紫外分光光度法测定陈皮类茶饮料的酶解效果

李循则 郭乃菲 江科新 王雪 李思洁

摘要 [目的]使用紫外分光光度测定陈皮类茶饮料的酶解效果。[方法]全波长扫描，确定陈皮类茶饮料样品的吸收峰，再用紫外分光光度法确定样品OD值并换算出T值，研究酶解效果。[结果]方法精密度的相对标准偏差为0086%，方法稳定性的相对标准偏差为0210%，灵敏度比感官评价至少高125倍。[结论]用紫外分光光度法研究酶解效果的方法具有较好的精密度、较高的灵敏度和较好的稳定性。

关键词 紫外分光光度法；陈皮；橙皮苷；准确度；精密度

中图分类号 S-03 文献标识码 A 文章编号 0517-6611（2017）29-0015-03

Enzymes Effect of Dried Tangerine or Orange Peel Tea by Ultraviolet Spectrophotometry

LI Xunze，GUO Naifei，JIANG Kexin et al

（College of Pharmacy， Liaoning University of Chinese Medicine， Dalian， Liaoning 116600）

Abstract [Objective] The aim was to determine enzymes effect of dried tangerine or orange peel tea by ultraviolet spectrophotometry. [Method] Full wavelength scanning was used to determine the absorption peak of the dried tangerine or orange peel tea drinks， and then the sample OD value was determined by UV spectrophotometry， and figured out T value. [Result]The relative standard deviation of the stability of the method was 0.086%；the RSD relative standard deviation of the stability of the method was 0.210%， and the sensitivity was higher than sensory evaluation at least 125 times. [Conclusion] Effect of enzyme solution is studied with UV spectrophotometry， and the method has good precision， high sensitivity and good stability.

Key words Ultraviolet spectrophotometry；Dried tangerine or orange peel；Orange peel glucoside；Accuracy；Precision precision

作者簡介 李循则（1995—），女，辽宁沈阳人，本科生，专业：食品质量与安全。

收稿日期 2017-07-14

陈皮又称橘皮，为芸香科植物橘及其栽培变种的干燥成熟果皮。其味苦、辛，性温，归肺、脾经，功效为理气健脾、燥湿化痰，主治脘腹胀满、食少吐泻、咳嗽痰多。陈皮类茶饮料常常出现白浊现象[1-3]，虽然不影响其食用价值，但对食品质量造成消费者不可接受的感官效果，因而降低产品合格率与产品价值，甚至造成经济损失，故需研究改进并解决陈皮类茶饮料中出现的白浊现象。常用酶解法去除陈皮类茶饮料的白浊现象[4-5]，但其酶解效果的评价通常使用感官评价的方法[6-7]，由于人眼能力有限，所以方法的灵敏度较低。为有效解决这一问题，笔者使用紫外分光光度法测定了陈皮类茶饮料的酶解效果。

1 材料与方法

1.1 材料

陈皮购自大连开发区阳光大药房；果胶酶、纤维素酶、橙皮苷酶、胰蛋白酶均由南京奥多福尼生物科技有限公司提供；纯净水为市售。

FA1204B精密电子天平，上海精科天美科学仪器有限公司；HC-2062高速离心机，安徽中科中佳科学仪器有限公司；C21-WK2102电磁炉，广东美的生活电器制造有限公司；UV1500紫外分光光度仪，AOE仪器（上海）有限公司；U3010紫外分光光度儀，日力公司。

1.2 方法

1.2.1 陈皮处理方法。

称取40 g陈皮和1 200 mL纯净水（分3次倒入，每次400 mL）放入锅中进行蒸煮，煮制30 min，剩水量为400 mL，抽滤，冷藏24 h备用。

1.2.2 紫外分光光度法测定陈皮水解效果的方法学研究。

1.2.2.1 紫外扫描法测定样品最大吸收峰。

用紫外分光光度仪对陈皮样品在200～500 nm进行扫描[8-10]，得到样品的最大吸收峰。

1.2.2.2 方法原理。

借鉴微生物学上微生物生长曲线中吸光度与微生物浓度的关系[11-13]，OD值越大悬浮微生物越多，在微生物学上用干重、湿重与OD值的关系来制作微生物的生长曲线，干重、湿重的值与OD值是成正比，所以干重、湿重值越大说明微生物越多，反映微生物所处的生长状态，由此可以说明OD值越大，培养基就越浑浊。

在陈皮类茶饮料中，经常会出现白浊现象，一般使用酶解方法解决白浊现象，用感官评价的方法进行判定，产品的透明度越好说明酶解效果越好。感官评价上的澄清效果即为紫外分光光度法的OD值，所以借鉴微生物学研究中干重、湿重与OD值的关系来说明微生物生长情况的原理，应用到研究橙皮苷的酶解效果上是可行的。若OD值越大说明沉淀越多，酶解效果越差。为了结果表达的更直观，采用以下公式：A=-logT，式中，A为OD值；T为透光率（%）。

