的孢子（Song et al，2005； Chen & Wu，2010；Choi et al，2012），并在黑暗和潮湿的环境中处理3 d后观察叶片表面菌斑的生长情况。

本研究在相同的处理条件下，WT植物的所有叶片均已死亡，且只有hda194/5/6的叶片表面没有或只有少量的菌斑。与WT对照组相比，hda194/5/6叶片上斑块的数量和大小显著减少，这些突变体中的B. cineara菌丝的生长受到严重抑制。在這些处理的植物中βtubulin的转录水平的定量分析显示，与WT相比hda194/5/6突变体内的βtubulin的转录水平显著降低。 HDA19的功能缺失突变增强拟南芥对真菌B.cineara的抗性。为了观察HDA19突变体中分子水平的表达变化，我们在不同的MeJA处理时间点对JA和抗病性相关的下游标记基因进行了qRTPCR分析。与WT相比，hda194/5/6突变体中Thi2.1，PDF1.2，VSP2，ERF1和PR5的转录水平显著提高。这些标记基因的定量结果还显示了HDA19在分子水平上在植物对真菌感染的抗性的负调节中的作用。基于上述的研究结果，本研究推测HDA19通过JA信号来负调控拟南芥对真菌B. cineara的抗性反应。

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