1.2.2.3 方法的建立。

以果胶酶为例，研究果胶酶的酶解时间、酶用量、酶解温度与干重和湿重关系。

（1）酶解温度。采用“1.2.1”方法处理陈皮，抽滤，pH 50，酶用量为陈皮用量的3.0%，分别置于35、40、45、50、55、60 ℃恒温水浴锅中酶解45 min，煮沸20 min灭酶，然后抽滤。在310 nm波长处测定OD值，离心弃去上清液，放入恒温干燥箱，干燥5 h后测定湿重，然后继续干燥直至水分完全蒸干，测量干重。

（2）酶用量。将酶用量分别设定为陈皮用量的0、 050%、0.75%、1.50%、3.00%、4.50%、6.00%，55 ℃水浴，其他条件同“1.2.2.3”（1）。

（3）酶解时间。将酶解时间设定为10、20、30、45、60、90 min，酶用量为陈皮用量的3.0%，55 ℃水浴，其他条件同“1.2.2.3”（1）。

1.2.2.4 方法的灵敏度考察。

在不同酶解温度条件下对“1.2.1”处理后的陈皮样品进行感官评价。感官评分见表1。

以“1.2.2.3”反应条件处理样品，对样品进行稀释，稀释倍数为125倍，采用紫外分光光度计，在310 nm波长处测定样品的OD值，并换算成T值。

1.2.2.5 方法的稳定性考察。

以“1.2.2.3”反应条件处理样品，灭酶后1 h测定一次样品OD值，并换算成T值，求相对标准偏差。

1.2.2.6 方法的精密度考察。

以“1.2.2.3”反应条件处理样品，采用所建立的紫外检测方法进行精密度测定，计算出相对标准偏差（n=6）[14-16]。

2 结果与分析

2.1 紫外扫描法测定样品最大吸收峰

由图1可知，在280 nm 左右波长处有1个吸收峰，但该峰为蛋白质的常见特征吸收峰，不能作为陈皮样品的吸收峰，而在310 nm波长处出现一组吸收峰，为陈皮样品的吸收峰，所以陈皮样品的OD值为310 nm。

2.2 紫外分光光度法测定陈皮水解效果的方法学研究

2.2.1 方法的建立。

2.2.1.1 酶解温度。

由图2可知，T值随酶解温度的升高先增大后减小，随着温度的升高，当温度超过50 ℃时酶逐渐失活，酶解效果也随之下降，故T值也随之下降，离心干燥后的干重、湿重也随之增大。

2.2.1.2 酶用量。

由图3可知，T值随酶用量的升高先增大后减小，随着酶用量的增加，样品溶液达到饱和而析出变成沉淀，影响酶解效果，使得酶解效果降低，故T值也会随之下降，离心干燥后的干重、湿重也会随之增大。

2.2.1.3 酶解时间。

由图4可知，T值随酶解时间的升高先增大后减小，酶解时间超过20 min后，可能由于样品中的杂质析出，导致酶解效果降低，故T值也随之下降，离心干燥后的干重、湿重也会随之增大。

2.2.2 方法的灵敏度。

由图5可知，感官评价的分数随温度的上升呈先上升后下降的趋势，在50 ℃感官评价的分数最高为4.5。将不同酶解温度下的样品稀释125倍后，用紫外分光光度法测定。T值随温度的上升先上升后下降，在50 ℃时T值最大。2条曲线趋势相近，说明紫外分光光度法的灵敏度比感官评价法的灵敏度至少高出125倍。

2.2.3 方法的稳定性。

50 ℃酶解条件下的相对标准偏差（n=6）为0061 4%，说明试验重复性良好。

2.2.4 方法的精密度。

6次平行试验的相对标准偏差为0043%，说明试验精密度良好。

3 结论与讨论

目前对陈皮酶解程度的研究大多是研究橙皮苷的提取

率。而该研究的创新性是借鉴微生物学上微生物生长曲线

中吸光度与微生物浓度的关系，通过紫外分光光度法研究T

值与酶解效果的关系。对该方法进行方法学研究，得出该方法有一定的可行性，方法的重复性好、精密度高。目前，采用紫外分光光度法测定酶解效果的研究鲜见报道，大多研究采用的是感官评价[6-7]或提取率[17]进行酶解效果评价，但是感官评价本身存在很大的误差，容易影响判断结果，采用提取率研究的方法成本较高、操作复杂，而紫外分光光度法操作简便且精确度高，弥补了上述2种试验方法的不足。

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